一种促进桂花挥发性有机物质合成相关OfMYB1R47基因及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种促进桂花挥发性有机物质合成相关OfMYB1R47基因及其应用，属于植物分子生物学领域。该OfMYB1R47基因是一种MYB1R转录因子基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；其表达蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明专利技术通过克隆得到基因序列的全长，并构建了超表达载体并进行本氏烟草的瞬时转化。结果发现，瞬时转化植株的桂花主要挥发性有机物β

【技术实现步骤摘要】
一种促进桂花挥发性有机物质合成相关OfMYB1R47基因及其应用


[0001]本专利技术属于植物分子生物学领域，具体涉及一种促进桂花挥发性有机物质合成相关OfMYB1R47基因及其编码蛋白和应用。

技术介绍

[0002]桂花(Osmanthus fragrans)，木犀科木犀属常绿阔叶观赏树种，素以香花著称。桂花的寿命长，适应性广，广泛分布于多个城市。MYB
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related(简称MYB1R)转录因子家族是植物特有的一类转录因子家族，参与了次生代谢产物合成、细胞形态发生调控、细胞扩张、周期蛋白转录调控、下胚轴伸长和叶片衰老等过程，对植物的发育过程有十分重要的生物学意义。相关研究表明，MYB1R转录因子可以调控花青素和类黄酮等次生代谢产物的合成。前人对R2R3型MYB转录因子在调控桂花花香物质合成的过程进行了大量的研究工作，并取得了一定的成果。但同样为MYB家族的重大成员，MYB
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related亚家族调控桂花花香物质合成的研究还未见报道。因此，研究发掘桂花基因组中调控花香物质合成的重要相关基因具有重要意义，此举将为后期桂花优良品质繁育及提升桂花观赏性状具有重要的促进作用。

