【技术实现步骤摘要】
一种高效检测血清中抗视网膜抗体的方法及其应用
[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种高效检测血清中抗视网膜抗体的方法及其应用。
技术介绍
[0002]自身免疫性视网膜病变(autoimmune retinopathy，AIR)是一类由免疫炎症介导的可致盲性眼病，包括副肿瘤病变(paraneoplastic,p
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AIR)和非副肿瘤性病变(non
‑
paraneoplastic,np
‑
AIR)两大类型。AIR临床表现包括双眼无痛性亚急性视力丢失，ERG异常，血清中存在循环抗视网膜抗体(anti
‑
retinal antibodies,ARAs)等。p
‑
AIR包括癌症相关性视网膜病变(cancer
‑
associated retinopathy，CAR)、黑色素瘤相关性视网膜病变melanoma
‑
associated retinopathy，MAR)。某些良性肿瘤也会引起CAR样改变。
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种高效检测血清中抗视网膜抗体(ARAs)的方法，其特征在于，包括下述步骤：(1)抽取临床疑似AIR患者静脉血，离心，得到患者血清；(2)以正常人视网膜组织匀浆中提取的视网膜蛋白为反应底物，采用蛋白印迹法检测步骤(1)抽取得到的患者血清中抗体阳性条带数，即ARAs数量；(3)以已知人重组蛋白抗原为反应底物，采用蛋白印迹法检测并确认步骤(1)抽取得到的患者血清中存在的ARAs种类；(4)采用免疫荧光法检测步骤(1)抽取得到的患者血清中的ARAs，将其定位于正常人视网膜组织切片中，得到患者血清中的ARAs在视网膜组织中的定位；(5)根据步骤(2)、(3)、(4)得到的患者血清ARAs检测结果，确定血清ARAs的数量、血清ARAs的种类、ARAs在视网膜组织中的定位，建立临床疑似AIR患者的血清学指标。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述ARAs种类包括recoverin、α
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enolase、CA
‑
II、TULP
‑
1，tranducin
ɑ
/β、TRMP
‑
1、CRMP
‑
5、arrestin、HSP
‑
70的任一种或其组合。3.如权利要求1
‑
2任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)中离心条件为1500
‑
2000rpm/min下，离心5
‑
10min。4.如权利要求1
‑
3任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述正常人视网膜组织匀浆中提取的视网膜蛋白的方法为：解剖显微镜下取视网膜，置于组织匀浆器内，0.5ml组织裂解液研磨5
‑
10min，4℃下12000rpm/min离心20min,取上清液，即得视网膜蛋白；所述组织裂解液为:50mmol/L pH8.0的Tris
·
Cl、150mmol/L NaCl、0.02％叠氮钠、100μg/ml PMSF、1μg/ml Aprotitin、1％Triton X
‑
100或NP
‑
40。5.如权利要求1
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4任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)中采用蛋白印迹法检测患者血清中抗体阳性条带数的方法，包括下述步骤：
①
将浓度为6.25μg/μl的正常人视网膜蛋白上样至三个泳道孔，毎孔上样8μl，以100V*100min电泳，100V*60min转膜，将转印后的PVDF膜置于浓度为5％的脱脂奶粉中封闭60min；
②
把封闭后的PVDF膜按泳道切分成两块，分别作为实验组和阴性对照组，其中，所述实验组加入用PBS稀释200倍的临床疑似AIR患者血清，阴性对照不加临床疑似AIR患者血清而是直接加PBS，均淹没PVDF膜，4℃孵育过夜，所述PBS为磷酸盐缓冲盐溶液；
③
取出各个PVDF膜，用PBS漂洗干净后，再分别加入用PBS稀释2000倍的二抗(带有荧光的抗人IgG抗体)并淹没PVDF膜，室温孵育60min，加入ECL荧光剂...
【专利技术属性】
技术研发人员：曾惠阳，刘谦，刘亚丽，张敬学，彭晓燕，
申请(专利权)人：北京市眼科研究所，
类型：发明
国别省市：
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