一种保元汤的双波长指纹图谱建立方法及其标准指纹图谱技术

本发明专利技术涉及一种保元汤的双波长指纹图谱建立方法：根据保元汤处方制备保元汤煎液；取保元汤煎液，制成供试品溶液；精确称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷、甘草酸铵、6

【技术实现步骤摘要】
一种保元汤的双波长指纹图谱建立方法及其标准指纹图谱


[0001]本专利技术属于中药检测及质量控制
，具体涉及一种保元汤的双波长指纹图谱建立方法及及其标准指纹图谱。

技术介绍

[0002]2018年4月13日国家中医管理局公布了《古代经典名方目录(第一批)》，最早源自《博爱心鉴》(明
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魏直)，由《兰室秘藏》(金
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李东垣)黄芪汤衍化而来，并收录于《简明医彀》(明
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孙志宏)中，原方记载：“人参(一钱)、黄芪(二钱)、甘草(五分)、肉桂(二分)、又加生姜一片”，煎煮方法：“每剂水二钟，煎八分，渣用水钟半，煎七分”。
[0003]保元汤主治功效为治元气虚弱，精神倦怠，肌肉柔慢，饮食少进，面青白，睡卧宁静，及有杂证，皆属虚弱，宜服；其药理作用主要有对免疫系统、血液系统、心血管系统作用及抗氧化作用等；现代临床主要应用于治疗冠心病、慢性肾功能衰竭、肾炎、再生障碍性贫血、慢性乙型肝炎及术后感染等。
[0004]经典名方的开发是目前中医药行业发展的研究热点，以古代医籍中记载的制作方法为主要依据，利用现代制作方法还原古方从而制成现代中药方剂；经典名方的《申报资料》中规定应研究全面反映对应实物质量信息的内容，特别是建立多味中药复方各成分的指纹图谱信息及指纹图谱方法，对经典名方质量控制及质量可传递性具有十分重要的意义。
[0005]公开号为CN 110907580 A的专利中采用HPLC仅检测了保元汤人参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1三个成分的特征图谱，公开号为CN 112903882 A的专利中用HPLC仅检测了保元汤人参、黄芪和甘草中的指纹图谱。然而中药复方保元汤中成分复杂、化合物性质差异大，每种成分的紫外吸收特征各异，单波长的指纹图谱检测方法难以全面、有效地反应复方中的多成分类型信息，由上可见，亟需一种可全面检测保元汤主要成分的双波长指纹图谱检测方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术要解决的技术问题是，针对现有技术中无简单快速的指纹图谱方法全面控制保元汤质量。
[0007]本专利技术的技术方案是，一种保元汤的双波长指纹图谱建立方法，包括以下步骤：
[0008](1)根据保元汤处方制备保元汤煎液；
[0009](2)取保元汤煎液，制成供试品溶液；
[0010](3)精确称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷、甘草酸铵、6
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姜辣素对照品，配成混合对照品溶液；
[0011](4)将供试品溶液和混合对照品溶液注入高效液相色谱仪测定，得到保元汤指纹图谱；其中高效液相色谱仪检测波长为200
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205nm和250
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260nm；流动相A：100％乙腈，流动相B：体积分数为0.05
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0.2％的磷酸水溶液。
[0012]优选地，步骤(4)中，色谱条件为：
[0013]采用梯度洗脱：0～5min，14％～17％乙腈，86％～83％磷酸水溶液；
[0014]5～12min，17％～19％乙腈，83％～81％磷酸水溶液；
[0015]12～59min，19％～25％乙腈，81％～75％磷酸水溶液；
[0016]59～75min，25％～30％乙腈，75％～70％磷酸水溶液；
[0017]75～120min，30％～47％乙腈，70％～53％磷酸水溶液；
[0018]流速：1.0mL/min；柱温：25℃；进样量10μL。
[0019]优选地，步骤(4)中，高效液相色谱仪的检测波长为203nm和254nm。
[0020]优选地，步骤(1)中，保元汤煎液的制备方法如下：将一份保元汤的处方药材用水煎煮两次，一煎：加水300mL，煎至120mL，过滤；二煎：加水225mL，煎至105mL，过滤，合并两次煎液225mL备用。
[0021]优选地，步骤(2)中，供试品溶液的制备方法为取少量保元汤煎液，离心，取上清液加在固相萃取柱上，用水和甲醇水溶液洗脱弃去；收集纯甲醇的洗脱液，蒸干，加甲醇定容，即得。
[0022]优选地，步骤(2)中，量取保元汤煎液50ml，然后4000r/min离心10min，量取10mL上清液，加在C
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固相萃取小柱上，吸附后，用双蒸水10mL洗脱，弃去，体积分数为15％的甲醇水溶液10mL洗脱，弃去，最后用纯甲醇20mL洗脱并收集，蒸干，加甲醇定容至5mL容量瓶中，摇匀，过滤，即得。
