隐形眼镜的护理液中透明质酸钠的含量的检测方法技术

本发明专利技术描述了一种隐形眼镜的护理液中透明质酸钠的含量的检测方法，检测方法为高效液相色谱法，检测方法包括：a)配制透明质酸酶处理后的参照溶液和待测溶液；b)选择高效液相色谱仪的色谱参数，色谱参数包括使用ODS色谱柱；c)分别取参照溶液和待测溶液进样，并按照色谱参数运行高效液相色谱仪以获得对应于参照溶液的第一峰面积以及对应于待测溶液的第二峰面积；以及d)根据第一峰面积和第二峰面积以得到护理液中透明质酸钠的浓度。根据本发明专利技术，能够提供一种专属性好的、适用于隐形眼镜的护理液中透明质酸钠的含量的检测方法。液中透明质酸钠的含量的检测方法。液中透明质酸钠的含量的检测方法。

【技术实现步骤摘要】
隐形眼镜的护理液中透明质酸钠的含量的检测方法


[0001]本专利技术大体涉及化学检测领域，具体涉及一种隐形眼镜的护理液中透明质酸钠的含量的检测方法。

技术介绍

[0002]透明质酸是一种大分子酸性粘多糖，具有润滑、保湿、滋养、抗皱等作用，通常以钠盐即透明质酸钠的形式存在，透明质酸钠在化妆品、食品、药品中具有广泛的应用。
[0003]透明质酸钠也常作为隐形眼镜护理液的成分之一，当隐形眼镜护理液中的透明质酸钠含量在一定范围内时，有利于提供合适的液体粘度且利于护理液被眼体吸收。根据医疗器械分类目录，隐形眼镜的护理液被列为国家III类医疗器械。根据相应的法规要求，在规定期限后，护理液的部分成分含量的变化量应保持在较低水平，因此，需要对护理液中的透明质酸钠的含量进行检测。
[0004]目前，检测透明质酸钠的含量的检测方法有硫酸
‑
咔唑法，高效液相色谱法(HPLC法)等。硫酸
‑
咔唑法的工作原理是利用硫酸水解透明质酸钠得到的糖醛酸与咔唑的显色强弱来测定透明质酸钠含量高低，该方法在检测过程中的干扰因素比较多，专属性比较差，得到的检测结果可能与实际含量有较大的误差。高效液相色谱法为采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法，注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
[0005]目前，利用高效液相色谱法对透明质酸钠进行检测大致有以下几种方式：
①
>采用凝胶色谱柱(SEC柱)，利用待测物分子量的大小来达到分离目的，但是该方法测得的峰宽通常较宽，而且峰形对称性不佳，可能会对检测结果造成影响，此外透明质酸钠的粘度较高，可能会对SEC柱造成损伤；
②
采用糖基柱或氨基柱，其原理是透明质酸钠分子结构中存在羟基，该方法中的色谱柱的流动相的pH值的范围较窄，且色谱柱基质不太稳定，寿命较短；
③
采用离子交换色谱柱，该色谱柱工作原理是利用待测物电离后的电荷差异来选择性分离，而隐形眼镜的护理液中通常含有金属络合剂(例如EDTA)，若采用离子交换色谱柱，金属络合剂与透明质酸钠的酶解产物离子同流出，该方法的专属性也比较差。

