一种检测聚集蛋白聚糖的试纸条、试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种检测聚集蛋白聚糖的试纸条、试剂盒及检测方法，涉及免疫层析法定量检测技术领域。通过包被的特异性的抗聚集蛋白聚糖的抗体可以与待检样本中聚集蛋白聚糖(抗原)结合的特性，借助于检测示踪物的发光强度可以实现被示踪物标记的相应聚集蛋白聚糖的快速、准确检出。准确检出。准确检出。

【技术实现步骤摘要】
一种检测聚集蛋白聚糖的试纸条、试剂盒及检测方法


[0001]本专利技术涉及免疫层析法定量检测
，具体而言，涉及一种检测聚集蛋白聚糖的试纸条、试剂盒及检测方法。

技术介绍

[0002]聚集蛋白聚糖(aggrecan)最初是从软骨组织分离得到的一种蛋白聚糖，其核心蛋白质由多种结构域组成，并接有大约100条硫酸软骨素链。聚集蛋白聚糖为关节软骨细胞外基质的主要成分之一，聚集蛋白聚糖酶属于带有血小板反应蛋白结构域单元的裂解素和金属蛋白酶家族，通常认为基质金属蛋白酶在关节软骨的破坏中起决定性的作用。近年研究发现，在骨关节炎软骨破坏中，聚集蛋白聚糖酶引起的关节软骨破坏比基质金属蛋白酶(MMPs)引起的聚集蛋白聚糖核心蛋白降解大约提前3周，同时抑制聚集蛋白聚糖酶
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1和聚集蛋白聚糖酶
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2能有效防止关节软骨破坏。聚集蛋白聚糖酶在关节软骨破坏中起重要的作用，研究发现对聚集蛋白聚糖酶1和聚集蛋白聚糖酶
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2的双重抑制能有效防止关节软骨的破坏。
[0003]因此，聚集蛋白聚糖的检测对关节软骨状况的监测具有潜在的重大临床意义。目前国内外临床上检测聚集蛋白聚糖的常用方法有酶联免疫吸附法(ELISA)。该方法存在耗时长、检测灵敏度低、背景值高、操作繁琐、易造成假阳性和假阴性结果等问题，并且需要专业人员进行操作，无法满足临床对聚集蛋白聚糖快速准确定量检测的需要。而国内目前检测聚集蛋白聚糖的产品较少，临床上迫切需要建立一种快速、便捷、准确的检测聚集蛋白聚糖的产品或方法。
[0004]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种检测聚集蛋白聚糖的试纸条、试剂盒及检测方法以解决上述技术问题。
[0006]本专利技术是这样实现的：
[0007]本专利技术提供了一种检测聚集蛋白聚糖的试纸条，其包括基板，基板上依次设置有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，结合垫上固定有示踪物标记的抗聚集蛋白聚糖抗体1和示踪物标记的质控线配体1，硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线，检测线上包被有抗聚集蛋白聚糖的抗体2，质控线上包被有能与质控线配体1特异结合的配体2；
[0008]检测线上抗聚集蛋白聚糖的抗体2的包被浓度为1
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1.2mg/mL；质控线上配体2的包被浓度为1
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1.2mg/mL。在上述包被浓度下可以满足聚集蛋白聚糖的快速高灵敏度检出。
[0009]本专利技术提供的检测试纸条通过包被的特异性的抗聚集蛋白聚糖的抗体可以与待检样本中聚集蛋白聚糖(抗原)结合的特性，借助示踪物标记，检测示踪物的信号可以实现与相应聚集蛋白聚糖的快速、准确检出。
[0010]与现有技术相比，本专利技术提供的检测试纸条具有如下优势：制作方便，体积小、便
于携带且制备成本较低，克服了酶联免疫吸附法(ELISA)制作复杂、体积大、不便于携带等缺点，可以实现单人份检测。
[0011]上述试纸条具有检测灵敏度高，可以满足定量检测的需求。通过免疫分析仪对结果进行判读，可实现检测的自动化进行，减少主观因素的影响，提供便利、快速、可靠、结果可重复的诊断结果。采用上述试纸条适用于各种医疗现场的检测所需。
[0012]上述抗聚集蛋白聚糖的抗体1和抗聚集蛋白聚糖的抗体2是针对聚集蛋白聚糖的两种不同表位的抗体。可以根据需要选择市售的对聚集蛋白聚糖具有高亲和力的两种抗体。
[0013]本专利技术提供的检测试纸条可以满足包括不限于如下试样的检测：滑液、血清、或来自软骨外植块培养或软骨细胞培养的条件培养基的样品或含有它们的样品。
[0014]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述示踪物包括不限于胶体金、量子点、荧光微球、上转发光、时间分辨荧光或金磁纳米。示踪物是一种能发光且能与抗聚集蛋白聚糖抗体1和质控线配体1结合的物质。
[0015]示踪物发光的强度可利用特定仪器(任何可以检测示踪物的设备或仪器)定量判读或检测。而通过将示踪物与抗聚集蛋白聚糖抗体1以及质控线配体1偶联，从而对形成的偶联复合物以及示踪，在层析作用下，偶联复合物可以与硝酸纤维膜上的抗体2结合，检测线位置的示踪物含量与待测样本中的聚集蛋白聚糖的浓度成正相关，通过与已知不同浓度的聚集蛋白聚糖在试纸条上检测所制定的标准曲线进行比较分析，实现对聚集蛋白聚糖的定量检测。
