一种快速蛋白免疫印迹系统方法技术方案

本发明专利技术涉及生物技术领域，且公开了一种快速蛋白免疫印迹系统方法，包括以下步骤：S1、获取蛋白质样品；S2、制备梯度预制凝胶，并将蛋白质样品放入到梯度预制凝胶中进行电泳；S3、电泳结束后，将胶条切割成合适的大小，并用蛋白转膜液进行平衡；S4、将预先裁剪好与胶条大小相同的滤纸和NC膜进入到蛋白转膜液中；本发明专利技术利用梯度预制凝胶替代传统实验中的聚丙烯酰胺凝胶，在进行电泳的过程中，不需要进行低压浓缩，只需要外加一个恒压电场进行蛋白的分离即可，并且梯度预制凝胶适应使5

【技术实现步骤摘要】
一种快速蛋白免疫印迹系统方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体为一种快速蛋白免疫印迹系统方法。

技术介绍

[0002]免疫印迹法是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的杂交技术。免疫印迹法具有分析容量大、敏感度高、特异性强等优点，是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法，如组织抗原的定性定量检测、多肽分子的质量测定及病毒的抗体或抗原检测等，传统的蛋白免疫印迹实验成熟，但是消耗的时间较长，不利于后续工作的快速展开。

技术实现思路

[0003](一)解决的技术问题
[0004]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种快速蛋白免疫印迹系统方法，解决了上述
技术介绍
中所存在的问题。
[0005](二)技术方案
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种快速蛋白免疫印迹系统方法，包括以下步骤：
[0007]S1、获取蛋白质样品；
[0008]S2、制备梯度预制凝胶，并将蛋白质样品放入到梯度预制凝胶中进行电泳；
[0009]S3、电泳结束后，将胶条切割成合适的大小，并用蛋白转膜液进行平衡；
[0010]S4、将预先裁剪好与胶条大小相同的滤纸和NC膜进入到蛋白转膜液中；
[0011]S5、将转膜装置从下到上按阳极碳板、24层滤纸、NC膜、凝胶、24层滤纸、阴极碳板的顺序放好，然后接通电源开始转膜；
[0012]S6、转膜结束后，断开电源并将膜取出，然后将膜用SNAP i.d.
②
2.0蛋白检测系统，采用真空负压加速蛋白结合，加快孵育时间；
[0013]S7、孵育结束后，在膜上加入显色液，避光显色至出现条带时放入双蒸水终止反应。
[0014]优选的，所述步骤S1中的蛋白质样品的获得过程为：诱导细菌表达后，通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5
‑
1min，然后在4℃的人温度下，13000r离心15min，取上清液即可得到蛋白质样品。
[0015]优选的，所述步骤S2中，在制备梯度预制凝胶的时候，检测凝胶中各个离子以及各个离子的摩尔浓度，并根据凝胶中各个离子的价数z以及各个离子的摩尔浓度m计算离子的强度I，并保持离子强度I在0.02
‑
0.2之间，其中：
[0016][0017]n为凝胶中的各种离子。
[0018]优选的，所述方法中的蛋白转膜液包括甘氨酸2.9g、Tris 5.8g、SDS0.37g、SDS表面活性剂1.3g、甲醇200ml，加ddH2O定容至1000ml。
[0019]优选的，所述步骤S5中，滤纸、凝胶、NC膜精准对齐，并在在按照顺序摆放阳极碳板、滤纸、NC膜、凝胶和阴极碳板的时候，每一步都要去除气泡，并且在上一层结构上压500g重物，然后将碳板上多余的液体吸干。
[0020]优选的，所述方法中的显色液包括DAB 6.0mg、0.01m PBS 10ml、硫酸镍铵0.1ml、H2O21.0μl。
[0021]优选的，所述步骤S2在进行电泳的时候，在恒压110V的电压下，持续50min即可。
[0022]优选的，所述步骤S6在1h内即可完成。
[0023](三)有益效果
[0024]本专利技术提供了一种快速蛋白免疫印迹系统方法，具备以下有益效果：
[0025]本专利技术利用梯度预制凝胶替代传统实验中的聚丙烯酰胺凝胶，在进行电泳的过程中，不需要进行低压浓缩，只需要外加一个恒压电场进行蛋白的分离即可，并且梯度预制凝胶适应使5
