一种茯苓子实体稳定形成的方法技术

本发明专利技术公开了一种茯苓子实体稳定形成的方法。本发明专利技术提供了一种茯苓子实体诱导培养方法，该方法包括如下步骤：先将茯苓菌株黑暗培养至菌丝全部长满培养基表面，再继续连续光照诱导培养，形成子实体。本发明专利技术采用简单的培养基配方，在可控环境参数连续光照的情况下，不同来源的茯苓菌株都可以稳定形成子实体，并产生有性孢子。本方法所用原料为常规原料，而且操作简单可行。茯苓子实体的稳定形成对茯苓交配型和生活史研究，茯苓杂交育种具有重要的意义。因此本发明专利技术具有重要的应用价值。因此本发明专利技术具有重要的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种茯苓子实体稳定形成的方法


[0001]本专利技术属于微生物
，具体涉及一种茯苓子实体稳定形成的方法。

技术介绍

[0002]茯苓是我国食药兼用的传统中药材，由于配伍率之高，因此有“十药九茯苓”之说。《神农本草经》将茯苓列为上品，“久服安魂养神，不饥延年”(周静静，2015.茯苓药用简史.黑龙江中医药大学硕士论文，哈尔滨.4)，《中国药典》记载其味甘淡、性平；归心、肺、脾、肾经；主要功能为利水渗湿，健脾宁心(国家药典委员会，2015.中国药典.北京：中国医药科技出版社.240)。现代医学研究表明茯苓主要药用成分为多糖和三萜类，具有抗肿瘤、抗氧化、免疫调节、降血糖、调节渗透压等多种功效(Huang Q,Jin Y,Zhang L,Peter CK,John FK,2007.Structure,molecular size and antitumor activities of polysaccharides from Poria cocos mycelia produced in fermenter.Carbohydrate Polymers,70(3):324-333；戴玉成，杨祝良，2008.中国药用真菌名录及部分名称的修订.菌物学报，27:801-824；Chen XP,Tang QC,Chen Y,Wang WX,Li SB,2010.Simultaneous extraction of polysaccharides from Poria cocos by ultrasonic technique and its inhibitory activities against oxidative injury in rats with cervical cancer.Carbohydrate Polymers,79(2):409-413；Li TH,Hou CC,Chang CL,Yang WC,2011.Anti-hyperglycemic properties of crude extract and triterpenes from Poria cocos.Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine,5:128-402)。
[0003]尽管茯苓菌核已经规模化栽培，但是长期无性繁殖导致栽培菌株同质化、退化严重；同时茯苓的野生种质资源匮乏，因此人工诱导茯苓有性子实体的形成对于其遗传育种的研究和开展显得尤为重要。另一方面，茯苓的交配型和生活史方面虽然有相关研究，但是仍未有定论，主要原因在于茯苓子实体和有性孢子的获得存在困难。
[0004]一些学者对于茯苓子实体形成也做了一些相关研究，有报道称茯苓菌株子实体产生的最适培养条件为培养温度(27
±
1)℃,光照强度60％,培养时间18～30d,传代次数5～7代,空气相对湿度75％左右,此处光照强度60％为无法界定的无效参数。专利“茯苓子实体培养基配方及其制备方法”(CN105316242B)同样公开了一种液体培养基中茯苓子实体的培养方法，所用原料包含了烤烟杆粉、油菜籽渣粉、玄参药渣粉和山银花粉等一些不常见的原料，而且培养基制备方法繁琐。
[0005]综上所述，虽然在茯苓子实体的形成方面，前人做了相关的一些研究，但未得到适用于不同茯苓菌株稳定形成子实体的培养方法，并且有些方法培养基原材料和制作方法方面比较复杂、繁琐，很大程度上影响和限制了茯苓遗传育种的进一步研究。

技术实现思路

[0006]本专利技术一个目的是提供一种茯苓子实体诱导培养方法。
[0007]本专利技术提供的方法，包括如下步骤：先将茯苓菌株黑暗培养至菌丝全部长满培养
基表面，再继续连续光照诱导培养，形成子实体。
[0008]上述方法中，所述连续光照培养为24h全天光照。
[0009]上述方法中，所述连续光照培养的光照强度为400－800lx。
[0010]上述方法中，所述连续光照培养的光照强度为5001x。
[0011]上述方法中，所述黑暗培养和连续光照培养的温度为25-28℃。
[0012]上述黑暗培养和上述连续光照培养所用的培养基为食药用菌研究常用的培养基，其制作简单。原料主要有土豆、葡萄糖、KH2PO4、MgSO4.7H2O和VB1。为茯苓生长提供基本的碳源、氮源、无机盐离子和维生素等多种物质。具体包括葡萄糖18-20g/L、KH2PO
4 0.8-1.2g/L、MgSO4.7H2O 0.5-0.8g/L、VB1 10-20mg/L和马铃薯滤液；
[0013]上述培养基还包括凝固剂，在本专利技术的实施例中采用的是琼脂粉。
[0014]上述马铃薯滤液为将马铃薯沸水煮至变软后过滤，得到的滤液。
[0015]在本专利技术的实施例中采用的每1L培养基按照如下方法制备：将马铃薯去皮切片，取200g加入到1L水中，煮沸至土豆变软，一夹即碎即可；然后四层纱布过滤，取滤液定容至1L，依次加入葡萄糖20g，KH2PO
4 1g，MgSO4.7H2O 0.5g和VB1 10mg，得到培养基；使用时取100ml加入1.8g琼脂粉，灭菌，得到子实体诱导培养基。
[0016]在本专利技术的实施例中，上述将茯苓菌株黑暗培养至菌丝全部长满培养基表面具体为使用传统简单方法接种，接种块1
×
1-2
×
2cm大小，接种在制作好的装有诱导培养基的锥形瓶培养基中央位置1-2块，接种后置于25-28℃环境下，黑暗条件进行发菌，至菌丝长满整个培养基的表面，约需5-7天。
[0017]在本专利技术的实施例中，上述连续光照诱导培养包括如下步骤：菌丝满瓶后，将锥形瓶转移至24h全天持续光照条件下，光照强度400-800lx，光照距离在20-30cm。温度保持在25-28℃，持续培养即可形成子实体，不同菌株子实体形成时间有差异，但该方法均可稳定形成子实体。
[0018]由上述的方法制备的茯苓子实体也是本专利技术保护的范围。
[0019]由上述的茯苓子实体产生的担孢子也是本专利技术保护的范围。
[0020]上述茯苓子实体或上述担孢子在茯苓杂交育种中的应用也是本专利技术保护的范围。
[0021]在本专利技术的实施例中举例的茯苓菌株有10株，包括来自于中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)的菌株5株CGMCC NO.5.137、CGMCC NO.5.157、CGMCC NO.5.908、CGMCC NO.5.55和CGMCC NO.5.545，日本技术与评价研究所(National Institute of Technology and Evaluation)生物资源中心(NBRC)购买的菌株NBRC30628，湖北中医院赠送的目前我国广泛栽培的菌株CGMCC5.78和Z1，茯苓28-1源于陕西西乡食用菌研究所(陕西省汉中市西乡县鹿龄路东47号)，870为湖北罗田九资河康弘种养合作社(湖北省黄冈市罗田县九资河镇)栽培菌核分离本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种茯苓子实体诱导培养方法，包括如下步骤：先将茯苓菌株黑暗培养至菌丝全部长满培养基表面，再继续连续光照培养，形成子实体。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述连续光照培养为24h全天光照。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述连续光照培养的光照强度为500－800lx。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：董彩虹，李寿建，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：