第一微生物菌株对第二产气微生物菌株产气的抑制能力的检测制造技术

本发明专利技术涉及基于总产气量的测量，定量至少一种潜在抑制性第一细菌或酵母菌株对产气潜在不良第二细菌或酵母菌株的抑制能力的方法。第一细菌或酵母菌株的实例是芽孢杆菌属、乳杆菌属或乳球菌属的益生菌细菌菌株，产气细菌或酵母菌株的实例是诸如梭菌属、梭杆菌、大肠杆菌和沙门氏菌属等细菌或诸如酵母属或毕赤酵母属(Pichia)等酵母。母属(Pichia)等酵母。母属(Pichia)等酵母。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】第一微生物菌株对第二产气微生物菌株产气的抑制能力的检测


[0001]本专利技术涉及用于评估和/或定量至少一种潜在抑制性第一微生物菌株对至少一种产气、潜在不良第二微生物菌株的抑制能力的方法。

技术介绍

[0002]许多产气微生物菌株是不期望的。例如，A型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)、C型产气荚膜梭菌和败毒梭菌(Clostridium septicum)均会产生毒素并与许多疾病有关。A型产气荚膜梭菌与人的肌坏死(气性坏疽)、羔羊、牛和山羊的肠毒血症以及家禽的坏死性肠炎有关，C型产气荚膜梭菌与绵羊的“击伤”、羔羊和猪的肠毒血症以及家禽的坏死性肠炎有关(Hatheway 2016Toxigenic clostridia.Clin Microbiol Rev 2016；3:66
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98)。
[0003]其他微生物菌株可以抑制潜在的不良微生物菌株，例如梭菌属的物种(Clostridum spp.)。
[0004]通常通过在固体培养基上共培养这两种微生物菌株并评估抑菌圈存在或不存在来体外评价微生物菌株抑制另一种潜在不良微生物菌株的能力。例如，该方法在WO 2018/167171中用于评估保藏为DSM32324和DSM32325的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株对大肠杆菌(Escherichia coli)和产气荚膜梭菌的抑制活性。然而，基于这种方法只能对抑制进行定性评估。此外，该方法灵敏度低，只能用于在琼脂培养基上以均匀方式生长的菌株。一些菌株，例如败毒梭菌，无法轻松计数，因为它们不会生长成明显的菌落。评估抑制能力的常规方法也遭受相当耗时之苦且未考虑培养厌氧微生物菌株的困难。例如，传统方法通常不适用于专性厌氧微生物菌株，因为这些方法无法防止某些O2暴露。
[0005]WO2018/226521描述了用于减少肠道气体/肠胃胀气的方法和组合物。实施例1描述了一种测试系统，其中将倒置的杜氏管，即一种可以用作发酵过程中生成的气泡的捕集装置的小倒置管，放置在具有10ml培养基的试管中。通过目测以定性方式评估气体产生：
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无气体产生，+气体产生极少(杜氏管中的小气泡)，++大量气体产生(杜氏管的一半充满气泡)，以及+++过量气体产生(几乎90％的杜氏管充满气泡)。没有提供细菌的接种剂量。该专利申请也没有提供关于何时评估气体产生的信息，即实验的孵育时间。因此，实施例1描述的方法是不可重复。
[0006]因此，需要一种时间效率高、可靠且定量的方法来评估至少一种第一微生物菌株抑制至少一种产气、潜在不良第二微生物菌株的能力。特别是，需要这样一种自动化定量方法，其是标准化且可重复的，并且可以以不留给人主观评价的方式区分个体细菌菌株控制产气菌株生长的效率。

