一种鸡胚中小分子多肽的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种鸡胚中小分子多肽的提取方法。该方法利用抗性淀粉分子量大，聚合度高，可自发形成内部体积较大“V”型腔结构的特点，将酶解后的鸡胚蛋白与抗性淀粉溶液进行包合，超声后超滤管离心，即得鸡胚中小分子多肽。本发明专利技术公开的小分子多肽提取方法相对于粉碎浸渍提取法、酶解浸渍提取法，提取率更高。采用该方法提取的小分子多肽分子量在11～67kDa之间，结构简单，纯度为89.2

【技术实现步骤摘要】
一种鸡胚中小分子多肽的提取方法


[0001]本专利技术涉及中药材分离提取领域，具体涉及一种鸡胚中小分子多肽的提取方法。

技术介绍

[0002]鸡胚为雉科动物家鸡干燥胚胎(英文名：chick embryo or embryonated egg)，家鸡蛋经37.9
±
0.5℃孵化17～18天，除去蛋壳，干燥，味甘、咸、腥，性温，归脾、胃经，具有温中益气，补精填髓的功效，用于体虚赢瘦，骨折，筋伤疼痛等，现已被2019年版《贵州省中药材民族药材质量标准》收录。此外，鸡胚中主要成分为蛋白质，且与人体胎盘中的一些成分相似，比如小分子多肽。研究表明，活性肽清除自由基的作用是治疗骨折，筋伤疼痛主要的成分之一。此外，肽类还具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤、抗衰老以及调节免疫活性等。正因有诸多特性，受到广泛关注。目前，相关文献已经报道了多种动物、植物中小分子多肽的提取及方法，但有提取纯度较低且提取率低等缺点。如何提高小分子多肽的提取率及纯度，对鸡胚的研究具有深远意义。
[0003]何首乌抗性淀粉(RS)是一种新型抗性淀粉，主要属于RS3类抗性淀粉且具有已下特点：分子量大，聚合度高，可自发形成内部体积较大“V”型腔结构。在原有酶解提取的基础上，本专利技术利用何首乌抗性淀粉的特性，获取了一种从鸡胚中小分子多肽的方法，该方法提取率和纯度均较高，这对于鸡胚的研究具有较大意义。

