【技术实现步骤摘要】
一种通过改造半乳糖启动子构建高产CBGA合成的酵母菌株及其构建方法和应用
[0001]本专利技术属于合成生物学
，通过基因工程，将半乳糖启动子进行改造，获得一株高产CBGA的重组酿酒酵母菌株，本专利技术涉及酵母菌株中半乳糖启动子改造构建及其构建方法和应用。
技术介绍
[0002]酿酒酵母中参与半乳糖代谢的有关GAL基因的转录是被紧密调控的,它们在没有半乳糖或有葡萄糖的培养条件下不被表达，而在葡萄糖被耗尽，半乳糖存在条件下，其表达水平可提高约1000倍[1,2]，半乳糖启动子gal1是分子生物学中对基因进行过表达非常常见的可诱导的强启动子。但是受半乳糖诱导表达调控的改造菌株培养通常需要以最适合菌株生长的碳源—葡萄糖条件下培养至高浓度，然后切换至半乳糖进行诱导表达目的基因，而不同碳源切换培养会出现生长延迟，同时，半乳糖作为碳源被菌体消耗后，降低其诱导作用，需不断补加以维持其诱导作用，且半乳糖价格相对葡萄糖高出很多，大规模培养菌株的过程会极大增加成本。
[0003]已有研究发现，将半乳糖启动子进行改造，使gal1启动...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种通过改造半乳糖启动子构建高产CBGA合成的酵母菌株的构建方法，其特征在于，所述方法包括：步骤01、构建酿酒酵母菌株yG003,将酿酒酵母菌株yG003中的半乳糖启动子相关的gal80敲除，得到酿酒酵母菌株yG004；步骤02、在酿酒酵母菌株yG004基础上进行半乳糖启动子改造，敲除gal1/10/7，保护敲除gal80和gal1/10/7，得到酿酒酵母菌株yG006；步骤03、在酿酒酵母菌株yG006基础上进行半乳糖启动子改造，敲除mig1，保护敲除gal80、mig1和gal1/10/7，得到酿酒酵母菌株yG007。2.根据权利要求1所述的通过改造半乳糖启动子构建高产CBGA合成的酵母菌株的构建方法，其特征在于，所述步骤01包括：步骤11、以酿酒酵母菌株cen.pk2
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1c的基因组为模板，通过引物Fgal80
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Up和Rgal80up(Dp)将PCR扩增得到gal80位点上游同源臂片段gal80
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Up；通过引物Fgal80Dp和Rgal80Dp(UP)将PCR扩增得到gal80位点下游同源臂片段gal80
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Down。PCR条件：40cycle，PCR反应体系均为50ul：2xphanta酶25ul，F
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primer1.25ul，R
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primer1.25ul，DNA模板1ul，ddH2O21.5ul；步骤12、以酿酒酵母菌株cen.pk2
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1c的基因组为模板，通过PCR扩增得到gal80位点下游同源臂片段gal80
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Down；步骤13、以可识别并切割位gal80点的pCUT
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gal80(Ura)质粒为工具质粒；步骤14、将gal80
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Up、gal80
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Down、pCUT
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gal80(Ura)质粒作为插入片段转化至酿酒酵母中，获得敲除gal80的重组酿酒酵母。3.根据权利要求1所述的通过改造半乳糖启动子构建高产CBGA合成的酵母菌株的构建方法，其特征在于，所述步骤02包括：步骤21、以酿酒酵母菌株cen.pk2
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1c的基因组为模板，通过引物FUp_Gal1和RUp_Gal1(Dp)将PCR扩增得到gal1/10/7位点上游同源臂片段gal1/10/7
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Up；通过引物FDp_Gal(Up)和RDp_Gal将PCR扩增得到gal1/10/7位点下游同源臂片段gal1/10/7
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Down片段；步骤22、以可识别并切割位点gal1/10/7的pCUT
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gal1/10/7...
【专利技术属性】
技术研发人员：张云丰，罗小舟，
申请(专利权)人：森瑞斯生物科技深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：
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