本发明专利技术公开了U0126作为ADH激动剂的应用，具体涉及U0126对HepG2细胞ADH蛋白表达的影响。本发明专利技术采用不同浓度的U01216对细胞进行干预，通过蛋白翻译水平评价ADH的表达程度。结果表明U0126对ADH有明显的促进作用。表明U0126对ADH有明显的促进作用。表明U0126对ADH有明显的促进作用。
【技术实现步骤摘要】
U0126作为ADH激动剂的应用
[0001]本专利技术属于U0126作为ADH激动剂的新用途以及其通过激活ADH诱导增加体内酒精代谢的的应用。
技术介绍
[0002]乙醇脱氢酶ADH在酒精代谢中发挥着重要作用，乙醇在该酶的作用下，会被机体代谢成乙醛，最终转化成CO2和H2O。研究表明酒精代谢能力强的人，体内ADH的表达水平高，尽快将酒精代谢掉，就能很大程度上减少酒精带来的机体损伤，这在临床上有很重要的研究意义。
[0003]U0126作为ERK信号通路的抑制剂，选择性抑制ERK1/2的磷酸化。ERKs接受上游的级联反应信号,具有广谱的抗病毒活性，据报道U0126不仅可以降低体外和体内的病毒滴度，还能减少促炎症细胞因子的表达。U0126是否能调节ADH表达水平，进行影响酒精代谢，还未有报道。
技术实现思路
[0004]本专利技术的目的就在于为了解决上述问题而提出了一种U0126作为ADH激动剂的应用。
[0005]根据本专利技术实施例的U0126作为ADH激动剂的应用，U0126的化学结构式为：
[0006]本专利技术的有益效果是：本专利技术通过蛋白印迹法检测U0126处理的HepG2细胞中的ADH蛋白的表达情况，我们的结果显示U0126对ADH蛋白有明显的促进作用。
附图说明
[0007]图1为U0126的化学结构；
[0008]图2为蛋白质免疫印记法检测细胞中ADH蛋白表达水平；
[0009]图3为对照组蛋白显著性分析相比图。
具体实施方式
[0010]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他
实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0011]下面参考附图描述根据本专利技术实施例的U0126作为ADH激动剂的应用。
[0012]本次实验采用蛋白质免疫印记法检测U0126对ADH蛋白表达的影响。
[0013](1)细胞培养：用含10％胎牛血清的MEM完全培养基培养HepG2肝癌细胞，将细胞放入37℃、5％CO2培养箱培养。当HepG2细胞密度达到90％左右时，抽走培养液，用PBS浸洗三次，而后弃PBS，加入0.25％胰酶消化细胞，放显微镜下观察，当细胞回缩变圆时，及时抽走胰酶，迅速加入PBS液终止消化。用移液枪吹下HepG2细胞，将这一步获得的细胞悬液转移至15mL离心管中，800rpm条件下离心2分钟。此时会出现分层，上层为培养液，下层是细胞，弃上层培养液，并用1ml新培养基重悬细胞，进行细胞计数，接种于6孔板中培养，每孔接种5*10^6个细胞。24小时后倒置显微镜下观察，HepG2细胞是方形，待细胞长势良好的时进行加药处理。
[0014](2)细胞蛋白提取
[0015]采用灭菌的PBS冲洗细胞，而后向6孔板的每孔中加入200μL蛋白裂解液(lysis)，置于水平摇床上剧烈摇晃2min；将细胞吹下，转移到1.5mL离心管中，用涡旋振荡器震荡细胞后在冰上静置10分钟，期间再震荡一次，最后再次震荡后置于4℃离心机内，1200rpm/min离心10min，将离心得到的上清转移到新的1.5mL离心管中，置于
‑
20℃冰箱内保存备用。
[0016](3)BCA法测定蛋白浓度
[0017]试剂A配制：
[0018][0019]试剂B配制：0.4g CuSO4粉末溶解在10ml dH2O中。
[0020]①
蛋白标准品为BSA，浓度为0.1～0.5mg/ml。
[0021]②
混合BCA工作液：A:B＝50：1。
[0022]③
1.5mlEP管加入200μl BCA混合液，再加入20μl BSA标准品或适当稀释的样品，分组如下：
[0023]标准曲线样品平行一平行二平行三
[0024]混匀，离心操作后，置于60℃金属浴反应20min。
[0025]④
冷却后，将样品至于酶标仪上。测量562nm的吸光值，计算样品浓度。
[0026](4)Western blot
[0027]1)配胶
[0028][0029]2)制备蛋白样品
[0030]按照步骤(3)所测得的浓度计算设置一个统一的上样量，并用lysis将各样品补齐到统一的体积后，加入5
×
loading buffer，震荡混匀并离心，置于100℃金属浴上煮沸5min，离心后震荡混匀，再次离心。
[0031]3)凝胶电泳
[0032]安装好电泳装置，将预冷的1
×
电泳缓冲液加入到电泳槽中，再用移液器将上步所得的蛋白样品加入浓缩胶孔中，在124V恒定电压下电泳90分钟。
[0033]4)转膜电泳
[0034]安装转膜装置，三明治结构，置于磁力搅拌器上，100V定压转膜60min。
[0035]5)封闭
[0036]依照蛋白Maker将NC膜剪成适当的大小，封闭液为5％脱脂牛奶，置于水平摇床上，在室温下缓慢震荡封闭1h。
[0037]6)抗体孵育
[0038]吸去牛奶，用PBS清洗条带，加入相应的一抗，置于4℃冰箱中的摇床上缓慢震荡孵育过夜；孵育完成后回收一抗，用含0.5％Tween 20的1
×
PBST洗膜3次，每次8min；
[0039]洗完后加入二抗，置于水平摇床上，在室温下缓慢震荡。孵育1h；回收二抗，1
×
PBST洗膜3次，每次8min。
[0040]7)ECL检测
[0041]将ECLA液和B液按1:1比例混匀，滴到NC膜上，拍照成像。
[0042]根据本专利技术实施例的的U0126作为ADH激动剂的应用，采用不同浓度的U01216对细胞进行干预，通过蛋白翻译水平评价ADH的表达程度。结果表明U0126对ADH有明显的促进作
用。有望成为ADH的激动剂用于科学研究以及药物临床。
[0043]对于本领域技术人员而言，显然本专利技术不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本专利技术的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本专利技术。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本专利技术的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本专利技术内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。
[0044]此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.U0126作为ADH激动剂的应用，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨潇潇，高永耀，韩际宏，段亚君，陈元利，
申请(专利权)人：合肥工业大学，
类型：发明
国别省市：
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