一种利用体外透皮试验预测农药施用人员健康的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用体外透皮试验预测农药施用人员健康的方法，涉及农药施用人员健康检测技术领域，其步骤如下：步骤一，离体透皮的制备：首先将处于低温冰箱保存的巴马香猪腹部皮肤，在试验前自然解冻，之后利用生理盐水浸泡30min，最后用滤纸吸干，备用；步骤二，将三组腹部皮肤置于相同浓度的液面之上，并与液面接触，之后利用磁力搅拌器不断搅拌接受液，使对应农药自然释放，再取5mol

【技术实现步骤摘要】
一种利用体外透皮试验预测农药施用人员健康的方法


[0001]本专利技术涉及农药施用人员健康检测
，具体为一种利用体外透皮试验预测农药施用人员健康的方法。

技术介绍

[0002]农药在使用过程中，施用人员会受到短期大剂量的农药暴露，从而产生直接的健康危险，在国际组织和各国的努力下，采用风险评估方法管理农药、预测农药对接触人群的风险和保护农药接触人群的身体健康已越来越受到重视，农药风险评估对于农药风险管理和风险交流与合作均有着重大的意义，然而我国农药风险评估技术起步较晚，尤其在职业健康风险评估方面，目前尚未开展过相关的专题研究，农药可经消化道、呼吸道和皮肤三种途径进入人体，农药使用计程中施药者麻痹大意、防护不当是引起中毒的最主要原因，现有手段检测效率不高，且不够准确，从而亟需一种预测农药施用人员健康的方法。

