一种从猪小肠粘膜下层中提取活性胶原蛋白的方法技术

本发明专利技术属于蛋白提取技术领域，具体涉及一种从猪小肠粘膜下层中提取活性胶原蛋白的方法。包括如下步骤：将猪小肠粘膜下层组织分离；后进行预处理、除杂；再在酸性条件下进行研磨，将组织粗破碎；加入酶溶液磨浆，制得细破碎匀浆；再使用盐析法进行胶原蛋白提取物的分离；对分离后的胶原蛋白提取物进行洗涤、真空冷冻干燥，即得高活性的胶原蛋白提取物。本发明专利技术提出的方法操作简单、成本低，提取率高，所获得的胶原蛋白具备稳定的三螺旋结构，活性好，纯度高，适合推广应用。适合推广应用。适合推广应用。

【技术实现步骤摘要】
一种从猪小肠粘膜下层中提取活性胶原蛋白的方法


[0001]本专利技术属于蛋白提取
，具体涉及一种从猪小肠粘膜下层中提取活性胶原蛋白的方法。

技术介绍

[0002]胶原蛋白是一种纤维状的蛋白质，具有3条分子量相近的肽链相互缠绕形成的三螺旋结构，该结构依靠氢键维持稳定，分子量大约为300KD，是一种高分子细胞外蛋白。胶原蛋白具有丰富的氨基酸，如甘氨酸，脯氨酸和羟脯氨酸，其中，必需氨基酸占胶原蛋白总氨基酸含量的大约16%。生理条件下，胶原蛋白广泛存在于动物体的皮肤，血管，韧带，骨骼，肌腱和软骨组织中，可以发挥支撑器官，保护机体，维持血管壁，维持皮肤弹性、提高毛发亮度和软骨润滑度等重要的生理功能。另外，胶原蛋白具有免疫原性低、可降解、生物活性高和生物相容性好等优点，于是，其相关的胶原蛋白制品被广泛应用于食品、保健品、化妆品和医药领域。
[0003]由于胶原蛋白制品已经被广泛应用于多个领域，导致市场需求迅速增加，因此胶原蛋白的来源、制备和提取工艺越来越受到重视。现如今，胶原蛋白制品的来源主要是从牛、猪等动物的组织中获取。近年来，从海洋生物的组织，如鱼皮，提取胶原蛋白也有越来越多的报道。但是，猪小肠粘膜下层组织是一种新型的细胞外基质框架，含有丰富的胶原蛋白，适合作为一种良好的胶原蛋白制品的来源，材料获取容易。
[0004]胶原蛋白的提取工艺主要分为2个步骤，首先是对原料进行处理以去除杂质，如脂肪组织，杂蛋白，色素；其次，应用物理、化学、生物的方法，破坏胶原纤维组织，从而提取胶原蛋白。常见的物理提取方法有热水抽提、热压浸提等；常见的化学提取方法有：酸提取法、碱提取法等；常见的生物学方法有：酶法、中性盐析，微生物发酵法，重组DNA提取法等。其中，酸和碱的使用是胶原蛋白提取中最常见的手段，且处理时间长。这可能会导致胶原蛋白结构失活，蛋白降解等问题，进而导致最终提取效率不高。为了提高胶原蛋白的提取效率，缩短提取周期，提高产品质量，通过加入辅助方法去优化胶原蛋白的提取工艺已经被证明是一种有效的手段。已被发现和证实方法有撞击流法辅助酸和酶提取牛跟腱中的胶原蛋白（中国专利，CN106866815A），低剂量辐射辅助酶提取鱼皮中的胶原蛋白（中国专利，CN107022592A）和超声酸预处理辅助酸酶法提取白鲢鱼鱼皮胶原蛋白（CN110272485A）。但是总体来说辅助提取胶原蛋白的方法还是较少，市场上急需更多的时间短且提取效率高的胶原蛋白提取方法。珠磨法是一种物理破碎细胞的方式，基本原理是通过机械转动使磨腔内的细小磨介高速运动以产生各种机械应力作用，比如碰撞、挤压和剪切，以此来使细胞破碎从而达到从细胞中释放有价值物质的目的。珠磨法和胶体磨都是基于机械设备的方法，通过物理粉碎达到使原料分散的目的，常常用于材料的微粒化和乳化。操作简单，成本低，条件温和，适合用于胶原蛋白的提取工艺中。
[0005]本专利技术旨在提供一种从猪小肠粘膜下层中提取活性胶原蛋白的方法，有效解决了以上问题，大大缩短了提取时间提取率高，所获得的胶原蛋白具备稳定的三螺旋结构，活性
好，纯度高，适合推广应用。

