对包含在溶液样品中的曲伏前列素和曲伏前列素酸同时进行定量分析的方法技术

本发明专利技术公开了对包含在溶液样品中的曲伏前列素及曲伏前列素酸同时进行定量分析的方法，该方法的特征在于所述定量分析是采用高效液相色谱

【技术实现步骤摘要】
对包含在溶液样品中的曲伏前列素和曲伏前列素酸同时进行定量分析的方法


[0001]本专利技术涉及药代动力学研究领域。具体地，本专利技术涉及对在溶液样品中的药物进行定量分析的方法，更具体地，本专利技术涉及对包含在溶液样品中的曲伏前列素和曲伏前列素酸同时进行定量分析的方法。

技术介绍

[0002]曲伏前列素是一种前列腺素F2α类似物，可用于治疗开角型、闭角型青光眼以及高眼压症。它是一种高选择性和高亲和力的前列腺素FP受体完全激动剂，通过增加经由葡萄膜巩膜通路的房水外流的机制减低眼内压。它是曲伏前列素酸的酯类前体药(曲伏前列素酸异丙酯)，通过角膜吸收，能很快被角膜酯酶水解成具有生物学活性的游离曲伏前列素酸，并发挥其降眼压作用。曲伏前列素和曲伏前列素酸的结构式如下所示：曲伏前列素曲伏前列素酸在药物的药代动力学研究过程中，经常需要对包含在溶液样品中的药物进行快速定量分析。在本专利技术情况下，所述溶液样品除了化学领域中一般意义上的溶液外，尤其包括得自生物体的生物样品。
[0003]通常情况下，生物样品的采集过程本身会对药物的定量测定结果产生影响。例如，为了研究药物在动物眼组织中的药代动力学，需要采集动物眼组织。由于眼球的生物屏障会在动物死亡后立即消失，而眼组织中的酶在眼球被摘除后仍能发挥生物活性，因此眼球在解剖过程中经常需要保持冷冻状态，并对样品进行快速测定。
[0004]实验表明，将曲伏前列素分别添加到兔房水、血浆和全血中并在涡旋后于约4℃下放置约2小时，曲伏前列素分别在房水中降解约30％，在全血和血浆中降解甚至高达约80％。
[0005]本专利技术的专利技术人已经通过在包含曲伏前列素的生物样品中添加酶抑制剂实现了
对曲伏前列素在生物样品采集过程中和采集之后的生物样品处理过程中发生降解的控制。所述酶抑制剂可以包含甲基磺酰氟、毒扁豆碱、敌敌畏、对氧磷或上述物质的任意混合物。本专利技术的专利技术人还研究了不同的酶抑制剂、酶抑制剂浓度、温度和pH条件等多种因素对曲伏前列素在生物样品中发生降解的影响，即研究了这些因素对曲伏前列素在生物样品中转化为相应酸的影响。
[0006]现有技术中关于对包含在溶液样品中的曲伏前列素及曲伏前列素酸同时进行定量分析的方法尚未有报道，尤其是在向生物样品中添加酶抑制剂后，同时快速测定样品溶液中的曲伏前列素及曲伏前列素酸的生物分析方法尚无文献报道。

