基于酵母的口服疫苗接种制造技术

描述了各种适用于口服疫苗接种的重组酵母、疫苗组合物、食品组合物、给动物接种疫苗的方法以及相关方法、试剂盒和核酸分子。试剂盒和核酸分子。试剂盒和核酸分子。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】基于酵母的口服疫苗接种
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年5月21日提交的美国临时申请号62/850,681和2020年3月18日提交的美国临时申请号62/991,536的优先权益，所述临时申请的内容特此以全文并入并且用于达成所有目的。


[0003]本公开涉及疫苗接种领域。更具体地，本公开涉及基于酵母的口服疫苗接种领域。特定实例涉及重组酵母细胞、疫苗组合物、食品组合物、生产疫苗的方法以及给动物接种疫苗的方法。本公开还涉及各种其它方法、试剂盒和核酸分子。

技术介绍

[0004]疫苗接种是一种用于减少和预防人类疾病的廉价且有效的方法。然而不幸的是，全球疫苗接种率仍使世界上约15％的人口易感染可预防的疾病。许多传统疫苗依赖于医疗保健专业人员所施用的注射，这固有地限制了可以治疗的患者数目。此外，基于注射的疫苗常常有大量的储存和处理要求，这可能会阻碍生产、交付和施用工作的规模化。
[0005]已经描述了基于酵母的疫苗平台用于大批量疫苗生产和/或用作口服疫苗接种。参见U.S.10,117,915。然而迄今为止，此类平台并不有效地释放复杂的免疫原，如病毒样颗粒或包膜病毒样颗粒。
[0006]因此，需要改善的疫苗、疫苗组分、疫苗组合物和相关方法、试剂盒以及其它疫苗相关技术。

