编码VEGF拮抗剂的多核苷酸表达盒、重组病毒及相关应用制造技术

本发明专利技术涉及编码VEGF拮抗剂的多核苷酸表达盒、含有该多核苷酸表达盒的质粒、宿主细胞、重组病毒及其组合物和用途。重组病毒及其组合物和用途。重组病毒及其组合物和用途。

【技术实现步骤摘要】
编码VEGF拮抗剂的多核苷酸表达盒、重组病毒及相关应用


[0001]本专利技术涉及基因工程领域/生物医药领域，具体而言，本专利技术涉及编码VEGF拮抗剂的多核苷酸表达盒，含有该多核苷酸表达盒的质粒、宿主细胞、重组病毒及其组合物、用途和治疗方法。

技术介绍

[0002]新生血管的形成是许多疾病发展和扩散的关键所在。眼部的许多疾病都涉及血管发生，包括年龄相关性黄斑变性(AMD)、视网膜静脉阻塞(RVO)、糖尿病视网膜病变(DR)和病理性近视等。VEGF是一种高度特异性的促血管内皮细胞生长因子，具有促进血管通透性增加、细胞外基质变性、血管内皮细胞迁移、增殖和血管形成等作用。VEGF与3种酪氨酸激酶受体即血管内皮生长因子受体(VEGFR
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1、VEGFR
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2、VEGFR
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3)结合后发挥其生物学作用。VEGFR的膜外部分大约有750个氨基酸残基，由7个与免疫球蛋白结构相似的Ig结构域组成。当受体被VEGF激活后，细胞内的酪氨酸激酶基团发生磷酸化，并导致一系列的信号传递，最终引发血管新生。有研究表明本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多核苷酸表达盒，其特征在于，所述多核苷酸表达盒包括：1)表达调控元件；2)密码子优化的编码VEGF拮抗剂的编码序列。2.根据权利要求1所述的多核苷酸表达盒，其特征在于，所述VEGF拮抗剂包含VEGFR1的胞外结构域2，和/或所述VEGF拮抗剂包含VEGFR2的胞外结构域3，和/或所述VEGF拮抗剂包含VEGFR2的胞外结构域4，和/或所述VEGF拮抗剂还包含免疫球蛋白Fc片段。3.根据权利要求2所述的多核苷酸表达盒，其特征在于，所述VEGF拮抗剂包含VEGFR1的胞外结构域2，VEGFR2的胞外结构域3；优选地，所述VEGF拮抗剂包含VEGFR1的胞外结构域2，VEGFR2的胞外结构域3和免疫球蛋白Fc片段。4.根据权利要求3中所述的多核苷酸表达盒，其特征在于，所述VEGF拮抗剂包含VEGFR1的胞外结构域2，VEGFR2的胞外结构域3和VEGFR2的胞外结构域4；优选地，所述VEGF拮抗剂包含VEGFR1的胞外结构域2，VEGFR2的胞外结构域3，VEGFR2的胞外结构域4和免疫球蛋白Fc片段。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的多核苷酸表达盒，其特征在于，所述编码VEGFR1的胞外结构域2的编码序列包含SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16或SEQ ID NO：17的序列；所述编码VEGFR2的胞外结构域3的编码序列包含SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19或SEQ ID NO：20的序列；所述编码VEGFR2的胞外结构域4的编码序列包含SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：23的序列；所述编码免疫球拮抗剂Fc片段的编码序列包含SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25或SEQ ID NO：26的序列。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的多核苷酸表达盒，其特征在于，所述VEGF拮抗剂的编码序列包含SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29或SEQ ID NO：30的序列。7.根据权利要求1
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6中任一项所述的多核苷酸表达盒，其特征在于，所述表达调控元件包含启动子，所述启动子选择CBA启动子、CMV启动子、CAG启动子或EF1A启动子，并且所述启动子序列包含SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4的序列。8.根据权利要求1
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7中任一项所述的多核苷酸表达盒，其特征在于，所述表达调控元件包含多腺苷酸化信号，所述多腺苷酸化信号选自SV40、HGH、BGH或β
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珠蛋白，并且所述多腺苷酸化信号序列包含SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8的序列。9.根据权利要求1
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8中任一项所述的多核苷酸表达盒，其特征在于，所述多核苷酸表达盒包括位于侧翼的反向末端重复序列(ITR)；优选地，所述ITR是血清型的腺相关病毒ITR，选自AAV1 ITR，AAV2 ITR，AAV3 ITR，AAV4 ITR，AAV5 ITR，AAV6 ITR，AAV7 ITR，AAV8 ITR，AAV9 ITR，AAV10 ITR，AAV11 ITR和AAV12 ITR。10.根据权利要求1
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9中任一项所述的多核苷酸表达盒，其特征在于，所述多核苷酸表达盒还包含基因转录调节元件；优选地，所述基因转录调节元件为土拨鼠肝炎病毒转录后元件(WPRE)，包含序列SEQ ID NO：32。11.根据权利要求1所述的多核苷酸表达盒，其特征在于，所述多核苷酸表达盒包括：1)CBA启动子序列，包括SEQ ID NO：1的序列；2)可操作性地连接于启动子序列的编码VEGF拮抗剂的编码序列，包括SEQ ID NO：28的序列；3)WPRE元件，包括SEQ ID NO：32的序列；
4)SV40多腺苷酸化信号序列，包括SEQ ID NO：5的序列；或者所述多核苷酸表达盒包括：1)CBA启动子序列，包括SEQ ID ...

【专利技术属性】
技术研发人员：柯潇，雷刚，
申请(专利权)人：成都弘基生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：