用于检测猫疱疹病毒的引物探针组合物、试剂盒及方法技术

本发明专利技术属于基因工程技术领域，具体提供了用于检测猫疱疹病毒的引物探针组合物、试剂盒及方法。本发明专利技术提供了一种以用于检测猫疱疹病毒的引物探针组合物作为主要成分的试剂盒，耗时短、特异性高、重复性好、灵敏度高，接近现有技术中检测猫疱疹病毒的最高水平，为诊断猫疱疹病毒提供可靠的实验依据。疹病毒提供可靠的实验依据。疹病毒提供可靠的实验依据。

【技术实现步骤摘要】
用于检测猫疱疹病毒的引物探针组合物、试剂盒及方法


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体涉及用于检测猫疱疹病毒的引物探针组合物、试剂盒及方法。

技术介绍

[0002]猫疱疹病毒(FHV)属于大型的病毒，直径在100
‑
130nm，具有封套及双股的DNA，在细胞核内进行增殖，并形成核内包涵体。猫感染FHV后表现出猫鼻性支气管炎，也简称猫鼻支，是猫最常见的病毒感染，其典型症状为以病毒引起的猫呼吸道感染为主，类似感冒的流鼻涕、咳嗽、发烧、打喷嚏、精神差，废食。由于病毒侵害猫的眼结膜，所以，患病的猫会出现流眼泪以及脓性分泌物，形成结膜水肿，严重时会导致角膜溃疡甚至失明。猫在患有几种主要疾病时临床症状相似，并常有混合感染，给诊断造成困难。传统的病毒诊断需要进行病毒分离、细胞培养、电镜观察及免疫检测等方法，缺乏对病毒进行快速、准确、敏感的检测方法。目前针对猫疱疹病毒检测的试剂盒大多存在操作复杂、特异性差、灵敏度低及检测结果准确性不高等缺陷。鉴于此，本专利技术建立了一种快速检测FHV的方法，为临床检测提供了保障。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是克服现有技术中对猫疱疹病毒检测操作复杂、特异性差、灵敏度低及检测结果准确性不高的问题。
[0004]为此，本专利技术提供了一种用于检测猫疱疹病毒的引物探针组合物，包括：
[0005]正向引物，其序列为：5
’‑
CCACAATAACAGGATATCA
‑3’
；
[0006]反向引物，其序列为5
’‑
TGATATCCTGTTATTGT
‑3’
；
[0007]探针，其序列为：5
’‑
CCCTAATCATAGATAGACACCCTCTC
‑3’
。
[0008]具体的，上述探针的5
’
端标记有荧光报告基团，3
’
端标记有荧光淬灭基团。
[0009]具体的，上述荧光报告基团包括FAM、VIC、JOE、TET、CY3、CY5、ROX、Texas RED或LC RED460中的一种；所述荧光淬灭基团包括BHQ1、BHQ2或BHQ3中的一种。
[0010]具体的，上述PCR反应液包括权利要求1
‑
3任意一项所述的用于检测猫疱疹病毒的引物探针组合物。
[0011]具体的，上述PCR反应液包括：1
‑
5mM的MgCl2、20
‑
50mM的Tris、100
‑
500mg/l的BSA、10
‑
100μM的dNTPs、0.1
‑
1.0μM的正向引物、0.1
‑
1.0μM的反向引物、0.1μM的探针。
[0012]具体的，上述用于检测猫疱疹病毒的试剂盒还包括阳性对照和阴性对照。
[0013]具体的，上述阳性对照为利用猫鼻气管炎病毒605株构建的质粒；所述阴性对照为超纯水。
[0014]本专利技术还提供了一种用于检测猫疱疹病毒的方法，包括以下步骤：
[0015](1)提取待测样本的DNA；
[0016](2)以待测样本的DNA为模板，进行荧光定量PCR反应，所述PCR反应体系包括上述
任意一项所述的用于猫疱疹病毒的引物探针组合物；
[0017](3)PCR反应结束后，根据Ct值判定检测结果。
[0018]具体的，上述步骤(2)中PCR反应程序为：95℃，3min；94℃，10s，58℃，20s，40个循环。
[0019]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点和有益效果：
[0020]本专利技术提供的这种以用于检测猫疱疹病毒的引物探针组合物作为主要成分的试剂盒耗时短、特异性高、重复性好、灵敏度高，接近现有技术中检测猫疱疹病毒的最高水平，为诊断猫疱疹病毒提供可靠的实验依据。
