一种肇东假单胞菌株及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种低温脱氮的肇东假单胞菌株(Pseudomonas zhaodongensis)及包含其的微生物菌剂，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.23567，该菌株能够在低至5℃的温度下保持优异的除总氮效果，在8℃条件下，总氮降解率达到96％以上，硝酸盐态氮的降解率能达到97％以上，亚硝酸盐态氮的降解率达到100％，氨氮降解率也能达到99％以上，且随着温度的升高降解效率逐步提高。率逐步提高。

【技术实现步骤摘要】
一种肇东假单胞菌株及其应用


[0001]本专利技术涉及一种肇东假单胞菌株及包含其的微生物菌剂，具体涉及一种能够在低至5℃的温度下仍然具有优异的降解水中含氮物质的肇东假单胞菌株及其应用，属于环境微生物


技术介绍

[0002]随着国家工业化的发展与人民生活水平的提高，用水量的日益提升与污染物的排放使得水资源污染问题变得越来越严重。由于水污染而产生的环境事件、公共安全事件甚至重大社会事件，严重影响人民的身体健康和社会的和谐稳定，直接威胁到人类的生存空间。
[0003]在污水处理过程中，污水中的有机物和氮、磷等营养物质可通过代谢作用被微生物降解和利用。在污水处理中起主要作用的是在常温下具有较高活性和降解能力的中温菌，最佳温度为25～35℃，但在冬季水温偏低，我国北方气温通常低于10℃，当水温下降到15
‑
7℃时，系统降解效果会明显下降，利用传统的活性污泥法为主的工艺技术的处理效能大幅下降，出水水质达标保障率极低，通常的解决方法是降低污泥负荷，延长水力停留时间，这样会导致污水厂的占地面积增大，运转费用变高，所以筛选在低温下有高效降解总氮能力的菌株显得尤为重要。
[0004]自20世纪70年代中期以来，低温微生物菌剂已在世界范围内的污水处理中得到长足的发展和普遍的应用，并且取得了较好的处理效果，但是在研究和应用中尚存在以下不足之处：
[0005]1.大部分研究只停留在研究阶段，尚未形成成熟的产品；
[0006]2.且多数研究中菌种的接种量过大，实际应用中成本较高；/>[0007]3.最低有效温度大多数为10℃以上，应用成本较高。