[0023]优选地，保元汤原料药材包括：人参、黄芪、甘草、肉桂和生姜。
[0024]通常，所述保元汤的一份处方重量分别为：人参3.73g，黄芪7.46g，甘草1.86g，肉桂0.75g，生姜3g。
[0025]本专利技术还提供根据上述的保元汤的双波长指纹图谱建立方法建立标准指纹图谱，按照上述的保元汤的双波长指纹图谱建立方法对不同产地的10
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20个批次的保元汤药材进行测定，得到不同产地10
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20批次保元汤煎液的指纹图谱，导入2012版“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”确定保元汤的指纹图谱的共有峰，这些共有峰构成了保元汤的指纹特征，可作为保元汤的标准指纹图谱。
[0026]本专利技术在保元汤指纹图谱双波长检测中，参考《中国药典》，保元汤中各味药材所含的主要成分包括人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷、甘草酸铵、桂皮醛、6
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姜辣素等，由于各成分的极性、性质不同，对pH的敏感程度亦不同，本专利技术的申请人经过多次研究和反复的试验最终总结出：人参皂苷Re响应值较小，易受阴性干扰；黄芪甲苷紫外吸收弱，需使用ELSD检测器检测；桂皮醛具有挥发性不易准确定性鉴别。
[0027]本专利技术的申请人通过研究和上述的因素考量，最终确定人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1主要发生末端吸收适于选择波长203nm，且生姜中的6
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姜辣素在该波长下灵敏度高分离度好，故人参和生姜选择波长203nm进行检测；黄芪和甘草中的毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷、甘草酸铵在波长254nm下无阴性干扰、灵敏度高、响应值大、分离度较好，故黄芪和甘草选择波长254nm进行检测。
[0028]本专利技术的保元汤的双波长指纹图谱建立方法中，保元汤供试品指纹图谱共有峰有18个，峰1、10和13来自黄芪，峰2、3、4、5、7、9、12、15、17来自甘草、8、14和16来自人参，峰18
来自生姜，6号峰是黄芪和甘草共有，11号峰是人参和甘草共有，由上可见甘草对保元汤指纹图谱作出很大贡献。
[0029]本专利技术的保元汤的双波长指纹图谱建立方法中，在双波长下，与混合对照品指纹图谱对比能够明确指认出6个色谱峰；254nm下共有14个峰，可指认出3个峰，分别是1号峰毛蕊异黄酮葡萄糖苷，3号峰甘草苷，17号峰甘草酸铵；203nm下共10个峰，可指认出3个色谱峰，分别是8号本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种保元汤的双波长指纹图谱建立方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）根据保元汤处方制备保元汤煎液；（2）取保元汤煎液，制成供试品溶液；（3）精确称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷、甘草酸铵、6
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姜辣素对照品，配成混合对照品溶液；（4）将供试品溶液和混合对照品溶液注入高效液相色谱仪测定，得到保元汤指纹图谱；其中高效液相色谱仪检测波长为200
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205nm和250
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260nm；流动相A：100%乙腈，流动相B：体积分数为0.05
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0.2%的磷酸水溶液。2.根据权利要求1所述的保元汤的双波长指纹图谱建立方法，其特征在于：步骤（4）中，色谱条件为：采用梯度洗脱：0~5min，14%~17%乙腈，86%~83%磷酸水溶液；5~12min，17%~19%乙腈，83%~81%磷酸水溶液；12~59min，19%~25%乙腈，81%~75%磷酸水溶液；59~75min，25%~30%乙腈，75%~70%磷酸水溶液；75~120min，30%~47%乙腈，70%~53%磷酸水溶液；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；进样量10μL。3.根据权利要求1所述的保元汤的双波长指纹图谱建立方法，其特征在于：步骤（4）中，高效液相色谱仪的检测波长为203nm和254nm。4.根据权利要求1所述的保元汤的双波长指纹图谱建立方法，其特征在于：步骤（1）中，保元汤煎液的制备方法如下：将一份保元汤的处方药材用水煎煮两次，一...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄慧莲，童猛辉，郑琴，刘均正，黄小英，谭闽怀，王芳，伍振峰，杨明，查青林，曹岚，刘毅，
申请(专利权)人：江西中医药大学，
类型：发明
国别省市：