[0021]以下将结合附图对本专利技术做进一步详细说明。
附图说明
[0022]图1是本专利技术实施例2中PCR反应结果。
具体实施方式
[0023]下面将结合实施例对本专利技术中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。尽管已经详细描述了本专利技术的代表性实施例，但是本专利技术所属
的普通技术人员将理解，在不脱离本专利技术范围的情况下可以对本专利技术进行各种修改和改变。因此，本专利技术的范围不应局限于实施方案，而应由所附权利要求及其等同物来限定。
[0024]本专利技术提供了一种用于检测猫疱疹病毒的引物探针组合物，包括：
[0025]正向引物，其序列为：5
’‑
CCACAATAACAGGATATCA
‑3’
；
[0026]反向引物，其序列为5
’‑
TGATATCCTGTTATTGT
‑3’
；
[0027]探针，其序列为：5
’‑
CCCTAATCATAGATAGACACCCTCTC
‑3’
。
[0028]探针的5
’
端标记有荧光报告基团，3
’
端标记有荧光淬灭基团。其中，荧光报告基团包括FAM、VIC、JOE、TET、CY3、CY5、ROX、Texas RED或LC RED460中的一种；所述荧光淬灭基团包括BHQ1、BHQ2或BHQ3中的一种。
[0029]本专利技术还提供了一种用于检测猫疱疹病毒的试剂盒，包括PCR反应液、阳性对照和阴性对照。
[0030]其中，PCR反应液包括上述任意一项所述的用于检测猫疱疹病毒的引物探针组合物。具体的，PCR反应液包括：1
‑
5mM的MgCl2、20
‑
50mM的Tris、100
‑
500mg/l的BSA、10
‑
100μM的dNTPs、0.1
‑
1.0μM的正向引物、0.1
‑
1.0μM的反向引物、0.1μM的探针；
[0031]阳性对照为利用猫鼻气管炎病毒605株构建的质粒；阴性对照为超纯水。
[0032]本专利技术还提供了一种用于检测猫疱疹病毒的方法，包括以下步骤：
[0033](1)提取待测样本的DNA；
[0034](2)以待测样本的DNA为模板，进行荧光定量PCR反应，所述PCR反应体系包括上述任意一项所述的用于猫疱疹病毒的引物探针组合物；PCR反应程序为：95℃，3min；94℃，10s，58℃，20s，40个循环；
[0035](3)PCR反应结束后，根据Ct值判定检测结果。
[0036]下面通过具体实施例对本专利技术的用于检测猫疱疹病毒的引物探针组合物、试剂盒
及方法的效果进行研究。
[0037]实施例1：
[0038]本实施例提供了一种用于检测猫疱疹病毒的试剂盒，包括本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测猫疱疹病毒的引物探针组合物，其特征在于，包括：正向引物，其序列为：5
’‑
CCACAATAACAGGATATCA
‑3’
；反向引物，其序列为5
’‑
TGATATCCTGTTATTGT
‑3’
；探针，其序列为：5
’‑
CCCTAATCATAGATAGACACCCTCTC
‑3’
。2.如权利要求1所述的用于检测猫疱疹病毒的引物探针组合物，其特征在于：所述探针的5
’
端标记有荧光报告基团，3
’
端标记有荧光淬灭基团。3.如权利要求2所述的用于检测猫疱疹病毒的引物探针组合物，其特征在于：所述荧光报告基团包括FAM、VIC、JOE、TET、CY3、CY5、ROX、Texas RED或LC RED460中的一种；所述荧光淬灭基团包括BHQ1、BHQ2或BHQ3中的一种。4.一种用于检测猫疱疹病毒的试剂盒，其特征在于：包括PCR反应液；所述PCR反应液包括权利要求1
‑
3任意一项所述的用于检测猫疱疹病毒的引物探针组合物。5.如权利要求4所述的用于检测猫疱...

【专利技术属性】
技术研发人员：张炳为，周树民，辜嘉，
申请(专利权)人：苏州中科先进技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：