技术实现思路

[0003]针对现有技术存在的上述问题，本专利技术所要解决的第一技术问题在于提供一种促进桂花挥发性有机物质合成相关OfMYB1R47基因；本专利技术所要解决的第二技术问题在于提供促进桂花挥发性有机物质合成相关OfMYB1R47基因的表达蛋白；本专利技术所要解决的第三技术问题在于提供OfMYB1R47基因在桂花育种及促进桂花挥发性有机物质合成中的应用。
[0004]为了解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案如下：
[0005]一种促进桂花挥发性有机物质合成相关OfMYB1R47基因，是一种MYB1R转录因子基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0006]所述的促进桂花挥发性有机物质合成相关OfMYB1R47基因的表达蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0007]含有所述的促进桂花挥发性有机物质合成相关OfMYB1R47基因的重组表达载体或重组菌株。
[0008]进一步的，含有促进桂花挥发性有机物质合成相关OfMYB1R47基因的重组表达载体为Super1300
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OfMYBlR47。
[0009]所述的促进桂花挥发性有机物质合成相关OfMYB1R47基因在桂花育种中的应用。
[0010]所述的OfMYB1R47基因在促进桂花挥发性有机物质合成中的应用，包括以下步骤：
[0011]1)构建含有如SEQ ID NO.1所示的OfMYB1R47基因的重组表达载体；
[0012]2)将步骤1)得到的重组表达载体转化农杆菌，得到重组农杆菌；
[0013]3)用重组农杆菌侵染植物，并进行挥发性有机物质的含量变化。
[0014]进一步的，农杆菌为农杆菌GV3101。
[0015]进一步的，植物为本氏烟草。
[0016]进一步的，通过将所构建的重组表达载体通过瞬时转化注射到本氏烟草叶片中，瞬时转化植株正常生长48h，采集瞬时转化植株叶片进行GC
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MS挥发性有机物质含量测定，检测瞬时转化植株与正常对照组的挥发性有机物质的含量变化。
[0017]相比于现有技术，本专利技术的有益效果为：
[0018]本专利技术提供的一种促进桂花挥发性有机物质合成相关OfMYB1R47基因，是一种MYB1R转录因子基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本专利技术通过克隆得到基因序列的全长，在此基础上构建了超表达载体并进行本氏烟草的瞬时转化。结果发现，瞬时转化植株的桂花主要挥发性有机物β
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紫罗兰酮的物质含量相较于对照组CK有显著上升，且其他物质含量也明显高于对照组CK的含量，表明OfMYB1R47在调控桂花花香物质方面发挥了重要作用。作为促进桂花挥发性有机物合成过程中重要转录因子OfMYB1R47基因，可用于桂花基因工程中提高观赏性状及遗传品质等繁育工作。
附图说明
[0019]图1为目的基因OfMYB1R47扩增产物琼脂糖凝胶电泳图；
[0020]图2为目的基因OfMYB1R47扩增片段与Super1300载体连接转化后阳性单菌落检测图；
[0021]图3为双酶切后的载体琼脂糖凝胶电泳图；
[0022]图4为转化农杆菌GV3101后的菌检琼脂糖凝胶电泳图；
[0023]图5为瞬时转化植株主要挥发性有机物质成分分析图；图中，横坐标的物质为VIP＞1且p＜0.05差异性显著的物质；
[0024]图6为瞬时转化植株半定量电泳图；图中，泳道L1
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L4为对照组瞬时转化植株，泳道L5
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L10为目的基因瞬时转化植株的条带。
具体实施方式
[0025]下面结合具体实施例对本专利技术进一步进行描述。以下实施例中，未详细叙述的操作均为常规生物学实验操作，可参照分子生物学实验手册以及现有公开的期刊文献等进行，或者按照试剂盒和产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0026]本申请所用材料为日香桂盛花期花朵，所用的本氏烟草实生苗由南京林业大学王良桂课题组提供。2021年6月，将瞬时超表达载体注射入生长健康35天的本氏烟草叶片中，注射后放置于生长室(日照：15/9h，144μmol
·
m
‑2·
s
‑1)，正常生长2天后，用无菌剪刀剪下注射过超表载体的叶片装入灭菌的离心管中，立即放入液氮中速冻，然后置于
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80℃冰箱内保存。
[0027]本实施例采用TIANGEN植物RNA提取试剂盒(DP432)提取植物总RNA。采用TaKaRa PrimeScript
TM RT Master Mix(Perfect Real Time)反转录试剂盒将所提取到的RNA反转录成cDNA，最后得到的cDNA加水稀释10倍后于
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20℃冰箱保存。
[0028]实施例1
[0029]一、构建桂花OfMYB1R47基因的超表达载体
[0030](1)获取目的基因
[0031]根据南京林业大学王良桂课题组已发表的桂花全基因组数据库(http：//117.78.20.255/)，筛选得到1个基因序列，与模式植物拟南芥的序列进行比对，判断该基因属于MYB
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related基因家族，根据该基因家族成员在染色体上的位置命名为OfMYB1R47。
[0032](2)设计引物
[0033]利用BioXM软件对该基因的核苷酸全长序列进行酶切位点分析，选择KpnI和SmaI作为限制性内切酶酶切位点。利用CE design软件设计引物。按要求进行相关信息的填写，具体包括1300载体上的酶切位点附近的序列、目的基因全长、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种促进桂花挥发性有机物质合成相关OfMYB1R47基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.权利要求1所述的促进桂花挥发性有机物质合成相关OfMYB1R47基因的表达蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.含有权利要求1所述的促进桂花挥发性有机物质合成相关OfMYB1R47基因的重组表达载体或重组菌株。4.根据权利要求3所述的含有促进桂花挥发性有机物质合成相关OfMYB1R47基因的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体为Super1300
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OfMYB1R47。5.权利要求1所述的促进桂花挥发性有机物质合成相关OfMYB1R47基因在桂花育种中...

【专利技术属性】
技术研发人员：王良桂，曾贵敏，田清尹，严欣，潘多，施婷婷，岳远征，杨秀莲，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：