技术实现思路

[0007]本专利技术人开发了可以用于以定量方式评估微生物菌株抑制效率的方法。该方法基
于以下发现：当在能够抑制产气微生物菌株的微生物菌株存在的情况下培养所述产气微生物菌株时，由所述产气微生物菌株产生的总气体减少。因此，通过确定总气体产生的减少，可以定性和定量地评估微生物菌株对产气、潜在不良微生物菌株的抑制能力。
[0008]此外，本方法允许进行剂量反应试验以及独立或同时测试几种微生物菌株。
[0009]本方法还可用作筛选已知或新微生物菌株对产气、潜在不良微生物菌株的抑制能力的中通量测定或高通量测定。
[0010]因此，本公开的一个方面是，提供了用于定量至少一种第一微生物菌株对至少一种产气第二微生物菌株产气的抑制的方法，该方法包括：
[0011]a)提供至少一种第一微生物菌株；
[0012]b)提供至少一种产气第二微生物菌株；
[0013]c)在封闭培养系统中培养所述至少一种第一微生物菌株和所述至少一种产气第二微生物菌株；
[0014]d)确定c)的所述封闭培养系统中产生的总气体体积；
[0015]e)确定当在不存在任何其他微生物菌株的情况下、在封闭培养系统中培养时，所述至少一种产气第二微生物菌株产生的总气体体积；以及
[0016]f)比较d)和e)的总气体体积。
[0017]更具体而言，本专利技术提供了定量至少一种第一细菌或酵母菌株对单一产气第二细菌或酵母菌株的抑制效率的方法，该方法包括：
[0018]a)提供至少一种不产生气体或仅产生体积可忽略不计的气体的第一细菌或酵母菌株；
[0019]b)提供单一产气第二细菌或酵母菌株；
[0020]c)在封闭培养系统中培养至少一种第一细菌或酵母菌株和单一产气体第二细菌或酵母菌株，该系统是不透气的并且不添加额外的养分，且不去除废产物；
[0021]d)通过测量产生的气体压力的自动气体测量装置测量一段时间内在c)的封闭培养系统中产生的总气体体积；
[0022]e)通过测量产生的气体压力的自动气体测量装置，测量当在不存在任何其他细菌或酵母菌株的情况下、在封闭培养系统中培养时，在相同的时间段内，单一产气第二细菌或酵母菌株产生的总气体体积；以及
[0023]f)比较d)和e)的总气体压力。
[0024]在本公开的一个实施方案中，当d)的总气体压力低于e)的总气体压力时，所述至少一种第一细菌或酵母菌株抑制所述产气第二细菌或酵母菌株。
[0025]在本公开的一个实施方案中，当d)的总气体压力等于或高于e)的总气体压力时，所述至少一种第一微生物菌株不抑制所述产气第二微生物菌株。
[0026]通过使用自动气体测量装置，提供了可以标准化并且使得有可能定量个别菌株的抑制效率，从而以可重复的方式控制产气菌株生长的方法。
[0027]与现有技术相比，本专利技术的方法使得有可能区分个别菌株的抑制效率，即使差异小，并且即使对于目测无法检测到的小差异，计算差异是否是统计学显著的。
[0028]在一个实施方案中，本公开的方法在体外进行。例如，本公开的方法可以包括，测量和确定当在至少一种潜在抑制性第一微生物菌株存在的情况下培养时至少一种产气第
二微生物菌株的体外产气量。
[0029]本公开的另一方面是，提供气体测量系统用于检测和/或定量至少一种第一微生物菌株对至少一种产气第二微生物菌株的抑制作用的用途。
[0030]本公开的又一方面是，提供气体测量系统用于鉴定能够抑制至少一种产气第二微生物菌株的第一微生物菌株的用途。
[0031]在本公开的一个实施方案中，气体测量系统包括：
[0032]a)适合在封闭培养系统中培养一种或多种微生物菌株的小瓶；
[0033]b)气体测量装置；和
[0034]c)用于确定所述封闭培养系统中产生的气体总体积的器件。
[0035]适合在封闭培养系统中培养一种或多种微生物菌株的小瓶是本领域已知的。不透气的塑料小瓶或玻璃小瓶是合适的。
[0036]气体测量装置在本领域中也是已知的。自动气体测量装置是合适的。
[003本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.定量至少一种第一细菌或酵母菌株对单一产气第二细菌或酵母菌株的抑制效率的方法，所述方法包括：a)提供至少一种不产生气体或仅产生体积可忽略不计的气体的第一细菌或酵母菌株；b)提供单一产气第二细菌或酵母菌株；c)在封闭培养系统中培养所述至少一种第一细菌或酵母菌株和所述单一产气第二细菌或酵母菌株，所述系统是不透气的并且不添加额外的养分且不去除废产物；d)通过测量产生的气体压力的自动气体测量装置测量一段时间内在c)的所述封闭培养系统中产生的总气体体积；e)通过测量产生的气体压力的自动气体测量装置，测量当在不存在任何其他细菌或酵母菌株的情况下、在封闭培养系统中培养时，在相同的时间内，所述单一产气第二细菌或酵母菌株产生的总气体体积；以及f)比较d)和e)的总气体压力。2.根据权利要求1或2所述的方法，其中当d)的总气体压力低于e)的总气体压力时，所述至少一种第一细菌或酵母菌株抑制所述产气第二细菌或酵母菌株。3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中当d)的总气体压力等于或高于e)的总气体压力时，所述至少一种第一细菌或酵母菌株不抑制所述产气第二细菌或酵母菌株。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述封闭培养系统是厌氧培养系统。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述至少一种第一细菌或酵母菌株是一种细菌或酵母菌株。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述至少一种第一细菌或酵母菌株是两...

【专利技术属性】
技术研发人员：G，
申请(专利权)人：科，
类型：发明
国别省市：