用于蛋白纯化的方法技术

本发明专利技术涉及蛋白纯化方法，特别是使用离子交换层析。提供了适用于通过离子交换层析纯化的修饰的蛋白和肽标签，以及相关方法。以及相关方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于蛋白纯化的方法


[0001]本专利技术涉及蛋白纯化的方法，特别是使用离子交换层析。提供了适用于通过离子交换层析纯化的修饰的蛋白和肽标签，以及相关方法。

技术介绍

[0002]重组蛋白的生产需要通过从生产它们的细胞中分离它们来纯化蛋白，这通常是生产过程中最耗时和昂贵的因素。对于用于医学和治疗应用的蛋白尤其如此，因为需要非常高水平的纯度。蛋白纯化通常依赖于多步骤过程中几种技术的组合，从细胞碎片的细胞分解去除开始，接着从其他细胞蛋白和杂质中分离所需蛋白。所需的材料量和浓度、所需的天然折叠/活性、纯度、多聚体蛋白的亚基含量、翻译后修饰指导蛋白策略设计。为了设计合适的蛋白纯化方法，关键是评估蛋白溶解度，其在高或低浓度下的不稳定性及其对盐浓度、温度、pH和氧化的敏感性。此外，当旨在组合不同的纯化步骤时，希望减少或甚至废除透析和浓缩的任何中间步骤。
[0003]纯化通常涉及在纯化早期使用的批量或分批方法，其适用于大体积且有效地去除非蛋白物质(核酸、多糖和脂质)，随后是适用于获得高纯度产物的更精制的方法。批量方法包括盐析、用有机聚合物进行的相分配、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种适于通过离子交换层析纯化的融合蛋白，所述蛋白包含：(i)目标蛋白(ii)在N或C末端的肽标签；其中所述肽标签包含(HR)
n
、(PR)
n
、(SR)
n
或(PSR)
n
，其中
‘
n
’
是2至6的整数，包括端值。2.一种融合蛋白，其包含与能够结合离子交换树脂的肽标签直接或间接共价连接的目标蛋白，其中所述肽标签包含(HR)
n
、(PR)
n
、(SR)
n
或(PSR)
n
，其中
‘
n
’
是2至6的整数，包括端值。3.根据权利要求1或权利要求2所述的融合蛋白，其中所述肽标签的长度是4至20个氨基酸。4.根据权利要求3所述的融合蛋白，其中所述肽标签的长度是4至12个氨基酸。5.根据权利要求1至4中任一项所述的融合蛋白，其中所述肽标签包含SEQ ID No 4
‑
6、8和9中任一个的氨基酸序列。6.根据权利要求5所述的融合蛋白，其中所述肽标签由SEQ ID No4
‑
6、8和9中任一个的氨基酸序列组成。7.根据权利要求1至6中任一项所述的融合蛋白，其进一步在所述目标蛋白和所述肽标签之间包含接头。8.根据权利要求7所述的融合蛋白，其中所述接头包含GG、GS、SS、SG或GGSGG。9.根据权利要求1至8中任一项所述的融合蛋白，其中所述目标蛋白是抗原蛋白或载体蛋白。10.根据权利要求9所述的融合蛋白，其中所述目标蛋白是破伤风类毒素(TT)、白喉类毒素(DT)、CRM
197
、来自空肠弯曲菌的AcrA、来自流感嗜血杆菌的蛋白D、铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)、来自肺炎链球菌的解毒的肺炎球菌溶血素、脑膜炎球菌外膜蛋白复合物(OMPC)、来自金黄色葡萄球菌的解毒的Hla或来自金黄色葡萄球菌的ClfA。11.根据权利要求10所述的融合蛋白，其中所述目标蛋白是来自铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)。12.根据权利要求11所述的融合蛋白，其中所述EPA包含SEQ ID NO.10的氨基酸序列或与SEQ ID NO.10至少80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。13.根据权利要求11或权利要求12所述的融合蛋白，其中所述EPA蛋白被修饰使得a.其包含在对应于SEQ ID NO.10的位置L552的氨基酸位置处的L至V置换，和/或SEQ ID NO:10的E553或在与SEQ ID NO.10至少80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列内的等同位置处的缺失；和/或b.一个或多个氨基酸已被选自以下的一个或多个共有序列置换：D/E
‑
X
‑
N
‑
Z
‑
S/T(SEQ ID NO.25)和K
‑
D/E
‑
X
‑
N
‑
Z
‑
S/T
‑
K(SEQ ID NO.26)，其中X和Z独立地是除脯氨酸之外的任何氨基酸，所述置换是任选地用K
‑
D
‑
Q
‑
N
‑
R
‑
T
‑
K(SEQ ID NO:27)或K
‑
D
‑
Q
‑
N
‑
A
‑
T
‑
K(SEQ ID NO:28)的置换。14.根据权利要求11至13中任一项所述的融合蛋白，其中所述目标蛋白包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列或与SEQ ID NO.11至少80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含(i)权利要求11至14中任一项定义的EPA，和(ii)权利要求1至6中任一项定义的肽标签。16.根据权利要求15所述的融合蛋白，其中所述肽标签包含SEQ ID No:6、8或9中任一个的氨基酸序列或由SEQ ID No:6、8或9中任一个的氨基酸序列组成。17.根据权利要求16所述的融合蛋白，其中所述肽标签包含SEQ ID No:8的氨基酸序列或由SEQ ID No:8的氨基酸序列组成。18.根据权利要求15所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO:12
‑
14、17、18、41、42、44、46或47中任一个的氨基酸序列。19.根据权利要求15所述的融合蛋白，其中所述融合...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：葛兰素史克生物有限公司，
类型：发明
国别省市：