一种罗非鱼CL-K1在制备预防和/或治疗罗非鱼病害的药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了罗非鱼CL

【技术实现步骤摘要】
一种罗非鱼CL
‑
K1在制备预防和/或治疗罗非鱼病害的药物中的应用


[0001]本专利技术属于水产养殖
，具体涉及一种罗非鱼CL
‑
K1在制备预防和/或治疗罗非鱼病害的药物中的应用。

技术介绍

[0002]罗非鱼，俗称：非洲鲫鱼，非鲫、越南鱼、南洋鲫等。它是世界水产业的重点科研培养的淡水养殖鱼类，且被誉为未来动物性蛋白质的主要来源之一。通常生活于淡水中，也能生活于不同盐度的咸水中，也可以存活于湖，河，池塘的浅水中。它有很强的适应能力，在面积狭小之水域中亦能繁殖，甚至在水稻田里能够生长，且对溶氧较少之水有极强之适应性。绝大部分罗非鱼是杂食性，常吃水中植物和碎物。
[0003]罗非鱼抗病力强，但在越冬期间，由于水温、水质等各种因素，加之密集饲养，鱼体体质差，病害较多。可在短期内引起大量死亡，要密切注意防治。无乳链球菌作为罗非鱼链球菌病的主要致病菌，造成了巨大的经济损失，已经对水产养殖行业形成巨大冲击。目前缺乏安全、高效的鱼病防治措施。虽然抗生素的使用能够一定程度上遏制病害的发生和发展，但抗生素滥用给水产品的质量和安全性受到极大威胁和质疑。因此，探究利用鱼类免疫系统的防御机制，挖掘先天免疫系统中重要分子潜能，从根本上防治鱼病，以适应长效、安全的可持续发展，是水产绿色养殖产业的迫切需求。
[0004]胶原凝集素(CL
‑
K1)是一种功能多效且保守的分泌型蛋白质，作为先天免疫系统中重要的模式识别分子。现有技术报道，胶原凝集素家族成员在尿路感染、剂型肾损伤中发挥重要作用，然而这些是人来源的CL
‑
K1的作用。关于硬骨鱼来源的CL
‑
K1的报道较少，更未检索到关于罗非鱼来源的 CL
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K1及其生物学功能的信息。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种罗非鱼CL
‑
K1制备预防和/或治疗罗非鱼病害的药物中的应用。
[0006]本专利技术提供了罗非鱼CL
‑
K1或编码所述罗非鱼CL
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K1的基因在制备预防和/或治疗水产病害的药物中的应用。
[0007]优选的，所述罗非鱼CL
‑
K1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0008]优选的，所述罗非鱼CL
‑
K1是利用真核表达系统构建、表达、纯化的罗非鱼CL
‑
K1。
[0009]优选的，所述编码所述罗非鱼CL
‑
K1的基因的核苷酸序列如SEQ IDNO:2所示。
[0010]优选的，所述水产病害包括以下一种或几种：无乳链球菌感染导致的病害、败血症、脑膜炎、腹水症、嗜水气单胞菌病、烂尾病和赤皮病。
[0011]优选的，所述水产包括以下一种或几种：罗非鱼、大菱鲆、半滑舌鳎、金鲳、斑点叉尾鮰、草鱼和石斑鱼。
[0012]优选的，所述药物具有抑制无乳链球菌增殖、抑制病害细菌感染导致的炎症反应
的作用。
[0013]本专利技术提供了一种罗非鱼CL
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K1或编码罗非鱼CL
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K1的基因在制备罗非鱼致病菌抑制剂中的应用。
[0014]本专利技术提供了一种罗非鱼CL
‑
K1或编码罗非鱼CL
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K1的基因在制备罗非鱼致病菌感染引起的炎症反应的抑制剂中的应用
[0015]优选的，所述罗非鱼致病菌包括以下一种或几种：无乳链球菌、嗜水气单胞菌、迟缓爱德华氏菌和荧光假单胞菌。
[0016]本专利技术提供了罗非鱼CL
‑
K1或编码所述罗非鱼CL
‑
K1的基因在制备预防和/或治疗水产病害的药物中的应用。本专利技术利用真核表达系统构建、表达、纯化得到具有良好生物活性的真核蛋白罗非鱼CL
‑
K1，在体外试验中，采用牛津杯法测定罗非鱼CL
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K1具有抑制无乳链球菌增殖的能力，在体内试验中，证明敲降CL
‑
K1基因具有促进无乳链球菌感染引起的炎症反应，回补表达CL
‑
K1蛋白后可提高罗非鱼抗无乳链球菌的免疫保护，CL
‑
K1真核蛋白可以显著降低罗非鱼由于无乳链球菌感染而造成的死亡。因此，罗非鱼 CL
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K1作为水产动物先天免疫系统的重要防御机制。可通过发挥罗非鱼 CL
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K1的免疫防御作用从根本上防治鱼病，为实践中减少鱼病的爆发提供具有重要的指导意义。
附图说明
