B细胞成熟复合物CART构建体和引物制造技术

本发明专利技术提供了用于生成B细胞成熟抗原嵌合抗原受体(CAR)T细胞的探针和引物组以及相关方法和试剂盒。本发明专利技术还提供了用于执行定量聚合酶链反应以对整合到CAR T药物产品中的B细胞成熟抗原CAR转基因进行定量的探针和引物组以及相关方法和试剂盒。以及相关方法和试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】B细胞成熟复合物CAR T构建体和引物
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年8月30日提交的美国临时申请序列号62/894,663的权益。上述申请的全部内容以引用方式并入本文。
[0003]材料以ASCII文本文件形式以引用方式并入
[0004]本申请包含已经以ASCII格式电子递交的序列表，并且据此全文以引用方式并入。所述ASCII副本创建于2020年8月28日，命名为JBI6148WOPCT1_SL.txt，并且大小为8175字节。

技术介绍

[0005]T细胞疗法利用了分离的T细胞，这些T细胞已经被基因修饰以增强它们对特定肿瘤相关抗原的特异性。基因修饰可以涉及嵌合抗原受体(CAR)或外源性T细胞受体的表达，以将新的抗原特异性提供到T细胞上。表达嵌合抗原受体的T细胞(CAR T细胞)可以诱导肿瘤免疫反应性。B细胞成熟抗原(BCMA)是在成熟B细胞和恶性浆细胞的表面表达的分子，并且是治疗癌症的靶向分子，例如多发性骨髓瘤。需要利用CAR T细胞进行更好的癌症治疗，特别是对BCMA肿瘤相关抗原具有特异性的CAR T细胞。

