一种可用于多种新鲜组织固定的无甲醛固定液及固定方法技术

本发明专利技术公开了一种可用于多种新鲜组织固定的无甲醛固定液，包括A液、B液，依次对新鲜组织进行第一固定、第二固定，能有效固定多种组织中的各种物质，固定后的组织膨胀和收缩不明显，使组织尽可能保持了生活状态时的形态结构，有利于后续的切片、病理检查。病理检查。病理检查。

【技术实现步骤摘要】
一种可用于多种新鲜组织固定的无甲醛固定液及固定方法


[0001]本专利技术属于医学组织病理学
，具体涉及一种可用于多种新鲜组织固定的无甲醛固定液及固定方法。

技术介绍

[0002]在组织病理学中，需要对收集到的新鲜组织进行及时的适当的和有效的固定，防止组织自溶和腐败，使细胞内蛋白质、脂肪、糖、酶等成分沉淀或凝固，使组织和细胞尽可能保持生活状态时的形态结构，便于后续的切片等工作能顺利进行。
[0003]固定液是常用的组织固定剂，传统的组织固定液为福尔马林(甲醛水溶液)，存在甲醛易挥发、毒性大的问题，使用过程中容易对环境造成污染，对操作人员的身体造成损伤。同时人体组织类型繁多，不同部位的组织结构、性质不同，以及随着免疫组织化学及分子生物学的发展，要求固定液具有有多样性。但是每一种人体组织采用一种固定液的话，需要配制大量种类的固定液，并对各固定液分别进行标记，工作量巨大。
[0004]乙醇作为组织固定剂的一种，对组织细胞既有固定作用又有脱水作用，使用乙醇作为固定剂时，如果直接采用高浓度乙醇，会使生物材料表面急剧脱水形成一层类似于保护膜的结构，影响到组织内部的固定、脱水，这样就要求乙醇的浓度具有梯度性(要求浓度从高到低)，现有技术中一般采用的浓度梯度为50％
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70％
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80％
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95％
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无水乙醇，乙醇浓度的各梯度间的跨度变化较大，固定脱水效果不佳，若想使用梯度间跨度较小的乙醇溶液，需要配制很多组不同浓度的乙醇溶液，且固定时需要频繁换液，配制和固定、脱水过程操作都比较繁琐，且现有技术中固定方式为开放式处理方式，对于需要多次更换固定液时，易造成样本污染。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种可用于多种新鲜组织固定的无甲醛固定液，该固定液由多种固定液组分组成，依次对新鲜组织进行固定，能有效固定多种组织中的各种物质，固定后的组织膨胀和收缩不明显，使组织尽可能保持了生活状态时的形态结构，有利于后续的切片、病理检查。
[0006]本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：
[0007]一种可用于多种新鲜组织固定的无甲醛固定液，包括A液和B液；
[0008]所述A液包括苦味酸和冰醋酸；
[0009]所述B液包括如下原料配制而成：戊二醛、乙醇。
[0010]优选地，所述B液包括B1液、B2液、B3液；
[0011]所述B1液包括如下质量份数的原料配制而成：戊二醛10份、乙醇50份、磷酸缓冲液40份；
[0012]所述配制B2液的原料，还包括磷酸缓冲液；
[0013]所述B2液包括如下质量份数的原料配制而成：戊二醛10份、乙醇70份、磷酸缓冲液
20份；
[0014]所述B3液包括如下质量份数的原料配制而成：戊二醛5份、乙醇95份。
[0015]所述戊二醛为戊二醛水溶液，所述戊二醛水溶液中戊二醛的质量百分含量为24％
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26％；
[0016]所述磷酸缓冲液的浓度为0.2mol/L，pH值为7.4；
[0017]所述乙醇为无水乙醇。
[0018]优选地，所述苦味酸为苦味酸饱和液，所述苦味酸饱和液与冰醋酸的质量百分比为15：1；
[0019]所述苦味酸饱和液为苦味酸的用量以能溶解在水中并形成苦味酸饱和水溶液为准。
[0020]一种制备可用于多种新鲜组织固定的无甲醛固定液的方法，包括如下步骤：
[0021]步骤一、配制A液：
[0022]按质量百分比取苦味酸、冰醋酸，搅拌混合均匀，配得A液；
[0023]步骤二、配制B液：
[0024]配制B1液：按质量份数取戊二醛、乙醇、磷酸缓冲液，搅拌混合均匀，配得B1液；
[0025]配制B2液：按质量份数取戊二醛、乙醇、磷酸缓冲液，搅拌混合均匀，配得B2液；
[0026]配制B3液：按质量份数取戊二醛、乙醇，搅拌混合均匀，配得B3液。
[0027]优选地，使用所述固定液固定新鲜组织的方法，包括以下步骤：
