一种基于模拟酶信号放大的多元SERS生物检测方法技术

本发明专利技术涉及生物材料检测的技术领域内一种基于模拟酶信号放大的多元SERS生物检测方法法，本发明专利技术的检测方法中依次制备多种不同编码的SiO2固相免疫基底、多种修饰不同抗体的金纳米粒子，再次两者混合制备多组份抗原标志物的三明治免疫夹心结构微球混合液，进行表面增强拉曼光谱检测，以进行多元SERS生物检测方。本发明专利技术的检测方法中，金纳米粒子具有优异的表面增强拉曼性能，且在过氧化氢的存在下可将非活性的拉曼报告分子氧化成活性的拉曼报告分子，从而双重增强表面增强拉曼探针的拉曼信号，进一步提高了检测灵敏度，通过二氧化硅光子晶体的编码/解码最终实现了对不同生物分子的多元检测，实现了高灵敏度的多元生物SERS检测。测。测。

【技术实现步骤摘要】
一种基于模拟酶信号放大的多元SERS生物检测方法


[0001]本专利技术涉及生物材料检测的
，特别涉及一种基于基于模拟酶信号放大的多元SERS生物检测方法。

技术介绍

[0002]表面增强拉曼散射（SERS）作为一种功能强大的高灵敏度的分析技术，它可以在不破坏样品，不需添加试剂的条件下进行检测，现已被利用在生物化学，化学分子检测，药物分析，生物检测等领域。多重免疫分析与传统的单分子免疫分析法相比，拥有着更高的样本容量、更少的样本消耗、更短的检测时间和更低的成本。多元生物分析方法在药物筛选技术、基因功能分析和生物分析临床诊断中有着广泛的应用前景。但功能单一的流动编码载体存在某些不足，如编码量少、不易分离、编码稳定性低等，因此研究人员通过利用不同材料的性能来拓宽流动编码载体的应用范围。随着纳米科学和材料制备技术的快速发展，SERS技术也在不断进步。但是，人们已不再满足于SERS基底材料单一的增强作用。因此制备一种高活性且可实现多元分析的SERS增强基底变得十分重要。
[0003]酶联免疫吸附法(ELISA)是一种灵敏度高、操作简单且特本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于模拟酶信号放大的多元SERS生物检测方法，其特征在于，包括如下步骤：1）制备SiO2固相免疫基底：1.1）分别取样不同编码的SiO2光子晶体编码微球，并加入H2SO4和H2O2混合溶液中，浸泡10～16h，滤出微球，用超纯水洗绦后，再用N2吹干得到修饰羟基基团的功能化微球，再向功能化微球中加入质量浓度为1% GPTMS的甲苯溶液，浸泡10～16h，使其硅烷化，再用甲苯和无水乙醇洗涤后用N2吹干，得到活化的不同编码的SiO2功能微球；1.2）按一种编码对应一种抗体分别配制：分别向活化的每一种编码的SiO2功能微球中加入浓度为0.5 mg/mL的相应抗体的磷酸盐缓冲溶液中，置于37℃摇床温浴2h，再转于4℃冰箱静置10～16 h，最后用磷酸盐缓冲溶液洗涤3次；加入1%牛血清蛋白室温下封闭2h以上，将封闭好的微球用磷酸盐缓冲溶液清洗并保存，分别得到不同编码的SiO2固相免疫基底；2）制备修饰抗体的金纳米粒子：将抗体浓度为0.5～2.5mg/mL的磷酸盐缓冲溶液与浓度为0.5 ～2.5mg/mL金纳米粒子的磷酸盐缓冲溶液混合，37℃下置于摇床中反应2 h，接着转于4℃冰箱静置过夜；加入质量浓度为1%牛血清蛋白溶液室温下封闭2 h，得到修饰抗体的金纳米粒子；3）多元SERS生物检测方法：分别配置一系列以磷酸盐缓冲液为溶剂的不同浓度的抗原混合溶液n份，将步骤1.2)中得到的每一种编码SiO2固相免疫基底分别同时与同一种浓度的抗原混合溶液按2～20 mg/mL比例混合，得到混合液A1，分别取样每一种浓度的抗原溶液重复配制得到混合液A2～An，温浴反应混合液后，分别加入步聚2）得到修饰抗体的金纳米粒子，分别形成三明治免疫夹心结构微球混合液，温浴反应后，用磷酸盐缓冲溶液冲洗3次，加入H2O2和拉曼报告分子TMB的混合溶液进行分子活化后，置于激光共焦拉曼光谱仪下，切换光路，通过金纳米粒子的双重SERS信号放大，对SiO2光子晶体编码微球表面的拉曼信号进行检测和解码，通过编码信息来确定待测生物分子抗原的种类，利用检测拉曼信号信息确定待测生物分子抗原的浓度。2.根据权利要求1所述的基于模拟酶信号放大的多元SERS生物检测方法，其特征在于，步骤 1.1）中H2SO4和H2O2按体积比为7：3～5混合，其中H2SO4的质量浓度为95～98%，所述SiO2光子晶体微球与H2SO4和H2O2混合溶液的用...

【专利技术属性】
技术研发人员：李娟，李佳音，刘祎婷，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：