肝癌的标记物在制备肝癌检测产品中的用途及检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了肝癌的标记物在制备肝癌检测产品中的用途及检测试剂盒，涉及肝癌诊断技术领域。本发明专利技术提供了肝癌的标记物在制备肝癌检测产品中的新用途，该标记物为：GNB4基因CpG位点和Riplet基因CpG位点。GNB4基因和Riplet基因的组合构成的标志物具有协同增效，可以极大程度上提升肝癌的检测灵敏度和特异性。本发明专利技术为肝癌的无创诊断提供了一种新思路。明为肝癌的无创诊断提供了一种新思路。

【技术实现步骤摘要】
肝癌的标记物在制备肝癌检测产品中的用途及检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及肝癌诊断
，具体而言，涉及肝癌的标记物在制备肝癌检测产品中的用途及检测试剂盒。

技术介绍

[0002]原发性肝癌是我国第4位常见恶性肿瘤及第2位肿瘤致死病因。原发性肝癌主要包括肝细胞癌、肝内胆管癌和肝细胞癌
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肝内胆管癌混合型3种不同病理学类型，其中肝细胞癌占85％～90％，其风险因素包括乙型/丙型肝炎病毒(HBV/HCV)感染、肥胖引起的非酒精性脂肪肝疾病、慢性酒精滥用等，这些因素可能直接导致肝硬化的发展，肝硬化患者每年发生肝癌的比率为2％
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4％。
[0003]由于肝细胞癌早期症状不明显，往往诊断时已经到达中晚期，失去了手术机会。早筛早诊早治是降低肝细胞癌发病率与死亡率的有效方法，方便、安全、快捷、高通量的筛查方法尤为重要。
[0004]AFP是目前唯一可用的检测和监测肝癌的血液标志物，当以20ng/ml为截断值时，AFP的敏感性只有约60％，特异性只有80％多，难以满足肝细胞癌早筛早诊的临床需求。而目前已报道的肝细胞癌血液标记物很少，且检测准确性有待提高。如现有文献CN201780053034.和Qiu X,Hu B,Huang Y,Deng Y,Wang X,Zheng F.Hypermethylation of ACP1,BMP4,and TSPYL5 in Hepatocellular Carcinoma and Their Potential Clinical Significance.Digestive diseases and sciences.2016；61:149
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57.公开了ACP1和TSPYL5的甲基化可用于肝细胞癌的检测，这两个基因的灵敏度在60％
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85％之间。
[0005]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供肝癌的标记物在制备肝癌检测产品中的用途及检测试剂盒以解决上述技术问题。
[0007]本专利技术是这样实现的：
[0008]本专利技术提供了肝癌的标记物在制备肝癌检测产品中的新用途，标记物为：GNB4基因CpG位点和Riplet基因CpG位点。
[0009]专利技术人研究发现，单独的GNB4基因和Riplet基因在肝癌样本中的检测灵敏度均大于80％，特异性均大于90％；而将GNB4基因和Riplet基因组合进行检测，发现二者在肝癌样本中的检测灵敏度达96％以上，特异性超出90％。GNB4基因和Riplet基因的组合后的肝癌检测灵敏度和特异性均超出GNB4+ACP1组合、GNB4+TSPYL1组合、Riplet+ACP1组合、Riplet+TSPYL1组合、ACP1+TSPYL1组合、Riplet+TSPYL1组合、Riplet+HOXA1组合、Riplet+BMP4组合、ACP1+TSPYL1组合、ACP1+HOXA1组合、ACP1+BMP4组合、TSPYL1+HOXA1组合、TSPYL1+BMP4组合和HOXA1+BMP4组合。GNB4基因和Riplet基因的组合具有协同增效，可以极大程度上提升肝癌的检测灵敏度和特异性。
[0010]上述肝癌包括肝细胞癌、肝内胆管癌和肝细胞癌
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肝内胆管癌混合型三种。上述标记物可以用于上述三种类型的原发性肝癌的早筛检测。
[0011]上述组合能有效避免肝脏其他疾病的干扰导致的假阳性，具有很高的特异性。本专利技术为肝癌的无创诊断提供了一种新思路。
[0012]在一种可选的实施方式中，上述标记物的甲基化水平既可以区分正常样本与原发性肝癌样本，也可以区分原发性肝癌和肝硬化。
[0013]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述肝癌检测产品选自如下产品中的至少一种：试剂、试剂盒、芯片和测序文库。
[0014]试剂的形态包括不限于：液体、粉剂、颗粒剂、乳液、悬浮液。
[0015]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述GNB4基因CpG位点为位于如下至少一种CpG岛区域内至少包含一个CpG位点的核酸分子：区域1和区域2。
[0016]其中，区域1选自Chr3:179450948
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179451805正链，区域2选自Chr3:179451805
