用于因子VII疗法的组合物、装置和方法制造方法及图纸

本文描述了被工程化以分泌FVII蛋白的RPE细胞，以及包含这些工程化的RPE细胞的组合物、药物制剂、和可植入装置，以及制备和使用它们用于治疗患有血友病或FVII缺乏症的患者的方法。法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于因子VII疗法的组合物、装置和方法
[0001]优先权要求
[0002]本申请要求2019年3月27日提交的美国临时申请号62/824,963以及2019年9月27日提交的美国临时申请号62/907,386的优先权。将前述申请中的每一个的披露内容通过引用以其全文并入本文。
[0003]序列表
[0004]本申请含有一份已经以ASCII格式电子递交的序列表并且将该序列表通过引用以其全文特此并入。于2020年3月25日创建的所述ASCII副本命名为S2225
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7029WO_SL.txt且大小为122,698字节。

技术介绍

[0005]因子VII(FVII)在凝血中起着关键作用，这是一系列反应，其中血浆无活性酶原转化为活性酶，并导致形成不溶性纤维蛋白凝块。FVII的无活性形式在肝脏中表达并作为单链酶原分泌到血液中。在对血管造成损伤后，组织因子(TF)暴露于循环的FVII，并且当与TF复合时，通过几种不同的蛋白酶将FVII活化为FVIIa，并且因子FVIIa:TF复合物将催化因子IX(FIX)和因子X(FX)两者分别转化为其活化的形式FIXa和FXa，这导致凝血酶产生且随后形成纤维蛋白凝块。
[0006]因子VII缺乏症是一种罕见的出血障碍，其特征在于FVII的缺乏或活性降低，估计发病率为300,000之一至500,000之一人。先天性FVII缺乏症是由F7基因的突变引起的。获得性FVII缺乏症可能是由严重的肝病、败血症或维生素K缺乏导致的，也可能是由某些药物(诸如华法林)导致的。r/>[0007]重组活化FVII蛋白(rFVIIa)被批准用于促进具有针对FVIII和FIX的抗体抑制剂的患有血友病的个体、患有获得性血友病的患者和患有先天性FVII缺乏症的患者的止血。然而，rFVIIa具有短半衰期，因此在血友病患者中在短时间段内需要多剂量以管理活动性出血发作。因此，额外的FVII疗法是理想的。

