一种基于质谱的体外诊断试剂抗体的表位定位方法技术

本发明专利技术公开了一种基于质谱的体外诊断试剂抗体的表位定位方法，通过表面等离子体共振对试剂盒内的多种抗体分别与被测抗原相互作用的分析，获得能与待测抗原直接发生相互作用的抗体，通过冰上孵育来制备待测抗原与抗体的免疫复合物，再通过尺寸排阻色谱确定免疫复合物的孵育时间、孵育浓度以及结合比例。最后通过在线酶切技术获得待测抗原的肽图，再使用基于质谱的氢氘交换技术对免疫复合物进行分析，通过数据处理获得试剂盒内抗体的表位图谱。本发明专利技术采用了一种全新的方法实现了体外诊断试剂盒内抗体的表位定位。该方法具有快速、灵敏、高通量、样品用量少、无分析质量上限等特点，能够应用于市面上多数试剂盒的表位定位分析。够应用于市面上多数试剂盒的表位定位分析。够应用于市面上多数试剂盒的表位定位分析。

【技术实现步骤摘要】
一种基于质谱的体外诊断试剂抗体的表位定位方法


[0001]本专利技术涉及体外诊断
，特别是涉及一种体外诊断试剂抗体的表位定位方法。

技术介绍

[0002]体外诊断(IVD)试剂是指在疾病的预测、预防、诊断、治疗监测、预后观察和健康状态评价的过程中，用于人体样本体外检测的产品。
[0003]目前，疾病预防、临床诊治基本上都需要用到体外诊断试剂，如血尿便三大常规检测，病毒或细菌感染的鉴别，心肝肾血管、免疫功能检查等。因此，提高IVD试剂的性能，是确保相关化验结果和诊断正确的重要基础。
[0004]IVD试剂往往是通过试剂盒的形式来进行待检项目的测定，国内外众多IVD试剂的生产厂商可以针对临床检验项目生产多种类的检测试剂盒，这极大地丰富了IVD试剂的选择性，但同时面临着，不同生产厂商的同一种类的试剂盒的定量结果不能互认的情况，这带来了极大的挑战。产生这种现象的原因，一方面是由于厂商的溯源过程不够规范所导致；另一方面，由于IVD试剂盒通常是基于免疫原理来设计的，因此不同品牌试剂盒所使用的抗体往往是不同的，这导致了它们与待测抗原结合本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于质谱的体外诊断试剂抗体的表位定位方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)抗原及试剂盒抗体的准备：收集试剂盒内的抗体及对应的抗原；(2)抗原纯度及聚集态分析；(3)抗体的表面等离子体共振分析：对CM5芯片进行活化并封闭；用HBS
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EP缓冲液作为流动相，流速10μL/min，将抗原用偶联缓冲液稀释至40μg/mL，设置偶联程序进行配体偶联；将抗体分别用流动相梯度稀释至100、50、25、12.5、6.25μg/mL的6个浓度，流速10μL/min，时间60s，温度25℃，设置程序进行传感图采集；(4)制备免疫复合物；将抗体稀释并与抗原混匀；置于冰上孵育；用尺寸排阻色谱对复合物的组成进行分析；调整抗体与抗原的结合比例及孵育时间，保证抗原被充分结合；将制备的免疫复合物保存在
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80℃下，留待氢氘交换实验；(5)表位分析：溶液配制：包括样品缓冲液、重水缓冲液和猝灭缓冲液；建立抗原酶切肽图：将5μL抗原与70μL平衡缓冲液，75μL猝灭缓冲液，和200μL 0.1％甲酸水溶液混匀，取220μL样品进样；使用Waters ENZYMATE BEH PEPSIN 2.1mm
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30mm柱在线酶切，使用ACQUITY UPLC BEH C18 VanGuard预柱3/Pk 1.7μm，2.1
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5mm脱盐富集，使用ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm，1.0
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100mm柱分离肽段；使用Waters G2高分辨质谱对酶解肽段进行鉴定；使用ProteinLynx Global Service 3.0.2(Waters)软件进行肽段的匹配与鉴定；将肽段数据导入Dynamx软件生成抗原的在线酶切肽图；氢氘交换
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质谱分析：基于生成的抗原肽图对样品进行氢氘交换
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质谱分析，获得表位结果。2.根据权利要求1所述的基于质谱的体外诊断试剂抗体的表位定位方法，其特征在于：所述步骤(2)中，用SDS
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Page电泳法检测纯...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋德伟，孙浩峰，刘健仪，
申请(专利权)人：中国计量科学研究院，
类型：发明
国别省市：