‑
500kDa蛋白，不需要根据不同蛋白配置不同的凝胶，同时在转膜的过程中，在蛋白转膜液中增加了SDS表面活性剂，可以加快蛋白从凝胶中的剥离速度，此外利用SNAP i.d.
②
2.0蛋白检测系统，采用真空负压加速蛋白结合，从而可以加快孵育时间，相较于传统的实验过程，本专利技术公开的实验流程可以大大缩短实验的时间，从而利于后续的工作的快速展开。
具体实施方式
[0026]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0027]本专利技术提供一种技术方案：一种快速蛋白免疫印迹系统方法，包括以下步骤：
[0028]S1、获取蛋白质样品：诱导细菌表达后，通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5
‑
1min，然后在4℃的人温度下，13000r离心15min，取上清液即可得到蛋白质样品；
[0029]S2、制备梯度预制凝胶，并将蛋白质样品放入到梯度预制凝胶中，在恒压110V的电压下进行电泳50min；
[0030]在制备梯度预制凝胶的时候，检测凝胶中各个离子以及各个离子的摩尔浓度，并根据凝胶中各个离子的价数z以及各个离子的摩尔浓度m计算离子的强度I，并保持离子强度I在0.02
‑
0.2之间，其中：
[0031][0032]n为凝胶中的各种离子；
[0033]S3、电泳结束后，将胶条切割成合适的大小，并用蛋白转膜液进行平衡；
[0034]S4、将预先裁剪好与胶条大小相同的滤纸和NC膜进入到蛋白转膜液中；
[0035]S5、将转膜装置从下到上按阳极碳板、24层滤纸、NC膜、凝胶、24层滤纸、阴极碳板
的顺序放好，然后接通电源开始转膜，滤纸、凝胶、NC膜精准对齐，并在在按照顺序摆放阳极碳板、滤纸、NC膜、凝胶和阴极碳板的时候，每一步都要去除气泡，并且在上一层结构上压500g重物，然后将碳板上多余的液体吸干；
[0036]S6、转膜结束后，断开电源并将膜取出，然后将膜用SNAP i.d.
②
2.0蛋白检测系统，采用真空负压加速蛋白结合，加快孵育时间，1h内即可完成；
[0037]S7、孵育结束后，在膜上加入显色液，避光显色至出现条带时放入双蒸水终止反应。
[0038]方法中的蛋白转膜液包括甘氨酸2.9g、Tris 5.8g、SDS 0.37g、SDS表面活性剂1.3g、甲醇200ml，加ddH2O定容至1000ml。
[0039]方法中的显色液包括DAB 6.0mg、0.01m PBS 10ml、硫酸镍铵0.1ml、H2O
2 1.0μl。
[0040]需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速蛋白免疫印迹系统方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、获取蛋白质样品；S2、制备梯度预制凝胶，并将蛋白质样品放入到梯度预制凝胶中进行电泳；S3、电泳结束后，将胶条切割成合适的大小，并用蛋白转膜液进行平衡；S4、将预先裁剪好与胶条大小相同的滤纸和NC膜进入到蛋白转膜液中；S5、将转膜装置从下到上按阳极碳板、24层滤纸、NC膜、凝胶、24层滤纸、阴极碳板的顺序放好，然后接通电源开始转膜；S6、转膜结束后，断开电源并将膜取出，然后将膜用SNAPi.d.
②
2.0蛋白检测系统，采用真空负压加速蛋白结合，加快孵育时间；S7、孵育结束后，在膜上加入显色液，避光显色至出现条带时放入双蒸水终止反应。2.根据权利要求1所述的一种快速蛋白免疫印迹系统方法，其特征在于：所述步骤S1中的蛋白质样品的获得过程为：诱导细菌表达后，通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5
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1min，然后在4℃的人温度下，13000r离心15min，取上清液即可得到蛋白质样品。3.根据权利要求1所述的一种快速蛋白免疫印迹系统方法，其特征在于：所述步骤S2中，在制备梯度预制凝胶的时候，检测凝胶中各个离子以及各...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡佳瑶，史绍鹏，
申请(专利权)人：广州誉维生物科技仪器有限公司，
类型：发明
国别省市：