[0028]S1.将新鲜的组织置于A液中，进行第一固定，固定时间3
‑
5小时；
[0029]所述进行第一固定时，A液与待固定组织的体积比为10
‑
30：1，优选20
‑
30：1；
[0030]S2.第一固定完成后，用PBS缓冲液清洗组织；
[0031]S3.将清洗后的组织置于固定室中，加入B液，进行第二固定；
[0032]所述进行第二固定时，B液与待固定组织的体积比为10
‑
30：1，优选20
‑
30：1。
[0033]优选地，加入B液的步骤包括部分使用后的液体的更换。
[0034]优选地，所述S3中加入B液中的各个溶液的先后顺序：先加入B1液、再加入B2液、最后加入B3液。
[0035]优选地，所述S3中进行第二固定的过程中，包括顺次进行的以下三种换液方式：
[0036]第一种换液方式，当需要向固定室中加入B2液时，若当前的固定室中的液体为使用后的B1液，则排出当前的固定室中的部分液体并加入B2液，进行第一种换液；
[0037]第二种换液方式，当需要向固定室中加入B2液时，若当前的固定室中的液体包括使用后的B2液，则排出当前的固定室中的部分液体并加入B2液，进行第二种换液；
[0038]第三种换液方式，当需要向固定室中加入B3液时，则排出当前的固定室中的部分液体并加入B3液，进行第三种换液。
[0039]固定室中的液体里乙醇的质量百分含量随着B2液、B3液加入次数的增加而逐渐增大。
[0040]优选地，在固定室的上方存在联动室，在联动室与固定室之间设置有移动活塞，移动活塞闭合时，能以密封的方式在联动室与固定室之间上下移动，上下移动移动活塞用以变化固定室、联动室的体积；
[0041]所述进行部分使用后的液体的更换包括以下步骤：
[0042]当需要更换固定室中部分液体时，
[0043]S101、向联动室内灌入新的液体，移动活塞以蓄力的方式下降，并带动联动组件运动至排液孔开口，固定室中的部分使用后的液体从开口状态下的排液孔排出；
[0044]S102、随着移动活塞下降至设定位置后，带动联动组件运动至排液孔重新闭合；
[0045]S103、将移动活塞开启，使得移动活塞的空室暴露，固定室、联动室、空室三者连通，新的液体灌入至空室中，蓄力开始释放，移动活塞复位运动的同时排液孔保持闭合，直至移动活塞复位后，关闭移动活塞，联动室与固定室之间重新密封隔开，完成部分使用后的液体的更换。
[0046]优选地，联动组件包括联动条形齿、传动棘齿；联动条形齿的上端与移动活塞转动配合；联动条形齿与传动棘齿单向联动；
[0047]联动条形齿上下往复运动包括以下步骤：
[0048]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可用于多种新鲜组织固定的无甲醛固定液，其特征在于，包括A液和B液；所述A液包括苦味酸和冰醋酸；所述B液包括如下原料配制而成：戊二醛、乙醇。2.根据权利要求1所述的一种可用于多种新鲜组织固定的无甲醛固定液，其特征在于，所述B液包括B1液、B2液、B3液；所述B1液包括如下质量份数的原料配制而成：戊二醛10份、乙醇50份、磷酸缓冲液40份；所述B2液包括如下质量份数的原料配制而成：戊二醛10份、乙醇70份、磷酸缓冲液20份；所述B3液包括如下质量份数的原料配制而成：戊二醛5份、乙醇95份。3.根据权利要求1所述的一种可用于多种新鲜组织固定的无甲醛固定液，其特征在于，所述苦味酸为苦味酸饱和液，所述苦味酸饱和液与冰醋酸的质量百分比为15：1。4.一种制备如权利要求1
‑
3任意一项所述的可用于多种新鲜组织固定的无甲醛固定液的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、配制A液：按质量百分比取苦味酸、冰醋酸，搅拌混合均匀，配得A液；步骤二、配制B液：配制B1液：按质量份数取戊二醛、乙醇、磷酸缓冲液，搅拌混合均匀，配得B1液；配制B2液：按质量份数取戊二醛、乙醇、磷酸缓冲液，搅拌混合均匀，配得B2液；配制B3液：按质量份数取戊二醛、乙醇，搅拌混合均匀，配得B3液。5.使用如权利要求1
‑
3任意一项所述的固定液固定新鲜组织的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.将新鲜的组织置于A液中，进行第一固定；S2.第一固定完成后，用PBS缓冲液清洗组织；S3.将清洗后的组织置于固定室中，加入B液，进行第二固定。6.根据权利要求5所述的固定新鲜组织的方法，其特征在于，加入B液的步骤包括部分使用后的液体的更换。7.根据权利要求6所述的固定新鲜组织的方法，其特征在于，所述S3中加入B液中的各个溶液的先后顺序：先加入B1液、再加入B2液、最后加入B3液。8.根据权利要求7所述的固定新鲜组织的方法，其特征在于，所述S3中进行第二固定的过程中，包括顺次进行的以...

【专利技术属性】
技术研发人员：王金涛，刘玭，
申请(专利权)人：哈尔滨东尧科技有限公司，
类型：发明
国别省市：