抗骨质疏松的龟鹿补肾丸提取物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种抗骨质疏松的龟鹿补肾丸提取物及其制备方法和应用，涉及中药制剂领域，本发明专利技术根据龟鹿补肾丸中有效成分的存在状态、极性和溶解性，采用不同的提取方法对龟鹿补肾丸进行有效物质群的提取分离，分别获得了总黄酮精提液、鹿角胶原蛋白液、龟甲胶原蛋白液和多糖水溶液，通过采用三维细胞模型对总黄酮精提液、鹿角胶原蛋白液、龟甲胶原蛋白液和多糖水溶液进行了活性筛选，由检测结果可知，四种活性物质均能明显提高成骨细胞的细胞增值率，而且相对于总黄酮精提液和多糖水溶液，龟甲胶原蛋白液和鹿角胶原蛋白液对成骨细胞的细胞增值率更为明显，由此可见，龟鹿补肾丸提取物具有抗骨质疏松的显著性作用，有开发成抗骨质疏松药物的前景。抗骨质疏松药物的前景。

【技术实现步骤摘要】
抗骨质疏松的龟鹿补肾丸提取物及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及中药制剂领域，尤其涉及抗骨质疏松的龟鹿补肾丸提取物及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]骨质疏松症(osteoporosis，OP)是一种以骨量低下，骨微结构破坏，导致骨脆性增加，易发生骨折为特征的全身性代谢性骨病，多见于老年人群和绝经后妇女，造成骨质疏松症的主要是源自体内骨代谢失衡，任何由破骨细胞激活骨吸收活动增强，导致骨量丢失增加的原因，均可产生骨质疏松症；或由成骨细胞功能受到抑制，骨生成活动降低，形成骨量不足，亦可导致骨质疏松症。
[0003]现阶段，骨质疏松的药物治疗主要是通过抑制骨吸收、促进骨形成和骨矿化，进而达到缓解骨痛，增加骨量，降低骨折发生率的目的。目前，防治骨质疏松的西药主要分为三类：一是骨吸收抑制药，如雌激素、选择性雌激素受体调节剂、双磷酸盐和降钙素等；二是骨形成促进药，如甲状旁腺激素、甲状旁腺激素类似物、氟制剂等；三是骨矿化促进药，如钙剂、维生素D及其活性代谢物等。雌激素替代治疗(ERT)是目前临床上公认的治疗PMOP有效的西药治疗方案。然而长期使用外源性雌激素、甲状旁腺激素、氟制剂等药物会增加子宫内膜增生、子宫癌、乳腺癌、卵巢癌、静脉血栓形成等并发症的危险性，同时也增加心脏疾患、乳腺癌及中风的发病率。
[0004]中医药往往能够在促进成骨作用方面起到很好的作用，对于OP更有针对性，而且中医药治疗OP往往结合整体观念，对患者进行综合治疗，整体调理患者病理状态，在改善骨质疏松的同时往往也会有助于患者肌肉力量、平衡能力的恢复。目前中医药防治老年性骨质疏松不仅有中药复方，还有服用方便的中成药制剂，同时还有单味中药提取物或有效成分，使得中医药可以广泛应用于OP患者。但是目前中医药防治OP仍存在诸多瓶颈：第一，中药复方符合中医辨证论治思维，可以更好从整体观念出发解决问题，但是由于标准不一，药物成分复杂，机制研究往往不够透彻，容易受多种混杂因素影响；第二，对初步发现有效成分，基础研究系统性不足；因此，要转变和完善研究思路，明确中药治疗OP的起效环节，进一步强化中药药理学和生物药剂学对防治骨质疏松的常用草药及中成药进行比较性研究，筛选出药精效佳的中药组方、单味药物或其有效组分，进行细胞学实验和动物实验，证明该中药对OP的药效。
[0005]龟鹿补肾丸，出自《中华人民共和国药典》，主治身体虚弱，精神疲乏，腰腿酸软、头晕目眩、肾亏精冷、性欲减退、夜多小便、健忘失眠。龟鹿补肾丸由菟丝子、锁阳、龟板胶、鹿角胶、首乌、金樱子、覆盆子、淫羊藿、狗脊、熟地、续断、淮山等十几味中药组成，具有壮筋骨，益气血，补肾壮阳之功效。