[0016]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述质控线配体1和配体2为一对能发生特异性结合的生物材料。
[0017]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述质控线配体1选自如下物质中的任意一种：兔抗牛血清白蛋白与二硝基苯酚偶联物、X抗YIgG，其中X为兔、羊、牛、马、猪、鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭或鹅，Y为兔、羊、牛、马、猪、鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭或鹅，且X和Y不同；配体2选自如下物质中的任意一种：牛血清白蛋白与二硝基苯酚偶联物、YIgG；
[0018]优选地，X为羊，Y为兔。
[0019]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述试纸条还包括外壳，外壳具有腔体，试纸条固定设置在腔体内，在外壳上还设有加样孔和观察窗，加样孔对应样品垫设置，这样设置有助于准确加样于样品垫上。而观察窗对应硝酸纤维素的检测线和质控线设置，从而便于检测设备对检测线和质控线的示踪物发光强度进行检测。
[0020]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述样品垫上还设置有红细胞截留膜；
[0021]优选地，红细胞截留膜为滤血膜。样品垫用于过滤样本中的红细胞或其他杂质。
[0022]当样本中含有红细胞时，红细胞被滤血膜阻挡，可以减少红细胞对检测结果的影响，提升检测的准确度。因而，本专利技术提供的试纸条可以满足全血样本的检测。
[0023]本专利技术还提供了一种检测聚集蛋白聚糖的试剂盒，其包括上述的检测聚集蛋白聚糖的试纸条。
[0024]在一种可选的实施方式中，上述试剂盒还包括校准标准品(聚集蛋白聚糖)、说明书和样本稀释液。
[0025]本专利技术还提供了一种使用上述的检测聚集蛋白聚糖的试纸条进行聚集蛋白聚糖检测的方法，方法为非疾病的诊断目的，其包括：
[0026]上样至样品垫上，采用能对示踪物含量进行定量检测的仪器对试纸条的检测线进行检测，根据已知浓度的聚集蛋白聚糖在试纸条上检测所制定的标准曲线，获得聚集蛋白聚糖的定量结果。
[0027]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述聚集蛋白聚糖的含量根据检测线示踪物含量与质控线示踪物含量的比值来计算。
[0028]本专利技术具有以下有益效果：
[0029]本专利技术通过包被的特异性的抗聚集蛋白聚糖的抗体可以与待检样本中聚集蛋白聚糖(抗原)结合的特性，借助于检测示踪物的发光强度可以实现被示踪物标记的相应聚集蛋白聚糖的快速、准确检出。
[0030]本专利技术提供的检测试纸条具有如下优势：制作方便，体积小、便于携带且成本较低，克服了酶联免疫吸附法(ELISA)制作复杂、体积大、不便于携带等缺点，可以实现单人份检本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测聚集蛋白聚糖的试纸条，其特征在于，其包括基板，所述基板上依次设置有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述结合垫上固定有示踪物标记的抗聚集蛋白聚糖抗体1和示踪物标记的质控线配体1，所述硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线，所述检测线上包被有抗聚集蛋白聚糖的抗体2，所述质控线上包被有能与质控线配体1特异结合的配体2；所述检测线上抗聚集蛋白聚糖的抗体2的包被浓度为1
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1.2mg/mL；所述质控线上所述配体2的包被浓度为1
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1.2mg/mL。2.根据权利要求1所述的检测聚集蛋白聚糖的试纸条，其特征在于，所述示踪物是一种能发光且能与所述抗聚集蛋白聚糖抗体1和所述质控线配体1结合的物质。3.根据权利要求2所述的检测聚集蛋白聚糖的试纸条，其特征在于，所述示踪物为胶体金、量子点、荧光微球、上转发光、时间分辨荧光或金磁纳米。4.根据权利要求1所述的检测聚集蛋白聚糖的试纸条，其特征在于，所述质控线配体1和所述配体2为一对能发生特异性结合的生物材料。5.根据权利要求4所述的检测聚集蛋白聚糖的试纸条，其特征在于，所述质控线配体1选自如下物质中的任意一种：兔抗牛血清白蛋白与二硝基苯酚偶联物、X抗YIgG，其中所述X为兔、羊、牛、马、猪、鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭或鹅，所述Y为兔、羊、...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗进才，毛晴，盛正明，段丹，王飞，陈珍，周志丽，崔昆，宋卫，
申请(专利权)人：西安依朵生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：