技术实现思路

[0007]本专利技术人已经意外地发现，表达免疫原，如病毒样颗粒或包膜病毒样颗粒的重组酵母细胞中细胞壁的调控性透化可以显著改善重组酵母的免疫原释放。不希望受理论束缚，本专利技术人假设，通过使用本文所描述的一种或多种方法诱导调控性透化，与未透化的重组酵母细胞相比，可以改善所释放的免疫原(例如，呈包含免疫原和/或含有编码免疫原的包装核酸序列的VLP形式)的量；与先前所描述的透化方法相比，在更高水平上维持重组酵母细胞活力的程度；可以增加所得疫苗组合物的功效；和/或与先前所描述的方法相比，免疫原释放可以更具选择性。这些改善中的一者或多者继而可以显著提高体外免疫原生产方法中回收的免疫原的量或纯度；酵母提供给抗原呈递细胞的免疫原的量；和/或在已经施用重组酵母细胞的受试者胃肠道中由重组酵母细胞释放的免疫原的量。
[0008]通过诱导细胞壁透化剂，如细胞壁降解酶(例如，甘露聚糖酶、葡聚糖酶、几丁质酶或它们的组合)的表达，诱导细胞壁生物合成抑制剂的表达，或通过以调控的方式减少或消除细胞壁生物合成途径的组分的表达，可以诱导调控性透化。不希望受理论束缚，本专利技术人进一步假设，除了上文所描述的意外益处之外，细胞壁降解酶的调控性诱导还意外地通过增加细胞壁降解产物，如酵母糖蛋白、β葡聚糖或甘露聚糖的脱落和/或呈递来增加疫苗组
合物中酵母细胞壁组分提供的固有佐剂活性。
[0009]在优选的实施方案中，免疫原所递送给的抗原呈递细胞在体内，如在已经例如口服施用重组酵母的受试者的胃肠道中。在一些情况下，酵母作为口服疫苗口服施用。本文描述了各种适用于口服疫苗接种的示例性重组酵母细胞。
[0010]在一个方面，适用于口服疫苗接种的重组酵母细胞来源于野生型酵母细胞。一般来说，重组酵母细胞是包含至少一种异源核酸序列的宿主细胞。举例来说，异源元件可以包含异源启动子。异源启动子可以是来自与宿主细胞相比不同物种或品系的细胞的启动子。在一些实施方案中，异源启动子是与第二核酸序列可操作连接的内源启动子的拷贝，其中内源启动子和第二核酸序列在野生型酵母细胞中不是可操作连接的。
[0011]在一些实施方案中，与内源启动子的野生型位置相比，异源启动子是存在于基因组或细胞内位置中的不同位置的内源启动子。举例来说，与野生型酵母细胞中启动子的染色体位置相比，异源启动子可以处于不同的染色体位置。作为另一个实例，异源启动子可以存在于质粒或附加型片段上，其中启动子位于野生型酵母细胞中的宿主细胞染色体中。在一些实施方案中，与重组酵母细胞中异源启动子的细胞内位置相比，异源启动子可以是天然地在不同细胞器中发现的启动子。举例来说，异源启动子可以是来自内源酵母细胞线粒体基因组的启动子，并且与重组酵母细胞的细胞核中的第二核酸序列可操作连接。
[0012]在一个实施方案中，重组酵母细胞包含编码调控性启动子的第一核酸序列、编码免疫原的第二核酸序列以及编码细胞壁降解酶的第三核酸序列。第一核酸序列、第二核酸序列和第三核酸序列中的至少一者或每一者可以包含野生型酵母细胞中不天然出现的核酸序列。在一些实施方案中，第二和/或第三核酸序列的表达在调控性启动子的控制下。在一些实施方案中，第二和第三核酸序列的表达在调控性启动子的共同遗传控制下。
[0013]在一些实施方案中，免疫原是或包含病毒样颗粒(VLP)的组分，如衣壳蛋白或其功能片段。在一些实施方案中，免疫原是或包含含有第一部分和第二部分的融合蛋白，其中第一部分包含衣壳蛋白或其功能片段并且第二部分包含抗原。在一些实施方案中，免疫原是或包含包膜VLP(eVLP)，如基质蛋白或其功能片段的组分。在一些实施方案中，免疫原是或包含含有第一部分和第二部分的融合蛋白，其中第一部分包含基质蛋白或其功能片段并且第二部分包含抗原。在一些实施方案中，VLP包含含有第一部分和第二部分的融合蛋白，其中第一部分包含VLP形成单位(例如，HIV
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GAG或衣壳蛋白或其功能片段)并且第二部分包含免疫原或报告多肽。在一些情况下，报告多肽是酶。在一些情况下，报告多肽是荧光蛋白。在含有报告蛋白的实施方案中，此类VLP可用于跟踪向受试者施用VLP和/或受试者细胞对VLP的摄取。
[0014]示例性GAG
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GFP融合体以SEQ ID NO.14列出。在一些情况下，GAG
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GFP融合体包含SEQ ID NO.14的至少25、50、100、125或150个连续氨基酸或全部。在一些情况下，GAG
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GFP融合蛋白与SEQ ID NO.14的至少25、50、100、125或150个连续氨基酸或全部至少80％、85％、90％、95％或99％相同。在一些情况下，GAG
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GFP融合蛋白包含SEQ ID NO.14的不超过1、2、4或5个单氨基酸插入、取代和/或缺失。在一些情况下，GAG
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GFP融合蛋白包含SEQ ID NO.14的长度至少为25、50、100、125或150个氨基酸的连续氨基酸区域的不超过1、2、4或5个单氨基酸插入、取代和/或缺失。
[0015]在一些实施方案中，细胞壁降解酶是葡聚糖酶，如β
‑
葡聚糖酶。
[0016]在一个实施方案中，适用于口服疫苗接种的重组酵母细胞来源于野生型酵母细胞，并且包含编码调控性启动子的第一核酸序列；编码一种或多种来自流感病毒(或冠状病毒)的蛋白质的第二核酸序列；以及编码细胞壁降解酶的第三核酸序列。第一核酸序列、第二核酸序列和第三核酸序列中的至少一者或每一者可以包含野生型酵母细胞中不天然出现的核酸序列。在一些实施方案中，第二和/或第三核酸序列的表达在调控性启动子本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种重组酵母细胞，所述重组酵母细胞包含：
‑
与编码细胞壁透化剂的核酸序列可操作连接的异源可调控性启动子；以及
‑
与编码免疫原或其组分的核酸序列可操作连接的异源启动子，并且任选地还包含
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与编码病毒基质蛋白或其功能片段、病毒衣壳蛋白或其功能片段、或病毒结构蛋白或其功能片段的核酸序列可操作连接的异源启动子。2.如权利要求1所述的重组酵母细胞，其中所述免疫原包含VLP的组分。3.如权利要求2所述的重组酵母细胞，其中所述免疫原包含VLP的结构组分。4.如权利要求3所述的重组酵母细胞，其中所述免疫原包含衣壳蛋白或其功能片段。5.如权利要求3所述的重组酵母细胞，其中所述免疫原包含基质蛋白或其功能片段。6.如权利要求2所述的重组酵母细胞，其中所述免疫原包含与核酸结合肽融合的VLP组分，优选地其中所述结合肽包含MS2肽序列。7.如权利要求6所述的重组酵母细胞，其中所述重组酵母细胞还包含含有包含核酸结合肽配体序列的区域和编码抗原的区域的核酸序列，优选地其中所述核酸结合肽配体序列包含MS2配体序列。8.如权利要求2所述的重组酵母细胞，其中所述免疫原包含嵌入eVLP的脂质双层中的抗原。9.如权利要求1所述的重组酵母细胞，其中所述重组酵母细胞包含编码VLP的结构组分的核酸序列和编码嵌入由所述结构VLP组分形成的eVLP的脂双层中的抗原的核酸序列。10.如权利要求1至9中任一项所述的重组酵母细胞，其中所述免疫原和细胞壁透化剂在共同遗传控制下。11.如权利要求1至10中任一项所述的重组酵母细胞，其中所述细胞壁透化剂是β
‑
葡聚糖酶。12.如权利要求11所述的重组酵母细胞，其中所述β
‑
葡聚糖酶是β
‑1‑3‑
葡聚糖酶。13.如权利要求12所述的重组酵母细胞，其中所述β
‑1‑3‑
葡聚糖酶包含由SEQ ID NO.1编码的分泌蛋白序列，或其中所述β
‑1‑3‑
葡聚糖酶包含SEQ ID NO.10的至少100个连续氨基酸或全部。14.如权利要求12所述的重组酵母细胞，其中所述β
‑1‑3‑
葡聚糖酶与由SEQ ID NO.1编码的分泌蛋白序列至少95％或至少99％相同，或其中所述β
‑1‑3‑
葡聚糖酶与SEQ ID NO.10的至少100个连续氨基酸或全部至少95％相同。15.如权利要求12所述的重组酵母细胞，其中相对于由SEQ ID NO.1编码的蛋白质或以SEQ ID NO.10列出的多肽序列，所述β
‑1‑3‑
葡聚糖酶包含不超过1、2、3、4或5个单氨基酸取代、缺失和/或添加。16.如权利要求1至10中任一项所述的重组酵母细胞，其中所述细胞壁透化剂是几丁质酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：艾斯佩罗疫苗公司，
类型：发明
国别省市：