技术实现思路

[0008]本专利技术针对水净化领域中现有的低温微生物菌种和菌剂所存在的不足，提供一种能够在低至5℃的温度下具有优异的降解总氮的效果，并且随着温度升高降解效率逐步提高的肇东假单胞菌株、包含其的微生物菌剂、微生物菌剂的制备方法及应用。
[0009]本专利技术要求保护一种低温脱氮的肇东假单胞菌株Pseudomonas zhaodongensis DB
‑
LT01，其16S rDNA序列如SEQ ID No:1所示，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC No.23567，保藏日期为2021年10月11日。
[0010]本专利技术还要求保护包含上述肇东假单胞菌株的微生物菌剂。
[0011]本专利技术技术方案的有益效果是：
[0012](1)本专利技术筛选出来的肇东假单胞菌株耐低温，能够在低至5℃的温度下保持优异的除总氮效果，在8℃条件下，总氮降解率达到96％以上，硝酸盐态氮的降解率能达到97％
以上，亚硝酸盐态氮的降解率达到100％，氨氮降解率也能达到99％以上，且随着温度的升高降解效率逐步提高，应用于污水处理中后，能够减少水体升温所需的费用；
[0013](2)本专利技术的微生物菌剂活菌数高，添加量可低至50ppm，能够降低购买菌种或微生物菌剂所需的费用；
[0014](3)本专利技术的微生物菌剂采用液体形式，成本比市面上的固体菌剂低10倍以上，不破坏原始环境、无二次污染、处理效果好、操作简便，菌剂应用领域广、普适性强。
[0015]上述包含肇东假单胞菌株的微生物菌剂的制备方法，包括如下步骤：
[0016](1)一级种子培养：无菌条件下取肇东假单胞菌株接种于富集培养基中，于25
‑
35℃、100
‑
150rpm的条件下培养12
‑
36h，得到一级种子培养液；
[0017](2)二级种子培养：无菌条件下将一级种子培养液按照1
‑
3vol％的接种量接种于富集培养基中，于25
‑
35℃、100
‑
150rpm的条件下培养12
‑
36h，得到二级种子培养液；
[0018](3)发酵：待发酵罐内的发酵培养基消毒完毕后，将步骤(2)所得的二级种子培养液按照0.1
‑
0.5vol％的接种量接种于发酵培养基中，控制温度为25
‑
35℃，通气比为1:(1
‑
2)，150
‑
300rpm的条件下发酵，待溶氧开始上升时停止发酵，得发酵液；
[0019](4)制备微生物菌剂：将步骤(3)所得的发酵液稀释灌装，即得微生物菌剂。
[0020]进一步，所述富集培养基的组成如下：硝酸钾2g/L，磷酸氢二钾0.5g/L，硫酸镁0.2g/L，酒石酸钾钠200g/L，余量为水，且pH为6.5
‑
8。
[0021]进一步，所述发酵培养基的组成如下：碳源15
‑
30g/L，氮源5
‑
15g/L，K
+ 0.2
‑
0.4g/L，Mg
2+ 0.05
‑
0.1g/L，Na
+ 0.05
‑
0.1g/L，Mn
2+
(1.5
‑
3.5)*10
‑3g/L，Fe
3+
或Fe
2+
(1
‑
2)*10
‑3g/L，余量为水，且pH为6.5
‑
8。
[0022]优选的，所述发酵培养基的组成如下：碳源20
‑
25g/L，氮源8
‑
12g/L，K
+ 0.2
‑
0.4g/L，Mg
2+ 0.05
‑
0.08g/L，Na
+ 0.05
‑
0.08g/L，Mn
2+
(2.0
‑
3.0)*10
‑3g/L，Fe
3+
或Fe
2+
(1
‑
1.5)*10
‑3g/L，余量为水，pH为6.5
‑
7.5；
[0023]进一步，所述碳源选自葡萄糖、蔗糖、淀粉、醋酸钠或丁二酸钠中的一种或多种。
[0024]进一步，所述氮源选自酵母浸粉、蛋白胨、尿素、硫酸铵或硝酸钾中的一种或多种。
[0025]优选的，所述K
+
的来源为磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、硫酸钾、氯化钾、硝酸钾中的一种或多种，所述Mg
2+
的来源为硫酸镁、硝酸镁、氯化镁中的一种或多种，所述Na
+
的来源为氯化钠、硫酸钠、硝酸钠、碳酸钠、醋酸钠、琥珀酸钠中的一种或多种，所述Mn
2+
的来源为一水硫酸锰、硝酸锰、氯化锰中的一种或多种，所述Fe
3+
的来源为氯化铁、硝酸铁、硫酸铁中的一种或多种，所述Fe
2+
的来源为硫酸亚铁、氯化亚铁、硫酸亚铁中的一种或多种。
[0026]微生物菌剂的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肇东假单胞菌株(Pseudomonas zhaodongensis)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.23567。2.一种微生物菌剂，其特征在于，包含权利要求1所述的肇东假单胞菌株。3.权利要求2所述微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)一级种子培养：无菌条件下取肇东假单胞菌株接种于富集培养基中，于25
‑
35℃、100
‑
150rpm的条件下培养12
‑
36h，得到一级种子培养液；(2)二级种子培养：无菌条件下将一级种子培养液按照1
‑
3vol％的接种量接种于富集培养基中，于25
‑
35℃、100
‑
150rpm的条件下培养12
‑
36h，得到二级种子培养液；(3)发酵：待发酵罐内的发酵培养基消毒完毕后，将步骤(2)所得的二级种子培养液按照0.1
‑
0.5vol％的接种量接种于发酵培养基中，控制温度为25
‑
35℃，通气比为1:(1
‑
2)，150
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300rpm的条件下发酵，待溶氧开始上升时停止发酵，得发酵液；(4)制备微生物菌剂：将步骤(3)所得的发酵液稀释灌装，即得微生物菌剂。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述富集培养基的组成如下：硝酸钾2g/L，磷酸氢二钾0.5g/L，硫酸镁0.2g/L，酒石酸钾钠200g/L，余量为水，且pH为6.5
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8；所述发酵培养基的组成如下：碳源15
‑
30g/L，氮源5
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15g/L，K
+<...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱威，刘圣鹏，张大飞，吴娜，孔令迎，
申请(专利权)人：青岛蔚蓝赛德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：