技术实现思路

[0004]为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种鸡胚中小分子多肽的提取方法，解决了如何高效率地从鸡胚中提取小分子多肽的问题。为实现上述目的，本专利技术是通过以下技术方案实现的。
[0005]一种鸡胚中小分子多肽的提取方法，所述鸡胚中小分子多肽的提取方法是通过抗性淀粉自发形成内部体积较大的“V”型腔结构，将酶解后的鸡胚蛋白与抗性淀粉溶液进行包合，超声后超滤管离心，制得鸡胚小分子多肽的方法。
[0006]前述一种鸡胚中小分子多肽的提取方法，是按照以下步骤进行：
[0007]a、取何首乌抗性淀粉，加入2mol/L的KOH水溶液溶解，在室温下加HCl调节pH值至6.5，加水使抗性淀粉浓度为1mg/mL，得到抗性淀粉溶液，即A品；
[0008]b、将鸡胚减压烘干，粉碎至细粉，以水为溶剂，加入木瓜蛋白酶，酶解，得B品；
[0009]c、取上述B品加入中性蛋白酶，酶解，得C品；
[0010]d、取上述C品加入碱性蛋白酶，酶解后离心，取上清液，得小分子多肽粗提物，即D品；
[0011]e、取上述D品搅拌并逐滴滴入至A品中，A品与D品的体积比为4:1～6:1，搅拌进行包合，得E品；
[0012]f、将上述E品离心5000rpm、10分钟，弃去上清液，沉淀物加适量水分散，再25kHz超声30分钟，取超声破碎后的溶液装入80kDa超滤离心管中，12000rpm，离心10分钟，滤液即为
鸡胚小分子多肽浓缩物。
[0013]前述步骤b中，将鸡胚在60～70℃下减压烘干，粉碎至细粉，以水为溶剂，鸡胚与水的比列为1:9～10，搅拌均匀，加入木瓜蛋白酶，pH值为3～6、酶添加量为3％～6％、温度为40～60℃，酶解时间1.0～2.0小时，得B品。
[0014]更具体的，前述步骤b中,将鸡胚在60～70℃下减压烘干，粉碎至细粉，加入75％乙醇，鸡胚与水的比列为1:5～10，搅拌均匀，加入木瓜蛋白酶，pH值为5、酶添加量为5％、温度为53℃，酶解时间1.0～2.0小时，得B品。
[0015]前述步骤c中，取上述B品加入中性蛋白酶pH 5～7、酶添加量为3％～4％、温度为45～55℃，酶解时间为1.0～1.5小时，得C品。
[0016]更具体的，前述步骤c中，取上述B品加入中性蛋白酶pH 6、酶添加量为4％、温度为52℃，酶解时间为1.0～1.5小时，得C品。
[0017]前述一种鸡胚中小分子多肽的提取方法，其特征在于：所述步骤d中，取上述C品加入碱性蛋白酶pH 7.8～8.2、酶添加量5％～6％、温度为49～53℃，酶解后采用1000rpm离心5分钟，取上清液，得小分子多肽粗提物，即D品。
[0018]更具体的，前述步骤d中，取上述C品加入碱性蛋白酶pH8.2、酶添加量5％、温度为49℃，酶解后采用1000rpm离心5分钟，取上清液，得小分子多肽粗提物，即D品。
[0019]前述步骤e中，取上述D品，在60～70℃、200～300rpm下搅拌并逐滴滴入至A品中，A品与B品的体积比为4:1～6:1，搅拌3～6小时进行包合，得E品；
[0020]更具体的，前述步骤e中，取上述D品，在60℃、200～300rpm下搅拌并逐滴滴入至A品中，A品与B品的体积比为6:1，搅拌3小时进行包合，得E品；
[0021]本专利技术有益效果是：
[0022]该方法在传统方法的基础上，优化出鸡胚中小分子多肽提取时最佳酶解条件，再利用何首乌抗性淀粉特有的内部体积较大的V螺旋腔包合，从而得到纯度更高的小分子多肽，得率明显高于酶解法制备的小分子多肽。
附图说明
[0023]图1粉碎浸渍提取法液相图谱；
[0024]图2酶解浸渍提取法液相图谱；
[0025]图3粉碎
‑
酶解
‑
抗性淀粉包合超声法液相图谱；
[0026]图4鸡胚中小分子多肽分子量分布图；
[0027]图5大鼠软骨HE染色结果；
[0028]图6包裹鸡胚中小分子多肽的抗性淀粉电镜图像
[0029]为了使本领域技术人员更好地理解本专利技术的技术方案能予以实施，下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明，但所举实施例不作为对本专利技术的限定。
具体实施方式
[0030]实施例1：
[0031]a、取何首乌抗性淀粉，加入2mol/L的KOH水溶液溶解，在室温下加HCl调节pH值至6.5，加水使抗性淀粉浓度为1mg/mL，得到抗性淀粉溶液，即A品；
[0032]b、将鸡胚在60～70℃下减压烘干，粉碎至细粉，以水为溶剂，鸡胚与水的比列为1:9，搅拌均匀，加入木瓜蛋白酶，pH值为5、酶添加量为5％、温度为53℃，酶解时间1.5小时，得B品；
[0033]c、取上述B品加入中性蛋白酶pH 6、酶添加量为4％、温度为52℃，酶解时间为1.2小时，得C品；
[0034]d、取上述C品加入碱性蛋白酶pH8.2、酶添加量5％、温度为49℃，酶解后采用1000rpm离心5分钟，取上清液，得小分子多肽粗提物，即D品；
[0035]e、取上述D品，在60℃、200～300rpm下搅拌并逐滴滴入至A品中，A品与B品的体积比为6:1，搅拌3小时进行包合，得E品；
[0036]f、将上述E品离心5000rpm、10分钟，弃去上清液，沉淀物加适量水分散，再25kHz超声30分钟，取超声破碎后的溶液装入80kDa超滤离心管中，12000rpm，离心10分钟，滤液即为鸡胚小分子多肽浓缩物。
[003本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鸡胚中小分子多肽的提取方法，其特征在于：所述鸡胚中小分子多肽的提取方法是通过抗性淀粉自发形成内部体积较大的“V”型腔结构，将酶解后的鸡胚蛋白与抗性淀粉溶液进行包合，超声后超滤管离心，制得鸡胚小分子多肽的方法。2.如权利要求1所述一种鸡胚中小分子多肽的提取方法，其特征在于：所述提取方法是按照以下步骤进行：a、取何首乌抗性淀粉，加入2mol/L的KOH水溶液溶解，在室温下加HCl调节pH值至6.5，加水使抗性淀粉浓度为1mg/mL，得到抗性淀粉溶液，即A品；b、将鸡胚减压烘干，粉碎至细粉，加入乙醇，加入木瓜蛋白酶，酶解，得B品；c、取上述B品加入中性蛋白酶，酶解，得C品；d、取上述C品加入碱性蛋白酶，酶解后离心，取上清液，得小分子多肽粗提物，即D品；e、取上述D品搅拌并逐滴滴入至A品中，A品与D品的体积比为4:1～6:1，搅拌进行包合，得E品；f、将上述E品离心5000rpm、10分钟，弃去上清液，沉淀物加适量水分散，再25kHz超声30分钟，取超声破碎后的溶液装入80kDa超滤离心管中，12000rpm，离心10分钟，滤液即为鸡胚小分子多肽浓缩物。3.如权利要求2所述一种鸡胚中小分子多肽的提取方法，其特征在于：所述步骤b中,将鸡胚在60～70℃下减压烘干，粉碎至细粉，以水为溶剂，鸡胚与水的比列为1:9～10，搅拌均匀，加入木瓜蛋白酶，pH值为3～6、酶添加量为3％～6％、温度为40～60℃，酶解时间1.0～2.0小时，得B品。4.如权利要求3所述一种鸡胚中小分子多肽的提取方法，其特征在于：所述步骤b中,将鸡胚在60～70℃下减压烘干，粉碎至细粉，加入75％乙醇，鸡胚与乙醇的比...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐东昕，辛加敏，杨柱，阮婧华，范东生，查鑫，李佳璇，谢丹，
申请(专利权)人：贵州中医药大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：