[0017]图1为本专利技术技术方案的技术路线图；
[0018]图2为尼罗罗非鱼CL
‑
K1真核蛋白检测结果，其中图2A：SDS
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PAGE 检测OnCL
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K1真核蛋白的结果；图2B：OnCL
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K1真核蛋白的质谱检测结果，氨基酸序列覆盖度(灰色部分)为95％，该蛋白全肽段质谱检测是样品送到国家蛋白质科学中心(北京)进行的检测)；
[0019]图3为尼罗罗非鱼CL
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K1真核蛋白抑制无乳链球菌增殖能力的检测结果，图3A：牛津杯法检测OnCL
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K1抑菌能力的结果(1.OnCL
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K1；2.BSA； 3.Ampicillin)；图3B：各组抑菌圈面积的统计结果，n＝3。
[0020]图4为CL
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K1基因的敲降促进无乳链球菌对尼罗罗非鱼的感染结果图，图4A：涂板检测OnCL
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K1 RNA干扰对体内病原菌清除的结果；图4B：病理组织切片检测结果；图4C：荧光定量PCR检测炎症因子表达量动态变化；图4D：罗非鱼存活率的统计；
[0021]图5为CL
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K1蛋白提高罗非鱼抗无乳链球菌的免疫保护结果图，图5A：重新注入OnCL
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K1蛋白能够恢复对体内病原菌清除的涂板检测结果；图5B：病理组织切片检测结果；图5C：荧光定量PCR检测炎症因子表达量动态变化；图5D：罗非鱼存活率的统计结果。
具体实施方式
[0022]本专利技术提供了罗非鱼CL
‑
K1或编码所述罗非鱼CL
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K1的基因在制备预防和/或治疗水产病害的药物中的应用。
[0023]在本专利技术中，所述水产病害优选包括以下一种或几种：无乳链球菌感染导致的病害、败血症、脑膜炎、腹水症、嗜水气单胞菌病、烂尾病和赤皮病。在本专利技术实施例中，以无乳链球菌引发的水产病害为例具体说明罗非鱼 CL
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K1通过发挥免疫防御作用来防治水产病害的效果。
[0024]在本专利技术中，所述水产优选包括以下一种或几种：罗非鱼、大菱鲆、半滑舌鳎、金
鲳、斑点叉尾鮰、草鱼和石斑鱼。在本专利技术实施例中，以尼罗罗非鱼为水产动物代表，说明罗非鱼CL
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K1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.罗非鱼CL
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K1或编码所述罗非鱼CL
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K1的基因在制备预防和/或治疗水产病害的药物中的应用。2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述罗非鱼CL
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K1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述罗非鱼CL
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K1是利用真核表达系统构建、表达、纯化的罗非鱼CL
‑
K1。4.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述编码所述罗非鱼CL
‑
K1的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。5.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述水产病害包括以下一种或几种：无乳链球菌感染导致的病害、败血症、脑膜炎、腹水症、嗜水气单...

【专利技术属性】
技术研发人员：木亮亮，尹晓雪，叶剑敏，綦伟伟，
申请(专利权)人：华南师范大学，
类型：发明
国别省市：