[0006]迄今为止，关于龟鹿补肾丸治疗骨质疏松方面的研究非常少，但是龟鹿补肾丸具有很大的抗骨质疏松潜能，由于龟鹿补肾丸中成分过多，起效成分也很复杂，可能是多个物质协同作用，应对其进行有效物质群的提取分离从而推动其应用和研究，特别是新适应症
的开发应用。

技术实现思路

[0007]针对
技术介绍
提出的问题，本专利技术的目的在于提出一种抗骨质疏松的龟鹿补肾丸提取物的制备方法，通过采用不同的提取方法对龟鹿补肾丸进行有效物质群的提取分离，获得了龟鹿补肾丸提取物、总黄酮精提液、鹿角胶原蛋白液、龟甲胶原蛋白液和多糖水溶液，四种活性物质均能明显提高成骨细胞的细胞增值率，由此可见，龟鹿补肾丸提取物具有抗骨质疏松的显著性作用，有开发成抗骨质疏松药物的前景。
[0008]本专利技术的另一目的在于提出一种抗骨质疏松的龟鹿补肾丸提取物，通过上述制备方法制备得到，能明显提高成骨细胞的细胞增值率，有开发成抗骨质疏松药物的前景。
[0009]本专利技术的又一目的在于提出一种抗骨质疏松的组合物，能明显提高成骨细胞的细胞增值率，具有抗骨质疏松的显著性作用。
[0010]为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0011]一种抗骨质疏松的龟鹿补肾丸提取物的制备方法，所述龟鹿补肾丸提取物包括总黄酮精提液、鹿角胶原蛋白液、龟甲胶原蛋白液和多糖水溶液，所述制备方法包括以下步骤：
[0012]总黄酮精提液的提取：向龟鹿补肾丸粉末中加入乙醇浸泡后回流，将回流得到的提取液减压浓缩得到粗提物，将粗提物用乙醇溶解，加入盐酸溶液，水浴加热，室温放置析出沉淀，过滤后将沉淀干燥，得到墨绿色粉末；取墨绿色粉末溶于蒸馏水后，加入乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯层减压浓缩后，真空干燥，得到棕黄色黄酮粉末；向棕黄色黄酮粉末中加入蒸馏水，得到总黄酮精提液；
[0013]鹿角胶原蛋白液的提取：向龟鹿补肾丸粉末中加入脱脂剂，搅拌后离心，弃上清留沉淀待用，向脱脂后的沉淀中加入脱钙剂，搅拌后离心，弃上清留沉淀，向脱钙后沉淀中加入蒸馏水搅拌清洗，离心，沉淀烘干后得到脱脂脱钙粉末；向脱脂脱钙粉末中加入蒸馏水，搅拌后离心，上清液冷藏保存，对沉淀进行热水浴提取，将提取得到的上清液合并，得到鹿角胶原蛋白液；
[0014]龟甲胶原蛋白液的提取：向龟鹿补肾丸粉末中加水，煎煮后取出煎煮液，将煎煮液依次经过过滤和抽滤，取滤液收集，将收集到的滤液加热熬煮，得到浓胶液；将浓胶液水浴加热，直至浓胶液凝固成凝胶，将凝胶烘干至恒重得到龟甲胶原蛋白液；
[0015]多糖水溶液的提取：向龟鹿补肾丸粉末中依次加入石油醚和乙醚后加热回流，过滤，向滤渣中加入蒸馏水，煮沸后过滤，收集滤液，调节滤液pH后离心，取上清液，向上清液中加入无水乙醇，静置后收集沉淀，将沉淀洗涤后干燥，得到粗多糖；用蒸馏水溶解粗多糖，加入Sevag试剂，振荡后离心，离心后的上清液为多糖水溶液。
[0016]进一步的，所述总黄酮精提液的提取包括以下步骤：
[0017]向17～23份的龟鹿补肾丸粉末中加入18～22倍体积的60％乙醇浸泡20～40min后，65～75℃回流2～3次，将回流得到的提取液在45～55℃的条件下减压浓缩得到粗提物；
[0018]将粗提物用80％乙醇溶解，加入盐酸溶液，使溶液中盐酸的浓度为3.0mol/L，水浴加热14～18h，室温放置析出沉淀，过滤，将沉淀干燥，得到墨绿色粉末；
[0019]取墨绿色粉末溶于蒸馏水后，加入乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯层减压浓缩后，在60
～70℃的真空条件下干燥至恒重，得到棕黄色黄酮粉末；
