一种独特基因缺失组合的PRVΔgE/TK/UL56/US3四基因缺失株及其应用制造技术

本发明专利技术属于基因工程技术和病毒学技术领域，具体涉及一种独特基因缺失组合的PRVΔgE/TK/UL56/US3四基因缺失株及其应用。该四基因缺失株是通过缺失伪狂犬病病毒的gE基因、TK基因、UL56基因和US3基因后得到的，具体是先制备PRVΔgE/TK/UL56三基因缺失株，然后通过同源重组技术、Cre

【技术实现步骤摘要】
一种独特基因缺失组合的PRV
Δ
gE/TK/UL56/US3四基因缺失株及其应用


[0001]本专利技术属于基因工程技术和病毒学
，具体涉及采用同源重组技术、Cre
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LoxP系统构建PRVΔgE/TK/UL56/US3四基因缺失株，还涉及该基因缺失毒株在防控猪伪狂犬病中作为疫苗的应用。

技术介绍

[0002]伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)属于疱疹病毒科(Herpesviridae)α疱疹病毒亚科(Alpha Herpesririnae)。猪是其自然宿主，可引起妊娠母猪流产、种猪不育、新生仔猪腹泻和神经系统症状。机体耐过PRV急性感染后，其病毒颗粒可在宿主三叉神经节建立长期潜伏感染而终身带毒。当受到外界应激或刺激时，体内潜伏的病毒粒子可重新被激活，造成复发性感染。该病目前尚无有效的药物可以进行治疗，疫苗免疫接种仍是预防和控制该病发生和流行的主要措施。随着PRV基因缺失疫苗(Bartha
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K61)的引入接种使用加上科学严格的规模化养殖，使得该病在一定程度上本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种猪伪狂犬病病毒基因缺失毒株，其特征在于，所述基因缺失毒株为缺失了gE基因、TK基因、UL56基因和US3基因的四基因缺失株PRVΔgE/TK/UL56/US3。2.根据权利要求1所述的一种猪伪狂犬病病毒基因缺失毒株，其特征在于，所述PRVΔgE/TK/UL56/US3的保藏编号为：CGMCC No.22936。3.权利要求1所述的猪伪狂犬病病毒基因缺失毒株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)PRVΔgE/TK/UL56三基因缺失株的构建：转移载体pSK
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UL56
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LR
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EGFP构建：扩增PRV UL56基因左右侧基因序列作为同源重组的UL56基因左右侧同源臂，扩增EGFP荧光蛋白序列作为标记基因，将UL56基因左右侧同源臂和EGFP荧光蛋白序列分别经双酶切至线性片段，依次插入同样双酶切处理的线性载体pBluescript SK(
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)内，获得转移载体命名为pSK
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UL56
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LR
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EGFP；重组病毒PRVΔgE/TK/UL56/EGFP
+
的获得以及荧光标签的剔除：采用脂质体转染法将重组质粒pSK
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UL56
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LR
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EGFP和PRVΔgE/TK基因组共转染至293T细胞内，通过蚀斑筛选获得重组病毒PRVΔgE/TK/UL56/EGFP
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；随后将pcGlobin2
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Cre质粒和PRVΔgE/TK/UL56/EGFP
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基因组共转染至293T细胞内，通过蚀斑筛选获得重组病毒PRVΔgE/TK/UL56；(2)PRVΔgE/TK/UL56/US3四基因缺失株的构建：转移载体pSK
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US3
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LR
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EGFP构建：扩增PRV US3基因左右侧基因序列作为同源重组的US3基因左右侧同源臂，扩增EGFP荧光蛋白序列作为标记基因，将US3基因左右侧同源臂和EGFP荧光蛋白序列分别经双酶切至线性片段，依次插入同样双酶切处理的线性载体pBluescript SK(
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)内，获得转移载体命名为pSK
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US3
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LR
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EGFP；重组病毒PRVΔgE/TK/UL56/US3/EGFP
+
的获得：采用脂质体转染法将重组质粒pSK
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US3
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LR
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EGFP和PRVΔgE/TK/UL56基因组共转染至293T细胞内，通过蚀斑筛选获得表达绿色荧光蛋白的重组病毒PRVΔgE/TK/UL56/US3/EGFP
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；重组病毒PRVΔgE/TK/UL56/US3/EGFP
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荧光标签的剔除：采用脂质体转染法和Cr...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈陆，邓梦梦，王永生，杜季梅，丁晨梦，杨霞，王新卫，高冬生，郭占达，王川庆，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：