技术实现思路

[0006]本专利技术是有鉴于上述现有技术的状况而提出的，其目的在于提供一种专属性好的、适用于隐形眼镜护理液中透明质酸钠的含量的检测方法。
[0007]为此，本专利技术提供了一种隐形眼镜的护理液中透明质酸钠的含量的检测方法，所述检测方法为高效液相色谱法，所述检测方法包括：a)配制透明质酸酶处理后的参照溶液和待测溶液；b)选择高效液相色谱仪的色谱参数，所述色谱参数包括使用ODS色谱柱；c)分别取所述参照溶液和所述待测溶液进样，并按照所述色谱参数运行所述高效液相色谱仪以获得对应于所述参照溶液的第一峰面积以及对应于所述待测溶液的第二峰面积；以及d)根
据所述第一峰面积和所述第二峰面积以得到所述护理液中透明质酸钠的浓度。具体地，基于以下公式得到所述护理液中透明质酸钠的浓度：
[0008][0009]其中，c
x
是指待测溶液的浓度，c
R
是指参照溶液的浓度，A
x
是指待测溶液的第二峰面积，A
R
是指参照溶液的第一峰面积。
[0010]在本专利技术中，通过使用透明质酸酶对透明质酸钠进行特异性地酶解并生成酶解产物，由此，能够得到含有透明质酸钠的酶解产物的参照溶液和待测溶液；再利用高效液相色谱法，对酶解产物进行检测，得到参照溶液和待测溶液的峰面积，再利用上述两个峰面积得到待测溶液中酶解产物的含量，从而，能够得到护理液中的透明质酸钠的含量；本专利技术使用的色谱参数选择使用ODS色谱柱(十八烷基硅烷键合硅胶填料，也可以称为C18色谱柱)，C18色谱柱是根据待测物分子极性大小进行选择性分离，相较于离子交换色谱柱，能够不受ETDA等护理液中其他物质的干扰，对护理液中透明质酸钠检测的专属性较好。
[0011]在本专利技术所涉及的检测方法中，可选地，在步骤b)中，可以使用AQ色谱柱。选用C18色谱柱中的AQ色谱柱，还能够对纯水相更加耐受，从而延长色谱柱的使用寿命。
[0012]在本专利技术所涉及的检测方法中，可选地，在步骤a)中，所述参照溶液的配置方法包括：准备透明质酸钠，加入至纯化水中；搅拌至所述透明质酸钠完全溶于所述纯化水，得到透明质酸钠溶液；取第一体积的透明质酸钠溶液，并向第一体积的所述透明质酸钠溶液中加入第二体积的透明质酸酶进行酶解反应，其中所述第二体积被设定成，使得1mg的透明质酸钠对应有不低于200活性单位(units)的透明质酸酶；以及得到预定浓度的所述参照溶液。由此，透明质酸酶能够对透明质酸钠进行更加充分地酶解，得到预定浓度的参照溶液；同时，在保障酶解能力的基础上，还能够节约酶的使用量，降低检测成本。
[0013]在本专利技术所涉及的检测方法中，可选地，在步骤a)中，所述待测溶液的配置方法包括：准备所述护理液；取第一体积的所述护理液，并向第一体积的所述护理液中加入第二体积的透明质酸酶进行酶解反应；以及得到所述待测溶液。由此，能够得到酶解处理后的待测溶液。
[0014]在本专利技术所涉及的检测方法中，可选地，所述酶解反应的反应温度为20℃～60℃，反应时间为大于3小时。由此，能够提供合适的酶解反应温度，有利于透明质酸酶的酶解反应的进行。
[0015]在本专利技术所涉及的检测方法中，可选地，所述透明质酸酶采用经由微生物发酵得到的透明质酸酶。微生物来源的透明质酸酶催化透明质酸钠得到的酶解产物含有不饱和双键，具有紫外吸收性，可以采用常规的紫外检测器对该酶解产物进行检测；而动植物来源的透明质酸酶催化透明质酸钠得到的酶解产物为四元糖，该糖类物质不具有紫外吸收性，不能采用紫外检测器对酶解产物进行检测。
[0016]在本专利技术所涉及的检测方法中，可选地，所述色谱参数还包括：使用pH值为2.0～5.0的磷酸二氢钾溶液与甲醇的混合相作为流动相，所述流动相中磷酸二氢钾溶液的浓度为5mM～100mM。在这种情况下，通过选择合适的流动相的成分、配比和pH值，对于护理液中的透明质酸钠的检测，能够有利于获得良好的分离效果和提高检测的准确度。
[0017]在本专利技术所涉及的检测方法中，可选地，所述流动相中磷酸二氢钾溶液与甲醇的
体积比为100:0～95:5。流动相的配比影响待测溶液中各成分的分离效果，在这种情况下，通过选择合适的流动相的配比，对于护理液中的透明质酸钠的检测，能够有利于获得良好的分离效果。
[0018]在本专利技术所涉及的检测方法中，可选地，所述色谱参数还包括：所述色谱柱的柱温为30℃；所述流动相的流速为0.9ml/min～1.2ml/min；检测波长为210nm～254nm。在这种情况下，通过选择合适的柱温与流速，对于护理液中的透明质酸钠的检测，能够有利于获得良好的分离效果；通过选择合适的检测波长，能够提高检测的准确度。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种隐形眼镜的护理液中透明质酸钠的含量的检测方法，所述检测方法为高效液相色谱法，其特征在于，所述检测方法包括：a)配制透明质酸酶处理后的参照溶液和待测溶液；b)选择高效液相色谱仪的色谱参数，所述色谱参数包括使用的色谱柱为ODS色谱柱；c)分别取所述参照溶液和所述待测溶液进样，并按照所述色谱参数运行所述高效液相色谱仪以获得对应于所述参照溶液的第一峰面积以及对应于所述待测溶液的第二峰面积；以及d)基于以下公式得到所述护理液中透明质酸钠的浓度：其中，c
x
是指所述待测溶液的浓度，c
R
是指所述参照溶液的浓度，A
x
是指所述待测溶液的第二峰面积，A
R
是指所述参照溶液的第一峰面积。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在步骤b)中，使用的色谱柱为AQ色谱柱。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在步骤a)中，所述参照溶液的配置方法包括：准备透明质酸钠，加入至纯化水中；搅拌至所述透明质酸钠完全溶于所述纯化水，得到透明质酸钠溶液；取第一体积的透明质酸钠溶液，并向第一体积的所述透明质酸钠溶液中加入第二体积的透明质酸酶进行酶解反应，其中所述第二体积被设定成，使得1mg的透明质酸钠对应有不低于200活性单位的透明质酸酶；以及得到预定浓度的所述参照...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐敏，王青松，朱新宇，张柳青，顾鹏鹏，
申请(专利权)人：珠海溪谷医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：