[0020]向棕黄色黄酮粉末中加入蒸馏水，得到总黄酮精提液。
[0021]进一步的，所述总黄酮精提液的体积浓度为25％。
[0022]进一步的，所述鹿角胶原蛋白液的提取包括以下步骤：
[0023]向17～23份的龟鹿补肾丸粉末中加入18～22倍体积的脱脂剂，搅拌45～50h后离心，弃上清留沉淀待用，向脱脂后的沉淀中加入8～12倍体积的脱钙剂，搅拌45～50h，离心，弃上清留沉淀，向脱钙后沉淀中加入蒸馏水搅拌清洗，离心，沉淀烘干后得到脱脂脱钙粉末；
[0024]向脱脂脱钙粉末中加入8～12倍体积的蒸馏水，搅拌4～6h后离心，上清液冷藏保存，沉淀热水浴提取3～5次，将上清液合并，得到鹿角胶原蛋白液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗骨质疏松的龟鹿补肾丸提取物的制备方法，其特征在于，所述龟鹿补肾丸提取物包括总黄酮精提液、鹿角胶原蛋白液、龟甲胶原蛋白液和多糖水溶液，所述制备方法包括以下步骤：总黄酮精提液的提取：向龟鹿补肾丸粉末中加入乙醇浸泡后回流，将回流得到的提取液减压浓缩得到粗提物，将粗提物用乙醇溶解，加入盐酸溶液，水浴加热，室温放置析出沉淀，过滤后将沉淀干燥，得到墨绿色粉末；取墨绿色粉末溶于蒸馏水后，加入乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯层减压浓缩后，真空干燥，得到棕黄色黄酮粉末；向棕黄色黄酮粉末中加入蒸馏水，得到总黄酮精提液；鹿角胶原蛋白液的提取：向龟鹿补肾丸粉末中加入脱脂剂，搅拌后离心，弃上清留沉淀待用，向脱脂后的沉淀中加入脱钙剂，搅拌后离心，弃上清留沉淀，向脱钙后沉淀中加入蒸馏水搅拌清洗，离心，沉淀烘干后得到脱脂脱钙粉末；向脱脂脱钙粉末中加入蒸馏水，搅拌后离心，上清液冷藏保存，对沉淀进行热水浴提取，将提取得到的上清液合并，得到鹿角胶原蛋白液；龟甲胶原蛋白液的提取：向龟鹿补肾丸粉末中加水，煎煮后取出煎煮液，将煎煮液依次经过过滤和抽滤，取滤液收集，将收集到的滤液加热熬煮，得到浓胶液；将浓胶液水浴加热，直至浓胶液凝固成凝胶，将凝胶烘干至恒重得到龟甲胶原蛋白液；多糖水溶液的提取：向龟鹿补肾丸粉末中依次加入石油醚和乙醚后加热回流，过滤，向滤渣中加入蒸馏水，煮沸后过滤，收集滤液，调节滤液pH后离心，取上清液，向上清液中加入无水乙醇，静置后收集沉淀，将沉淀洗涤后干燥，得到粗多糖；用蒸馏水溶解粗多糖，加入Sevag试剂，振荡后离心，离心后的上清液为多糖水溶液。2.根据权利要求1所述的抗骨质疏松的龟鹿补肾丸提取物的制备方法，其特征在于，所述总黄酮精提液的提取包括以下步骤：向17～23份的龟鹿补肾丸粉末中加入18～22倍体积的60％乙醇浸泡20～40min后，65～75℃回流2～3次，将回流得到的提取液在45～55℃的条件下减压浓缩得到粗提物；将粗提物用80％乙醇溶解，加入盐酸溶液，使溶液中盐酸的浓度为3.0mol/L，水浴加热14～18h，室温放置析出沉淀，过滤，将沉淀干燥，得到墨绿色粉末；取墨绿色粉末溶于蒸馏水后，加入乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯层减压浓缩后，在60～70℃的真空条件下干燥至恒重，得到棕黄色黄酮粉末；向棕黄色黄酮粉末中加入蒸馏水，得到总黄酮精提液。3.根据权利要求2所述的抗骨质疏松的龟鹿补肾丸提取物的制备方法，其特征在于，所述总黄酮精提液的体积浓度为25％。4.根据权利要求1所述的抗骨质疏松的龟...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈志钊，纪美琪，宫剑平，王晓东，耿春贤，王华倩，陈曌，李志强，
申请(专利权)人：广东工业大学，
类型：发明
国别省市：