技术实现思路

[0003]基于此，本专利技术的目的是提供一种利用体外透皮试验预测农药施用人员健康的方法，以解决现有技术中检测效率不高，且不够准确的技术问题。
[0004]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种利用体外透皮试验预测农药施用人员健康的方法，其步骤如下：
[0005]步骤一，离体透皮的制备：首先将处于低温冰箱保存的巴马香猪腹部皮肤，在试验前自然解冻，之后利用生理盐水浸泡30min，最后用滤纸吸干，备用；
[0006]步骤二，将三组腹部皮肤置于相同浓度的液面之上，并与液面接触，之后利用磁力搅拌器不断搅拌接受液，使对应农药自然释放，再取5mol
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L
‑1、10mol
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L
‑1、20mol
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L
‑1的农药，并均匀喷洒在离体皮肤上；
[0007]步骤三，并向接受池中加入接受液19.5mL，使得吸收液水平面，准确高过离体皮肤面约1mm；
[0008]步骤四，将步骤三中装置置于37℃恒温水浴中，再将磁力搅拌器的搅拌速度调为350r
·
min
‑1；
[0009]步骤五，取皮下接受液样品：首先于喷洒后的24h内，取0、2、6、12时的接受液2mL，且每个时间点平均分成6份，取样后即向接受室内补充2mL接受液，经0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻保存，之后精密吸取对应时间段的透皮接受液100μL，置2mL聚塑离心管中，加入80％甲醇水100μL，之后精密加入甲醇100μL，并涡旋混匀1min，最后精密量取20μL样液进行LC
‑
MS/MS分析，一一记录数据；
[0010]步骤六，取离体皮肤内滞留量样品：取经0、2、6、12h透皮吸收实验完毕后的皮肤，用滤纸吸干吸收液，去除皮上残留的药液，将皮肤剪碎，并在打磨槽内加入50％乙醇溶液25mL，可调速匀浆机打磨，离心，取上清液约2mL，冷冻保存待测，之后精密吸取50％乙醇制猪皮匀浆液100μL，置2mL聚塑离心管中，精密加入甲醇100μL，并涡旋混匀1min，之后精密量
取20μL进行LC
‑
MS/MS分析，一一记录数据；
[0011]步骤七，分析数据，预测农药施用人员在不同浓度的农药下的健康情况；
[0012]步骤八，遵照《农药施用人员健康风险评估指南》征求意见稿，按公式进行计算
[0013][0014]因此得到农药施用人员对实验农药的经皮及吸入允许暴露量；
[0015]步骤九，遵照《农药施用人员健康风险评估指南》征求意见稿，按公式进行计算
[0016][0017]式中：Exposure——暴露量，单位为毫克每千克体重(mg/kg体重)；UE——单位暴露量，单位为毫克每千克(mg/kg)；Rate——单位面积的用药量，单位为千克每公顷(kg/ha)；Area——每天施用面积，单位为公顷(ha)；BW——施用人员体重，单位为千克(kg)，一般取值为60.6kg
[0018]因此得到农药施用人员对实验农药的经皮及吸入暴露量；
[0019]步骤十，遵照《农药施用人员健康风险评估指南》征求意见稿，按公式进行计算
[0020][0021]式中：RQ——风险系数，得到农药的经皮、吸入暴露分险系数。
[0022]若综合风险系数≤1，则健康风险可接受；若综合风险系数＞1，则健康风险不可接受；
[0023]步骤十一，将步骤五、步骤六中得到的数据带入至步骤七、步骤八与步骤九中，依次进行农药分险评估。
[0024]通过采用上述技术方案，通过体外透皮试验从而预测农药对施用人员的危害，对毒性数据进行全面评估，研究更加科学、先进并具有实用性和可操作性的试验评估方法。
[0025]本专利技术进一步设置为，所述接受液包括PEG4000、乙醇、甲醇或异丙醇水溶液中的一种或多种。
[0026]通过采用上述技术方案，利用PEG4000、乙醇、甲醇或异丙醇水溶液具有维持接受池中的有效浓度梯度。
[0027]本专利技术进一步设置为，所述改良Franz扩散装置其扩散池中暴露的皮肤面积为1.77cm2，接受室容积为19mL。
[0028]通过采用上述技术方案，可以更加方便完成实验，使得实验数据更加准确。
[0029]综上所述，本专利技术主要具有以下有益效果：本专利技术通过体外透皮试验，有效的避免了需要通过农药施用人员自身进行检测，而是通过体外透皮的方式，来探测不同浓度农药对人体健康的危害，以此有效的预测农药施用人员的健康，简单快捷。
具体实施方式
[0030]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。下面的实施例是示例性的，仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。
[0031]下面根据本专利技术的整体结构，对其实施例进行说明。
[0032]实施例1
[0033]一种利用体外透皮试验预测农药施用人员健康的方法，其步骤如下：
[0034]步骤一，离体透皮的制备：首先将处于低温冰箱保存的巴马香猪腹部皮肤，在试验前自然解冻，之后利用生理盐水浸泡30min，最后用滤纸吸干，备用；
[0035]步骤二，将三组腹部皮肤置于相同浓度的液面之上，并与液面接触，之后利用磁力搅拌器不断搅拌接受液，使对应农药自然释放，再取5mol
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‑1、的农药，并均匀喷洒在离体皮肤上；
[0036]步骤三，并向接受池中加入接受液19.5mL，使得吸收液水平面，准确高过离体皮肤面约1mm；
[0037]步骤四，将步骤三中装置置于37℃恒温水浴中，再将磁力搅拌器的搅拌速度调为350r
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‑1；
[0038]步骤五，取皮下接受液样品：首先于喷洒后的24h内，取0、2、6、12时的接受液2mL，且每个时间点平均分成6份，取样后即向接受室内补充2mL接受液，经0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻保存，之后精密吸取对应时间段的透皮接受液100μL，置2mL聚塑离心管中，加入80％甲醇水100μL，之后精密加入甲醇100μL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用体外透皮试验预测农药施用人员健康的方法，其特征在于：其步骤如下：步骤一，离体透皮的制备：首先将处于低温冰箱保存的巴马香猪腹部皮肤，在试验前自然解冻，之后利用生理盐水浸泡30min，最后用滤纸吸干，备用；步骤二，将三组腹部皮肤置于相同浓度的液面之上，并与液面接触，之后利用磁力搅拌器不断搅拌接受液，使对应农药自然释放，再取5mol
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‑1、10mol
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‑1、20mol
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‑1的农药，并均匀喷洒在离体皮肤上；步骤三，并向接受池中加入接受液19.5mL，使得吸收液水平面，准确高过离体皮肤面约1mm；步骤四，将步骤三中装置置于37℃恒温水浴中，再将磁力搅拌器的搅拌速度调为350r
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‑1；步骤五，取皮下接受液样品：首先于喷洒后的24h内，取0、2、6、12时的接受液2mL，且每个时间点平均分成6份，取样后即向接受室内补充2mL接受液，经0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻保存，之后精密吸取对应时间段的透皮接受液100μL，置2mL聚塑离心管中，加入80％甲醇水100μL，之后精密加入甲醇100μL，并涡旋混匀1min，最后精密量取20μL样液进行LC
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MS/MS分析，一一记录数据；步骤六，取离体皮肤内滞留量样品：取经0、2、6、12h透皮吸收实验完毕后的皮肤，用滤纸吸干吸收液，去除皮上残留的药液，将皮肤剪碎，并在打磨槽内加入50％乙醇溶液25mL，可调速匀浆机打磨，离心，取上清液约2mL，冷冻保存待测，之后精密吸取50％...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳伟荣，陆永新，杨静，杜厚斌，贾珍容，
申请(专利权)人：苏州西山中科药物研究开发有限公司，
类型：发明
国别省市：