金纳米颗粒和免疫检测试纸条制造技术

本发明专利技术公开了金纳米颗粒和免疫检测试纸条。本申请的第一方面，提供一种金纳米颗粒的制备方法，该制备方法包括以下步骤：取氯金酸与弱电离有机小分子混合，在70～100℃下反应，得到金纳米颗粒。申请人在实验过程中发现，柠檬酸钠等作为还原剂使用时，其强电离特性使得最终制备得到的金纳米颗粒呈现强电离状态，进而不利于其与抗体蛋白之间的吸附，使得金纳米颗粒表面结合的抗体总量较低，灵敏度不高。相比之下，本方案突破性地采用弱电离的还原性有机小分子作为氯金酸的还原剂，在70～100℃条件下反应得到的金纳米颗粒具有弱电离性，可以提供表面抗体蛋白更大的吸附总量，从而有效提升检测灵敏度。升检测灵敏度。升检测灵敏度。

【技术实现步骤摘要】
金纳米颗粒和免疫检测试纸条


[0001]本申请涉及免疫检测
，尤其是涉及金纳米颗粒和免疫检测试纸条。

技术介绍

[0002]现有的免疫检测试纸条中，绝大多数采用金纳米颗粒(或称胶体金)作为免疫标记物对蛋白进行标记形成金标抗体，检测时根据结合垫上的金标抗体进行显色观察。金纳米颗粒一般通过氯金酸与柠檬酸钠等还原剂进行反应，但形成的金标抗体难以实现高灵敏度免疫检测。为了提升金纳米颗粒免疫检测试纸条的灵敏度，目前的改进方法主要是通过级联酶促反应，在金纳米颗粒显色的基础上与显色或发光底物孵育反应进行二次信号放大，例如通过共修饰辣根过氧化物酶或使用具有过氧化物酶活性的金纳米颗粒复合颗粒等。然而，这类技术虽然实现了信号放大，但同时也增加了工艺技术难度和人力、物力成本，需要实施者进行额外的技术操作和反应时间。因此，有必要提供一种工艺简单的金纳米颗粒的制备方法，基于该方法制备得到的金纳米颗粒作为标记物使用时可以大大提高检测灵敏度。