技术实现思路

[0008]本文描述了经工程化以表达和分泌FVII的视网膜色素上皮(RPE)细胞，以及包含该工程化的RPE细胞的组合物、药物产品、医疗装置，以及制备和使用它们的方法。在一些实施例中，包含工程化的RPE细胞的这些组合物、产品和装置被配置为减轻当施用于(例如放置在体内)哺乳动物受试者时的异物反应。
[0009]在一方面，本披露的特征在于包含启动子的分离的多核苷酸，该启动子与前体FVII编码序列可操作地连接。在实施例中，该启动子序列基本上由以下的核苷酸序列组成，该核苷酸序列与SEQ ID NO:10(图6B中显示的序列的核苷酸337
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2069)相同或基本上相同。在实施例中，该前体FVII编码序列对于在哺乳动物细胞中的表达是密码子优化的。在实施例中，该前体FVII编码序列编码FVII融合蛋白。在实施例中，该FVII融合蛋白包含与FVII氨基酸序列的C端可操作地连接的编码非FVII多肽的氨基酸序列。在实施例中，该非FVII多肽
赋予融合蛋白有益的特性，例如，增加表达和/或分泌的蛋白质的量，或延长体内半衰期。在实施例中，该FVII融合蛋白包含哺乳动物白蛋白(例如，人白蛋白)的氨基酸序列，其通过肽接头连接到FVII氨基酸序列的C端。在实施例中，该肽接头是蛋白水解可裂解的。在实施例中，该前体FVII密码子优化的编码序列是SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4。在实施例中，该密码子优化的FVII序列(例如，SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4)可操作地连接到SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:8。在实施例中，该分离的多核苷酸作为双链DNA分子中的一条链提供，例如，在表达载体中。
[0010]在另一方面，本披露提供了包含外源核苷酸序列的工程化的RPE细胞，该细胞包含与前体FVII编码序列可操作地连接的启动子序列。在实施例中，该外源核苷酸序列包含染色体外的表达载体。在实施例中，该外源核苷酸序列整合到RPE细胞(例如，ARPE
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19细胞)基因组中的至少一个位置中。
[0011]在又另一个实施例中，本披露提供了包含至少一个细胞容纳隔室的装置，该细胞容纳隔室包含本文所述的工程化的RPE细胞或多个此类细胞。在一些实施例中，这些组合物、产物和装置包含包封一个或多个工程化的RPE细胞的聚合物组合物。在实施例中，该包封聚合物组合物包含至少一种细胞结合物质(CBS)，例如细胞结合肽，如RGD(SEQ ID NO:33)或RGDSP(SEQ ID NO:48)。在实施例中，该包封聚合物组合物包含用GRGDSP(SEQ ID NO:49)共价修饰的藻酸盐。在一些实施例中，该装置进一步包含至少一种用于减轻当该装置被放置于受试者体内时的异物反应(FBR)的器件。在实施例中，用于减轻FBR的器件包括如本文所定义的去纤维化化合物，其设置在装置的外表面上和/或环绕细胞容纳隔室的屏障隔室内。在实施例中，该去纤维化化合物是具有式(I)的化合物：
[0012][0013]或其药学上可接受的盐，其中变量A、L1、M、L2、P、L3和Z以及相关的子变量如本文所定义。在一些实施例中，具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐(例如，式(I
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a)、(I
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b)、(I
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c)、(I
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d)、(I
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e)、(I
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f)、(II)、(II
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a)、(III)、(III
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a)、(III
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b)、(III
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c)、或(III
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d))是本文所述的化合物，包括例如，本文表3中显示的化合物之一。在实施例中，该去纤维化化合物是表3中所示的化合物100、化合物101或化合物102。
[0014]在一方面，本披露的装置是2隔室水凝胶胶囊(例如，微胶囊(直径小于1mm)或毫胶囊(直径至少1mm))，其中包含多个活的工程化的RPE细胞(以及任选地一种或多种细胞结合物质)的细胞容纳隔室(例如，内隔室)被包含去纤维化聚合物(例如，外隔室)的屏障隔室环绕。在实施例中，该去纤维化化合物是具有式(I)的化合物。在实施例中，该水凝胶胶囊是球形胶囊。
[0015]在另一方面，本披露的特征在于包含多个(3、6、12、25、50或更多个中至少任一个)本文所述的RPE细胞容纳装置的制品(例如，组合物)。在一些实施例中，制品是药学上可接受的组合物。
[0016]在另一方面，本披露的特征在于制备和制造装置的方法，该装置包含多个被工程化以表达和分泌FVII的RPE细胞。在一些实施例中，该方法包括提供多个工程化的RPE细胞并将该多个RPE细胞放置于封闭组分(例如，如本文所述的装置的细胞容纳隔室)中。在一些
实施例中，封闭组分包括柔性聚合物(例如，PLA、PLG、PEG、CMC或多糖，例如藻酸盐)。在一些实施例中，封闭组分包括非柔性聚合物或金属外壳。在一些实施例中，该装置的表面是例本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种能够表达和分泌FVII蛋白的工程化的RPE细胞，其中该细胞包含含有编码该FVII蛋白的外源核苷酸序列，其中该编码序列包含选自下组的前体FVII编码序列，该组由以下组成：(i)SEQ ID NO:3，(ii)与SEQ ID NO:3至少95％、96％、97％、98％、99％或更多相同的核苷酸序列，(iii)SEQ ID NO:4，和(iv)与SEQ ID NO:4至少95％、96％、97％、98％、99％或更多相同的核苷酸序列。2.如权利要求1所述的工程化的RPE细胞，其中该外源核苷酸序列进一步包含与该编码序列可操作地连接的启动子，其中该启动子任选地基本上由以下的核苷酸序列组成或由其组成，该核苷酸序列与SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:21相同或基本上相同。3.如权利要求2所述的工程化的RPE细胞，其中该编码序列包含SEQ ID NO:3，并且该启动子由SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:21组成。4.如权利要求1所述的工程化的RPE细胞，其中该FVII蛋白是FVII融合蛋白，并且任选地该FVII融合蛋白包含SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12。5.如权利要求4所述的工程化的RPE细胞，其中该编码序列包含SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:18。6.如权利要求1所述的工程化的RPE细胞，该工程化的RPE细胞包含SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:25。7.如权利要求1所述的工程化的RPE细胞，该工程化的RPE细胞包含SEQ ID NO:22。8.如权利要求1所述的工程化的RPE细胞，其中该外源核苷酸序列包含染色体外表达载体或被整合到该RPE细胞中的至少一个染色体位置中。9.如权利要求1所述的工程化的RPE细胞，该工程化的RPE细胞衍生自ARPE
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19细胞。10.一种组合物，该组合物包含如权利要求1所述的工程化的RPE细胞。11.如权利要求10所述的组合物，该组合物是多克隆细胞培养物或单克隆细胞系的培养物。12.一种分离的双链DNA分子，该分离的双链DNA分子包含选自下组的核苷酸序列，该组由以下组成：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID ...

【专利技术属性】
技术研发人员：LE巴尼，M博雷加德，G卡莫纳，FC冈萨雷斯，R海德布雷赫特，EE约翰斯顿，RJ米勒，O奥康纳，MA奥伯利，D佩里特，JA塞韦尔，DM史密斯，O维塞，PK沃顿，Z伊恩，
申请(专利权)人：西吉隆医疗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：