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179450948负链。
[0017]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述Riplet基因CpG位点为位于如下至少一种CpG岛区域内至少包含一个CpG位点的核酸分子：区域3和区域4。
[0018]其中，区域3选自Chr17:30971029
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30971588正链，区域4选自Chr17:30971588
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30971029负链。
[0019]上述标记物的区域是以hg38基因组为参比基因组，专利技术人发现，肝癌组织、血液样本在上述区域的CpG位点存在高甲基化，通过检测这个区域的甲基化水平，即可判断该样本是否为肝癌。
[0020]本专利技术还提供了一种肝癌检测的核酸组合，其包括用于检测GNB4基因甲基化的第一核酸组合和用于检测Riplet基因甲基化的第二核酸组合；
[0021]第一核酸组合包括引物对1，引物对1的碱基序列与SEQ ID NO.1
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2所示的碱基序列具有至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、95％、96％、97％、98％、99％、100％)的一致性；
[0022]第二核酸组合包括引物对2，引物对2的碱基序列与SEQ ID NO.3
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4所示的碱基序列具有至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、95％、96％、97％、98％、99％、100％)的一致性。
[0023]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述第一核酸组合还包括探针1，探针1的碱基序列与SEQ ID NO.5所示的碱基序列具有至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、95％、96％、97％、98％、99％、100％)的一致性；
[0024]第二核酸组合还包括探针2，探针2的碱基序列与SEQ ID NO.6所示的碱基序列具有至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、95％、96％、97％、98％、99％、100％)的一致性。
[0025]上述核酸序列如下所示：
[0026]GNB4上游引物：TTGTGTCGCGTTTAGTTGTTACG，SEQ ID NO.1，GNB4下游引物：TACAAAACTTAAACCGCCGA，SEQ ID NO.2，GNB4探针：AATTGGTTTTACGATCGTCGGCGTA；SEQ ID NO.5，Riplet上游引物：CTAGGACGATTTCGGTTGTATTATT，SEQ ID NO.3，Riplet下游引物：CTCCCTAACGACAAATAAAACAAAC，SEQ ID NO.4，R本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.肝癌的标记物在制备肝癌检测产品中的用途，其特征在于，所述标记物为：GNB4基因CpG位点和Riplet基因CpG位点。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肝癌检测产品选自如下产品中的至少一种：试剂、试剂盒、芯片和测序文库。3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述GNB4基因CpG位点为位于如下至少一种CpG岛区域内至少包含一个CpG位点的核酸分子：区域1和区域2；其中，所述区域1选自Chr3:179450948
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179451805正链，所述区域2选自Chr3:179451805
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179450948负链。4.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述Riplet基因CpG位点为位于如下至少一种CpG岛区域内至少包含一个CpG位点的核酸分子：区域3和区域4；所述区域3选自Chr17:30971029
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30971588正链，所述区域4选自Chr17:30971588
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30971029负链。5.一种肝癌检测的核酸组合，其特征在于，其包括用于检测GNB4基因甲基化的第一核酸组合和用于检测Riplet基因甲基化的第...

【专利技术属性】
技术研发人员：张玮，周谛晗，李国强，
申请(专利权)人：武汉艾米森生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：