一种抗间充质干细胞衰老修饰方法及其应用技术

本发明专利技术提供一种抗间充质干细胞衰老修饰方法及其应用。本发明专利技术通过对SINHCAF基因转录后水平的干预修饰来抑制AMSC衰老，并在细胞水平通过WB、PCR、CCK8细胞增殖分析、SA

【技术实现步骤摘要】
一种抗间充质干细胞衰老修饰方法及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种抗间充质干细胞衰老修饰方法及其应用，是通过干预SINHCAF的修饰来抵抗脂肪来源间充质干细胞衰老，进而提高其增殖能力，并提供SINHCAF干预修饰的AMSC(AMSC
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SINHCAF)在制备肝脏疾病治疗生物制剂中的应用。。

技术介绍

[0002]间充质干细胞(Mesenchymal stem cell,MSC)已被证实具有强大的分化潜能、自我更新能力、免疫调节作用以及靶向治疗功能。MSC细胞移植已在多种退行性疾病和组织急慢性损伤治疗中显示出明确疗效。动物水平的研究显示，移植MSC能缓解小鼠急、慢性肝损伤模型的肝脏炎症、促进肝细胞再生。并且临床实验研究也显示，重肝患者输注MSC的耐受性良好，可显著改善肝脏功能、降低Child
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Pugh和MELD评分、减少腹水及总死亡率。因此，对于目前临床上尚无有效药物和治疗手段的重大疾病，如肝衰竭等，MSC移植有望作为一种极具前景的细胞治疗新策略，用以补充甚或替代因血浆及肝源短缺而受限的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗间充质干细胞衰老修饰方法，其特征在于，通过以下步骤实现：(1)脂肪来源的间充质干细胞的制备：小鼠AMSC和成人AMSC按常规方法分离，mAMSC和hAMSC分别采用STEMCELLTM公司的小鼠和人MesenCult
TM
扩增试剂盒再添加L
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谷氨酰胺作为完全培养基进行培养扩增，AMSC增殖接近75％融合时，进行消化、传代；(2)SINHCAF修饰的AMSC的构建：a.SINHCAF修饰的hAMSC的构建：以hSINHCAF慢病毒载体pLVX
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IRES
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ZsGreen1
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SINHCAF感染hAMSC，hSINHCAF慢病毒载体包含目的片段序列如SEQ:NO.1所示，为包含hSINHCAF mRNA的3
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UTR区的靶向结合序列；b.SINHCAF修饰的mAMSC的构建：以mSINHCAF慢病毒载体pLVX
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IRES
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ZsGreen1
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SINHCAF感染mAMSC，mSINHCAF慢病毒载体包含目的片段序列如SEQ:NO.2所示，为包含mSINHCAF mRNA的3
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UTR区的靶向结合序列；以感染空慢病毒的mAMSC作为对照；(3)AMSC
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SINHCAF中SINHCAF表达水平分析：采用Western Blot方法检测天然AMSC、AMSC
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Ctrl和AMSC
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SINHCAF细胞中SINHCAF的蛋白表达水平；(4)在体外培养传代诱导的细胞复制衰老模型中分析天然AMSC、AMSC
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Ctrl和AMSC
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...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘艳宁，楼国华，齐津津，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：