技术实现思路

[0003]本申请旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本申请提出一种工艺简单的金纳米颗粒的制备方法，基于该制备方法得到的金纳米颗粒作为标记物使用时可以大大提高检测灵敏度。本申请同时还提出基于该金纳米颗粒的免疫检测试纸条。
[0004]本申请的第一方面，提供一种金纳米颗粒的制备方法，该制备方法包括以下步骤：取氯金酸与弱电离有机小分子混合，在70～100℃下反应，得到金纳米颗粒。
[0005]根据本申请实施例的制备方法，至少具有如下有益效果：/>[0006]申请人在实验过程中发现，柠檬酸钠等作为还原剂使用时，其强电离特性使得最终制备得到的金纳米颗粒呈现强电离状态，进而不利于其与抗体蛋白之间的吸附，使得金纳米颗粒表面结合的抗体总量较低，灵敏度不高。相比之下，本方案突破性地采用弱电离的还原性有机小分子作为氯金酸的还原剂，反应得到的金纳米颗粒具有弱电离性，可以为金纳米颗粒提供更大的表面抗体蛋白吸附总量。另一方面，实验过程中发现，常温下使用弱电离小分子还原剂还原氯金酸导致金纳米颗粒的形貌较差、大小不均一，影响了蛋白吸附和后续的检测灵敏度，而本申请中通过对反应温度的调节，将温度控制在70～100℃，使得最终得到的弱电离金纳米颗粒大小更为均一，形貌较佳，从而从这两个方面有效提升检测灵敏度。
[0007]在本申请的一些实施方式中，弱电离有机小分子选自以下至少一种酸及其盐：抗坏血酸、葡萄糖酸、羟基苯甲酸、二羟苯甲酸、三羟苯甲酸。其中，羟基苯甲酸包括但不限于2
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羟基苯甲酸、3
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羟基苯甲酸、4
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羟基苯甲酸，二羟苯甲酸包括但不限于2,6
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二羟苯甲酸、2,4
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二羟基苯甲酸、2,5
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二羟基苯甲酸、2,3
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二羟基苯甲酸、3,4
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二羟基苯甲酸、3,5
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二羟基苯甲酸，三羟苯甲酸包括但不限于2,3,4
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三羟基苯甲酸、2,4,6
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三羟基苯甲酸、3,4,5
‑
三
羟基苯甲酸等。
[0008]在本申请的一些实施方式中，弱电离有机小分子和氯金酸的摩尔比为(2～10)：1。
[0009]在本申请的一些实施方式中，在70～100℃下反应0.1～1h。
[0010]在本申请的一些实施方式中，在70～90℃下反应，进一步在75～85℃下反应。
[0011]在本申请的一些实施方式中，金纳米颗粒的粒径在10～100nm，进一步在10～50nm，更进一步选择20～40nm。通过制备条件的调整改变金纳米颗粒的粒径，提高蛋白吸附量和检测灵敏度。
[0012]本申请的第二方面，提供一种金纳米颗粒，该金纳米颗粒采用前述的制备方法制得。
[0013]本申请的第三方面，提供一种蛋白复合物，该蛋白复合物包括待标记蛋白和结合在待标记蛋白上的前述的金纳米颗粒。
[0014]本申请的第四方面，提供一种蛋白标记方法，包括以下步骤：将前述的金纳米颗粒与待标记的蛋白混合孵育1～5h，得到蛋白复合物。
[0015]在本申请的一些实施方式中，金纳米颗粒和待标记的蛋白混合孵育后，加入封闭液继续孵育，离心去除上清后，得到蛋白复合物。加入封闭液后继续孵育的时间可选1～3h，优选为2h。
[0016]在本申请的一些实施方式中，封闭剂可选含牛血清白蛋白(BSA)、聚乙二醇、明胶或吐温的磷酸盐缓冲液，优选为牛血清白蛋白，BSA、聚乙二醇、明胶或吐温的具体含量可以根据制备的实际需求进行适量调整。
[0017]在本申请的一些实施方式中，蛋白复合物在复溶液中重悬成分散液。复溶液可选含牛血清白蛋白(BSA)、聚乙二醇、明胶或吐温的磷酸盐缓冲液，优选为牛血清白蛋白，BSA、聚乙二醇、明胶或吐温的具体含量可以根据制备的实际需求进行适量调整。
[0018]本申请的第五方面，提供一种免疫检测试纸条，该免疫检测试纸条包括一抗，一抗包括前述的蛋白复合物，一抗用于特异性结合待测物。
[0019]在本申请的一些实施方式中，还包括二抗和抗抗体，二抗用于特异性结合待测物；抗抗体(一抗蛋白抗体)用于特异性结合一抗。可以理解的是，为了形成二抗
‑
待测物
‑
一抗的复合体，二抗和一抗的结合位点不同。
[0020]在本申请的一些实施方式中，免疫检测试纸条上限定出依次相连的样品区、结合区、检测区、吸附区。其中，样品区用于滴加待测物，结合区上包被有一抗，检测区内设有检测线(T线)和质控线(C线)，二抗包被于检测线上，抗抗体包被于质控线上。
[0021]在本申请的一些实施方式中，免疫检测试纸条包括底板，底板上包括依次相连的样品垫、标记垫、层析膜、吸水垫。
[0022]在本申请的一些实施方式中，底板为聚合物薄膜，例如聚氯乙烯膜。样品垫为处理液处理后的玻纤，处理液可以是含有Triton X
‑
100和防腐剂的磷酸盐缓冲液。标记垫为玻纤。层析膜为孔径在3～15μm的硝酸纤维素膜(NC膜)，优选为8μm孔径的NC膜。吸水垫为滤纸。
[0023]在本申请的一些实施方式中，免疫检测试纸条的大小为(40～100)
×
(1～10)mm。
[0024]在本申请的一些实施方式中，层析膜上间隔5～10mm划线标记有检测线和质控线。
[0025]在本申请的一些实施方式中，检测线和质控线的宽度为0.25～0.5mm，优选为
0.35mm。
[0026]在本申请的一些实施方式中，免疫检测试纸条在制备和使用时包括以下质量份的原料：金纳米颗粒50～100份，一抗蛋白1～3份，封闭液10～30份，复溶液1～5份，二抗蛋白0.1～0.5份，一抗蛋白抗体0.1～0.5份，工作缓冲液1～5份。
[0027]在本申请的一些实施方式中，工作缓冲液用于支持层析流动，可选含有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.金纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：取氯金酸与弱电离有机小分子混合，在70～100℃下反应，得到金纳米颗粒。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述弱电离有机小分子选自以下至少一种酸及其盐：抗坏血酸、葡萄糖酸、羟基苯甲酸、二羟苯甲酸、三羟苯甲酸。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述弱电离有机小分子和所述氯金酸的摩尔比为(2～10)：1。4.根据权利要求1至3任一项所述的制备方法，其特征在于，在70～100℃下反应0.1～1h。5.金纳米颗粒，其特征在于，采用权利要求1至4任一项所述的制备方法制得。6.蛋白复合物，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋兴宇，张江江，
申请(专利权)人：权利要求书一页说明书六页附图一页，
类型：发明
国别省市：