一种高通量检测若干个蛋白之间相互作用的方法及其专用试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种高通量检测若干个蛋白之间相互作用的方法及其专用试剂盒。本发明专利技术的发明专利技术人结合PLA和高通量测序技术可同时实现多种蛋白相互作用的定量检测，并能拓展到检测未知蛋白的相互作用，提高蛋白相互检测的灵敏度。另外，由于使用的是固定Oligo的方法，会使背景信号大大降低，提高的蛋白相互检测的灵敏度。本发明专利技术具有重要的应用价值。本发明专利技术具有重要的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种高通量检测若干个蛋白之间相互作用的方法及其专用试剂盒


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种高通量检测若干个蛋白之间相互作用的方法及其专用试剂盒。

技术介绍

[0002]邻位延伸分析技术(Proximity Extension Assay，PEA)是在一对抗体上分别修饰上单链Oligo(ss-DNA)，当待检测的蛋白分子与抗体发生特异性反应后，拉近了抗体对上ss-DNA的距离，继而产生可扩增的检测信号，从而将蛋白质的检测转变成对DNA的检测，实现了微量蛋白的分析。对多种不同序列的DNA进行定量的方法一般采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR，QPCR)。
[0003]目前，基于PLA的方法发展的技术可以对蛋白的相互作用进行精确检测和定量。基于技术开发的商业化的试剂盒为Sigma公司的Duolink产品试剂盒，其原理见图1，具体如下：首先加入一对抗体与两个目标蛋白分别特异性相互结合(图1中A)；然后加入一对二抗(每个二抗修饰上单链Oligo)与一抗分别进行特异性结合(图1中B)；随后本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高通量检测若干蛋白对之间相互作用的试剂盒，包括若干个用于检测不同蛋白对的试剂组合；每个试剂组合包括试剂甲和试剂乙，用于检测一个蛋白对的相互作用；试剂甲包括单链DNA分子甲、抗体甲和ss Oligo甲；抗体甲为蛋白对中一个蛋白的抗体；试剂乙包括单链DNA分子乙、抗体乙和ss Oligo乙；抗体乙为蛋白对中另一个蛋白的抗体；单链DNA分子甲从5
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末端到3
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末端依次包括DNA片段1、dUTP、DNA片段2、DNA片段3和DNA片段4；单链DNA分子乙从5
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末端到3
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末端依次包括DNA片段5、DNA片段6、DNA片段7、dUTP和DNA片段8；ss Oligo甲从5
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末端到3
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末端依次包括DNA片段a、DNA片段b、DNA片段c和DNA片段d；ss Oligo乙从5
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末端到3
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末端依次包括DNA片段A、DNA片段B、DNA片段C和DNA片段D；DNA片段b与DNA片段5反向互补；DNA片段c与DNA片段4反向互补；DNA片段B与DNA片段2反向互补；DNA片段C与DNA片段7反向互补。2.一种高通量检测若干蛋白对之间相互作用的试剂盒，包括若干个用于检测不同蛋白对的试剂组合；每个试剂组合包括试剂1和试剂2，用于检测一个蛋白对的相互作用；试剂1包括单链DNA分子甲、抗体1和ss Oligo甲；抗体1为蛋白对中一个蛋白抗体的抗体；试剂2包括单链DNA分子乙、抗体2和ss Oligo乙；抗体2为蛋白对中另一个蛋白抗体的抗体；单链DNA分子甲从5
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末端到3
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末端依次包括DNA片段1、dUTP、DNA片段2、DNA片段3和DNA片段4；单链DNA分子乙从5
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末端到3
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末端依次包括DNA片段5、DNA片段6、DNA片段7、dUTP和DNA片段8；ss Oligo甲从5
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末端到3
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末端依次包括DNA片段a、DNA片段b、DNA片段c和DNA片段d；ss Oligo乙从5
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末端到3
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末端依次包括DNA片段A、DNA片段B、DNA片段C和DNA片段D；DNA片段b与DNA片段5反向互补；DNA片段c与DNA片段4反向互补；DNA片段B与DNA片段2反向互补；DNA片段C与DNA片段7反向互补。3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述单链DNA分子甲还包括Barcode标记序列；所述Barcode标记序列位于DNA片段3的下游、DNA片段4的上游；每个试剂组合中，单链DNA分子甲中的Barcode标记序列的核苷酸序列均不同。4.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：单链DNA分子甲的5
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末端进行叠氮标记；单链DNA分子乙3
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末端进行叠氮标记，5
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末端进行磷酸化；ss Oligo甲的5
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末端进行叠氮标记。5.一种高通量检测若干蛋白对之间相互作用的方法，包括步骤(a)和步骤(b)：所述步骤(a)包括如下步骤：
(a-1)将权利要求1中所述抗体甲和所述单链DNA分子甲连接，得到探针1；将权利要求1中所述抗体乙和所述单链DNA分子乙连接，得到探针2；(a-2)完成步骤(a-1)后，将探针1和探针2混合，得到混合探针1；(a-3)按照步骤(a-1)和(a-2)的方法，制备不同的混合探针，不同的混合探针组成混合探针组；混合探针组中的每个混合探针用于检测一个蛋白对；所述步骤(b)包括如下步骤：(b-1)向混合探针组中加入待测样本，反应，得到免疫反应样本；(b-2)取芯片，加入权利要求1中所述试剂盒的ss Oligo甲，反应；(b-3)完成步骤(b-2)后，加入步骤(b-1)得到的免疫反应样本，反应；(b-4)完成步骤(b-3)后，加入DNA连接酶，反应；(b-5)完成步骤(b-4)后，加入User酶，反应；(b-6)完成步骤(b-5)后，加入权利要求1中所述试剂盒的ss Oligo乙和DNA连接酶，反应；(b-7)完成步骤(b-6)后，加入DNA聚合酶，进行RCA反应，测序；根据Barcode标记序...

【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书三页说明书一三页附图三页，
申请(专利权)人：深圳华大生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：