技术实现思路

[0006]为克服以上技术问题，本专利技术提供了一种高效地从猪小肠粘膜下层中提取活性胶原蛋白的方法，操作简单，成本低；本专利技术提出的方法提取率高，所获得的胶原蛋白具备稳定的三螺旋结构，活性好，纯度高，适合推广应用。
[0007]为实现以上目的，本专利技术提供的技术方案如下：一种提取活性胶原蛋白的方法，包括如下步骤：（1）将猪小肠粘膜下层组织分离；（2）将猪小肠粘膜下层组织进行预处理、除杂；（3）将组织与酸液混合后，进行研磨，将组织粗破碎；（4）将粗破碎的组织中加入酶溶液并进行磨浆，制得细破碎匀浆；（5）盐析法进行胶原蛋白提取物的分离；对分离后的胶原蛋白提取物进行洗涤、真空冷冻干燥，即得高活性的胶原蛋白提取物。
[0008]优选地，（2）中，所述预处理为将分离出的猪小肠粘膜下层组织放在30
‑
40℃，优选为37℃，的碱液中处理15
‑
25 min后，放入酸液中浸泡处理5
‑
15 min，再转移至生理盐水中清洗，晾干。
[0009]优选地，所述酸液1
‑
3%乳酸；所述碱液为1
‑
3%NaOH溶液。
[0010]优选地，（3）中，所述酸液为复合酸，所述复合酸中包括：1
‑
3%柠檬酸，1
‑
3%乳酸，1
‑
3%盐酸。
[0011]优选地，（3）中，所述研磨过程中，加入2
‑
3颗钢珠，转移至球磨罐中，并于珠磨机上进行组织破碎。
[0012]优选地，所述研磨过程中设置珠磨机转速为300
‑
400 rpm，时间为4
‑
10s停3s，循环研磨6
‑
8次，重复3
‑
5次。
[0013]优选地，所述钢珠在
‑
20℃预冷5
‑
15 min处理，优选为10 min。
[0014]优选地，（4）中，所述酶溶液为复合酶溶液，所述复合酶溶液中包括：1000
‑
1500U/L脂肪酶，500
‑
1000U/L磷脂酶，0.01
‑
0.05w%水杨酸，1
‑
3w%柠檬酸钠，1000
‑
2000U/L无花果蛋白酶，1400
‑
2000U/L木瓜蛋白酶，胃蛋白酶1500
‑
4500U/L。
[0015]所述组织与复合酶溶液的用量比为1g：50
‑
100mL；优选为1g：50mL。
[0016]优选地，所述复合酶溶液的pH值为4.5
‑
5.5，优选为pH值为5.0，所述pH值使用1
‑
3%的NaOH溶液调节，优选为1%的NaOH溶液。
[0017]优选地，（4）中，所述磨浆过程中加入保护剂，所述保护剂包括柠檬酸
‑
盐酸
‑
氢氧化钠缓冲液；优选地，所述柠檬酸
‑
盐酸
‑
氢氧化钠缓冲液中：盐酸的质量浓度为0.45%
‑
1.6%，氢氧化钠浓度为8.4g/L
‑
18.6g/L，柠檬酸浓度为21g/L
‑
26.6g/L，可调节pH范围为2.2
‑
6.5。
[0018]优选地，所述柠檬酸
‑
盐酸
‑
氢氧化钠缓冲液的用量为5mL/g组织。优选地，所述保护剂中还包括冰块。
[0019]优选地，所述冰块的用量为组织体积的1/5
‑
1/10。
[0020]优选地，（5）中，所述分离为：将细破碎匀浆离心除掉沉淀物，取上层清液用碱液调
节pH值至中性，然后加入NaCl使其浓本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提取活性胶原蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将猪小肠粘膜下层组织分离；（2）将猪小肠粘膜下层组织进行预处理、除杂；（3）将组织与酸液混合后，进行研磨，将组织粗破碎；（4）将粗破碎的组织中加入酶溶液并进行磨浆，制得细破碎匀浆；（5）盐析法进行胶原蛋白提取物的分离；对分离后的胶原蛋白提取物进行洗涤、真空冷冻干燥，即得高活性的胶原蛋白提取物。2.如权利要求1所述的提取活性胶原蛋白的方法，其特征在于，（2）中，所述预处理为将分离出的猪小肠粘膜下层组织放在30
‑
40℃的碱液中处理15
‑
25 min后，放入酸液中浸泡处理5
‑
15 min，再转移至生理盐水中清洗，晾干。3.如权利要求2所述的提取活性胶原蛋白的方法，其特征在于，所述酸液为：1
‑
3%乳酸；所述碱液为1
‑
3%NaOH溶液。4.如权利要求1所述的提取活性胶原蛋白的方法，其特征在于，（3）中，所述酸液为复合酸，所述复合酸中包括：1
‑
3%柠檬酸，1
‑
3%乳酸，1
‑
3%盐酸。5.如权利要求1所述的提取活性胶原蛋白的方法，其特征在于，（3）中，所述研磨过程中，加入2
‑
3颗钢珠，转移至球磨罐中，并于珠磨机上进行组织破碎；所述研磨过程中设置珠磨机转速为300
‑
400 rpm，时间为4
‑
10s停3s，循环研磨6
‑
8次，重复3
...

【专利技术属性】
技术研发人员：张兰英，胡宁，季岩，张丹，顾建军，黄金子，
申请(专利权)人：北京思尔根生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：