技术实现思路

[0006]本专利技术涉及用于聚合酶链反应(PCR)的探针和引物，例如定量PCR。本专利技术还涉及利用本文所述的探针和引物定量整合到嵌合抗原受体(CAR)T细胞中的转基因的试剂盒和方法。
[0007]在第一方面，本专利技术提供了探针和引物组，这些探针和引物组包括探针，该探针包含SEQ ID NO:10的核苷酸序列和附接到该探针的至少一个标签；第一引物，该第一引物包含SEQ ID NO:11的核酸序列；和第二引物，该第二引物包含SEQ ID NO:12的核酸序列(参见实施例1、表1)。
[0008]在另一方面，本专利技术提供了探针和引物组，这些探针和引物组包括探针，该探针包含SEQ ID NO:1的核苷酸序列和附接到该探针的至少一个标签；第一引物，该第一引物包含SEQ ID NO:2的核酸序列；和第二引物，该第二引物包含SEQ ID NO:3的核酸序列(参见实施例1、表1)。
[0009]在另一方面，本专利技术提供了探针和引物组，这些探针和引物组包括探针，该探针包含选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:19以及它们的组合的核苷酸序列和附接到该探针的至少一个标签；第一引物，该第一引物包含选自SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20以及它们的组合的核酸序列；和第二引物，该第二引物包含选自SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21以及它们的组合的核酸序列(参见表1)。
[0010]在一些实施方案中，该至少一个标签包括放射性同位素、酶底物、化学发光剂、荧
光团、荧光猝灭剂、酶、化学品或它们的组合。
[0011]在另一方面，本专利技术提供了用于定量整合到CAR T细胞中的转基因的试剂盒，这些试剂盒包括：探针，该探针包含SEQ ID NO:10的核苷酸序列和附接到该探针的至少一个标签；第一引物，该第一引物包含SEQ ID NO:11的核酸序列；和第二引物，该第二引物包含SEQ ID NO:12的核酸序列。
[0012]在另一方面，本专利技术提供了用于定量整合到CAR T细胞中的转基因的试剂盒，这些试剂盒包括：探针，该探针包含SEQ ID NO:1的核苷酸序列和附接到该探针的至少一个标签；第一引物，该第一引物包含SEQ ID NO:2的核酸序列；和第二引物，该第二引物包含SEQ ID NO:3的核酸序列。
[0013]在又一方面，本专利技术提供了用于定量整合到CAR T细胞中的转基因的试剂盒，这些试剂盒包括：探针，该探针包含选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:19以及它们的组合的核苷酸序列和附接到该探针的至少一个标签；第一引物，该第一引物包含选自SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20以及它们的组合的核酸序列；和第二引物，该第二引物包含选自SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21以及它们的组合的核酸序列。
[0014]在本专利技术的这些试剂盒的一些实施方案中，附接到该探针的该至少一个标签包括放射性同位素、酶底物、化学发光剂、荧光团、荧光猝灭剂、酶、化学品或它们的组合。
[0015]在一个实施方案中，本专利技术的这些试剂盒包括包含该探针的阵列。在一些实施方案中，该阵列为多孔板。
[0016]在一个实施方案中，这些试剂盒还包括人白蛋白(hALB)探针，该人白蛋白(hALB)探针包含SEQ ID NO:22的核酸序列(参见实施例2、表2，来自hALB组1的探针)和附接到该hALB探针的至少一个标签；第一hALB引物，该第一hALB引物包含SEQ ID NO:23的核酸序列(表2，来自hALB组1的正向引物)；和第二hALB引物，该第二hALB引物包含SEQ ID NO:24的核酸序列(表2，来自hALB组1的反向引物)。在某些实施方案中，附接到该hALB探针的该至少一个标签包括放射性同位素、酶底物、化学发光剂、荧光团、荧光猝灭剂、酶、化学品或它们的组合。
[0017]在另一实施方案中，这些试剂盒还包括人白蛋白(hALB)探针，该人白蛋白(hALB)探针包含选自SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28以及它们的组合的核酸序列和附接到hALB探针的至少一个标签；第一hALB引物，该第一hALB引物包含选自SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29以及它们的组合的核酸序列；和第二hALB引物，该第二hALB引物包含选自SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:30以及它们的组合的核酸序列(表2)。在某些实施方案中，附接到该hALB探针的该至少一个标签包括放射性同位素、酶底物、化学发光剂、荧光团、荧光猝灭剂、酶、化学品或它们的组合。
[0018]在另一方面，本专利技术提供了用于定量整合到CAR T细胞中的转基因的方法，这些方法包括：