技术实现思路

[0007]本专利技术要解决的技术问题本专利技术的目的就是要提供一种能够同时实现对包含在溶液样品中的曲伏前列素及曲伏前列素酸进行快速定量分析的方法。尤其是要提供一种对在包含酶抑制剂的生物样品中的曲伏前列素和其活性代谢物曲伏前列素酸同时进行快速定量分析的方法。所述定量分析方法使得能够研究不同的酶抑制剂、酶抑制剂浓度、温度和pH条件等多种因素对曲伏前列素在生物样品采集过程中和采集之后的生物样品处理过程中转化为曲伏前列素酸的影响。
[0008]解决技术问题的技术方案为了解决所述技术问题，本专利技术提供以下技术方案：方案1：对包含在溶液样品中的曲伏前列素及曲伏前列素酸同时进行定量分析的方法，该方法的特征在于所述定量分析是采用高效液相色谱串联质谱联用技术进行的，所述高效液相色谱串联质谱联用技术优选是高效液相色谱串联二级质谱联用技术。
[0009]方案2：根据方案1的方法，其中所述溶液样品是通过包括以下步骤的方法获得的：i.对动物给药曲伏前列素，并在给药后从所述动物提取动物组织；ii.在约0℃至约4℃的温度下对得自步骤i的动物组织放置于含有酶抑制剂和pH调节剂的水溶液中并进行生物样品前处理，经离心后取上清液样品，所述上清液样品的pH值为约4.0至约6.0，优选约5.0，所述pH调节剂优选包含柠檬酸；iii.向得自步骤ii的样品中添加乙氧苯柳胺和曲伏前列素酸
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D4并将其充分混合溶解，iv.向得自步骤iii的样品中添加有机溶剂并将其充分混合，其中所述得自步骤iii的样品与所述有机溶剂的体积比例为约1:2至约1:9，优选约1:4，所述有机溶剂优选包含乙腈、甲醇、乙醇或它们的任意混合物，最优选包含乙腈，混合后的样品在离心后取上清液作为所述溶液样品。
[0010]方案3：根据方案1的方法，其中所述溶液样品是通过包括以下步骤的方法获得的：i'.从未给药曲伏前列素的动物提取动物组织；ii'.在约0℃至约4℃的温度下对得自步骤i'的动物组织进行生物样品前处理，经离心后取上清液样品，加入酶抑制剂、曲伏前列素、曲伏前列素酸和pH调节剂，所述样品的pH值为约4.0至约6.0，优选约5.0，所述pH调节剂优选包含柠檬酸；iii'.向得自步骤ii'的样品中添加乙氧苯柳胺和曲伏前列素酸
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D4并将其充分混
合溶解；iv'.向得自步骤iii'的样品中添加有机溶剂并将其充分混合，其中所述得自步骤iii'的样品与所述有机溶剂的体积比例为约1:2至约1:9，优选约1:4，所述有机溶剂优选包含乙腈、甲醇、乙醇或它们的任意混合物，最优选包含乙腈，混合后的样品在离心后取上清液作为所述溶液样品。
[0011]方案4.根据方案3的方法，其中在步骤ii'中的上清液样品中曲伏前列素的浓度为约10至约1000ng/mL，曲伏前列素酸的浓度为约2至约200ng/mL。
[0012]方案5.根据方案2至4中任一项的方法，其中所述动物组织包括房水、血浆或全血。
[0013]方案6.根据方案2至5中任一项的方法，其中所述酶抑制剂包含敌敌畏、对氧磷、苯甲基黄酰氟、毒扁豆碱以及它们中的一种或多种的组合，尤其优选包含对氧磷。
[0014]方案7.根据方案2至6中任一项的方法，其中在步骤ii或ii'中的上清液中的酶抑制剂的浓度为约1至约20mM，优选约2至约10mM，更优选约5mM。
[0015]方案8.根据方案2至7中任一项的方法，其中在步骤iii或iii'中，在所述混合后的样品中的乙氧苯柳胺的浓度优选为约50至约200ng/mL，优选为约100ng/mL，和曲伏前列素酸
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D4的浓度为约10ng/mL至约30ng/mL，优选为约20ng/mL。
[0016]方案9：根据方案1至8中任一项的方法，其中所述液相色谱串联质谱联用技术中的色谱条件包括采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以甲酸水溶液
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甲酸乙腈溶液的混合液作为流动相进行洗脱，其中将所述流动相的流速设定为约0.2mL/分钟至约0.4mL/分钟，优选约0.3mL/分钟；所述甲酸水溶液为甲酸的约0.09至约0.11体积％，优选约0.1体积％的水溶液；所述甲酸乙腈溶液为甲酸的约0.09至约0.11体积％，优选约0.1体积％的乙腈溶液；和所述洗脱优选采用梯度洗脱方式，所述梯度洗脱的程序优选被设定为：约0至约0.8分钟，保持流动相由约85至约95体积％，优选约90体积％的所述甲酸水溶液和约5至约15体积％，优选约10体积％的所述甲酸乙腈溶液组成；约0.8至约1.2分钟，使流动相从由约85至约95体积％，优选约90体积％的所述甲酸水溶液和约5至本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.对包含在溶液样品中的曲伏前列素及曲伏前列素酸同时进行定量分析的方法，该方法的特征在于所述定量分析是采用高效液相色谱串联质谱联用技术进行的，所述高效液相色谱串联质谱联用技术优选是高效液相色谱串联二级质谱联用技术。2.根据权利要求1的方法，其中所述溶液样品是通过包括以下步骤的方法获得的：i.对动物给药曲伏前列素，并在给药后从所述动物提取动物组织；ii.在约0℃至约4℃的温度下将得自步骤i的动物组织放置于含有酶抑制剂和pH调节剂的水溶液中并进行生物样品前处理，经离心后取上清液样品，所述上清液样品的pH值为约4.0至约6.0，优选约5.0，所述pH调节剂优选包含柠檬酸；iii.向得自步骤ii的样品中添加乙氧苯柳胺和曲伏前列素酸
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D4并将其充分混合溶解，iv.向得自步骤iii的样品中添加有机溶剂并将其充分混合，其中所述得自步骤iii的样品与所述有机溶剂的体积比例为约1:2至约1:9，优选约1:4，所述有机溶剂优选包含乙腈、甲醇、乙醇或它们的任意混合物，最优选包含乙腈，混合后的样品在离心后取上清液作为所述溶液样品。3.根据权利要求1的方法，其中所述溶液样品是通过包括以下步骤的方法获得的：i'.从未给药曲伏前列素的动物提取动物组织；ii'.在约0℃至约4℃的温度下将得自步骤i'的动物组织进行生物样品前处理，经离心后取上清液，加入酶抑制剂、曲伏前列素、曲伏前列素酸和pH调节剂，所述样品的pH值为约4.0至约6.0，优选约5.0，所述pH调节剂优选包含柠檬酸；iii'.向得自步骤ii'的样品中添加乙氧苯柳胺和曲伏前列素酸
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D4并将其充分混合溶解；iv'.向得自步骤iii'的样品中添加有机溶剂并将其充分混合，其中所述得自步骤iii'的样品与所述有机溶剂的体积比例为约1:2至约1:9，优选约1:4，所述有机溶剂优选包含乙腈、甲醇、乙醇或它们的任意混合物，最优选包含乙腈，混合后的样品在离心后取上清液作为所述溶液样品。4.根据权利要求3的方法，其中在步骤ii'中的上清液样品中曲伏前列素的浓度为约10至约1000ng/mL，曲伏前列素酸的浓度为约2至约200ng/mL。5.根据权利要求2至4中任一项的方法，其中所述动物组织包括房水、血浆或全血。6.根据权利要求2至4中任一项的方法，其中所述酶抑制剂包含敌敌畏、对氧磷、苯甲基黄酰氟、毒扁豆碱以及它们中的一种或多种的组合，尤其优选包含对氧磷。7.根据权利要求2至4中任一项的方法，其中在步骤ii或ii'中的上清液中的酶抑制剂的浓度为约1至约20mM，优选约2至约10mM，更优选约5mM。8.根据权利要求2至4中任一项的方法，其中在步骤iii或iii'中，在所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘继东，杨强，赵欣，王小桐，祖嶶，
申请(专利权)人：沈阳兴齐眼药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：