[0019]用包含SEQ ID NO:11的核酸序列的第一CAR引物和包含SEQ ID NO:12的核酸序列本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种探针和引物组，所述探针和引物组包括：探针，所述探针包含SEQ ID NO:10的核苷酸序列和附接到所述探针的至少一个标签；第一引物，所述第一引物包含SEQ ID NO:11的核酸序列；和第二引物，所述第二引物包含SEQ ID NO:12的核酸序列。2.根据权利要求1所述的探针和引物组，其中所述至少一个标签包括放射性同位素、酶底物、化学发光剂、荧光团、荧光猝灭剂、酶、化学品或它们的组合。3.一种用于定量整合到嵌合抗原受体(CAR)T细胞中的转基因的试剂盒，所述试剂盒包括：探针，所述探针包含SEQ ID NO:10的核苷酸序列和附接到所述探针的至少一个标签；第一引物，所述第一引物包含SEQ ID NO:11的核酸序列；和第二引物，所述第二引物包含SEQ ID NO:12的核酸序列。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其中附接到所述探针的所述至少一个标签包括放射性同位素、酶底物、化学发光剂、荧光团、荧光猝灭剂、酶、化学品或它们的组合。5.根据权利要求3所述的试剂盒，其中所述试剂盒包括包含所述探针的阵列。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其中所述阵列为多孔板。7.根据权利要求3所述的试剂盒，其中所述试剂盒还包括：人白蛋白(hALB)探针，所述人白蛋白(hALB)探针包含SEQ ID NO:22的核酸序列和附接到所述hALB探针的至少一个标签；第一hALB引物，所述第一hALB引物包含SEQ ID NO:23的核酸序列；和第二hALB引物，所述第二hALB引物包含SEQ ID NO:24的核酸序列。8.根据权利要求7所述的试剂盒，其中附接到所述hALB探针的所述至少一个标签包括放射性同位素、酶底物、化学发光剂、荧光团、荧光猝灭剂、酶、化学品或它们的组合。9.根据权利要求3所述的试剂盒，其中所述试剂盒还包括参考基因探针和附接到所述参考基因探针的至少一个标签、第一参考基因引物和第二参考基因引物。10.一种用于定量整合到嵌合抗原受体(CAR)T细胞中的转基因的方法，所述方法包括：用包含SEQ ID NO:11的核酸序列的第一CAR引物和包含SEQ ID NO:12的核酸序列的第二CAR引物来扩增来自所述CAR T细胞的核酸，从而产生扩增的CAR核酸；用包含SEQ ID NO:23的核酸序列的第一hALB引物和包含SEQ ID NO:24的核酸序列的第二hALB引物来扩增来自所述CAR T细胞的所述核酸，从而产生扩增的hALB核酸；通过来自附接到包含SEQ ID NO:10的核苷酸序列的CAR探针的至少一个标签的靶信号来检测所述扩增的CAR核酸与所述CAR探针之间的杂交；通过来自附接到包含SEQ ID NO:22的核苷酸序列的hALB探针的至少一个标签的参考信号来检测所述扩增的hALB核酸与所述hALB探针之间的杂交；以及通过比较所述靶信号相对于所述参考信号来定量转基因拷贝数。11.一种用于定量整合到嵌合抗原受体(CAR)T细胞中的转基因的方法，所述方法包括：使来自所述CAR T细胞的核酸与第一CAR引物、第二CAR引物、第一hALB引物和第二hALB引物接触，其中所述第一CAR引物包含SEQ ID NO:11的核酸序列，所述第二CAR引物包含SEQ ID NO:12的核酸序列，所述第一hALB引物包含SEQ ID NO:23的核酸序列，并且所述第二hALB引物包含SEQ ID NO:24的核酸序列；用所述第一CAR引物和所述第二CAR引物来扩增CAR核酸，从而产生扩增的CAR核酸；用所述第一hALB引物和所述第二hALB引物来扩增hALB核酸，从而产生扩增的hALB核酸；
通过来自附接到包含SEQ ID NO:10的核苷酸序列的CAR探针的至少一个标签的靶信号来检测所述扩增的CAR核酸与所述CAR探针之间的杂交；通过来自附接到hALB探针的至少一个标签的参考信号来检测所述扩增的hALB核酸与所述hALB探针之间的杂交；以及通过比较所述靶信号相对于所述参考信号来定量转基因拷贝数。12.根据权利要求10或11所述的方法，其中检测所述扩增的CAR核酸与所述CAR探针之间的杂交包括检测在杂交期间或之后来自附接到所述CAR探针的所述至少一个标签的靶信号相对于在杂交之前来自附接到所述CAR探针的所述标签的靶信号的变化。13.根据权利要求10或11所述的方法，其中检测扩增的hALB核酸分子和所述hALB探针之间的杂交包括检测在杂交期间或之后来自附接到所述hALB探针的所述至少一个标签的靶信号相对于在杂交之前来自附接到所述hALB探针的所述标签的靶信号的变化。14.根据权利要求10或11所述的方法，其中所述扩增包括聚合酶链反应(PCR)。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述PCR是实时PCR、逆转录酶
‑
聚合酶链反应(RT
‑
PCR)、实时逆转录酶
‑
聚合酶链反应(rt RT
‑
PCR)、数字PCR(dPCR)、连接酶链反应或转录介导的扩增(TMA)。16.根据权利要求10所述的方法，其中附接到所述CAR探针的至少一个标签包括荧光团。17.根据权利要求10所述的方法，其中附接到所述hALB探针的至少一个标签包括荧光团。18.一种用于定量整合到嵌合抗原受体(CAR)T细胞中的转基因的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：詹森生物科技公司，
类型：发明
国别省市：