一种小球藻的培养方法技术

本发明专利技术涉及微藻培养技术领域，特别涉及一种小球藻的培养方法。本发明专利技术以金鲳鱼蒸煮液作为培养小球藻的主要营养物质，明显促进了小球藻的生长，添加醋酸、海盐和硝酸钠之后，促进作用更加明显，同时大大提高了小球藻中多不饱和脂肪酸的含量，使得培养获得的小球藻营养价值更高，可广泛用于保健品、食品的制备。食品的制备。

【技术实现步骤摘要】
一种小球藻的培养方法


[0001]本专利技术涉及微生物
，特别涉及一种小球藻的培养方法。

技术介绍

[0002]小球藻是绿藻门(Chlorophyta)、小球藻属(Chlorella)中的一种广泛分布在池塘、湖泊、海洋中的单细胞藻类，细胞呈球形或广椭圆形，大小因种类而有所不同，通常直径为3
‑
8微米。小球藻富含蛋白质、脂肪、碳水化合物、多种维生素及其他生物活性物质，可作为人类食品或动物饲料，具有较为广阔的开发利用前景。小球藻不仅蛋白质含量丰富，且构成小球藻蛋白质的必须氨基酸占总氨基酸的42％；多糖在小球藻中的含量仅次于蛋白质，约占干重的20％，多糖具有调节机体免疫的功能；小球藻在缺氮、高光条件下能够大量积累脂肪酸，其中诸如亚油酸、亚麻酸等长链不饱和脂肪酸的含量丰富，这些是人和动物必需的不饱和脂肪酸。
[0003]小球藻的营养方式包括自养、异养及兼养，因此其培养方式也具有多样性，可以分为自养培养、异养培养和混合培养，因此科学家可以根据不同的实验目的采用不同培养方式。目前，小球藻的培养方法较为繁琐，受各种条件的影响，生长速率不够理想，因此，需要提供一种能够明显促进小球藻生长同时提高多不饱和脂肪酸含量的培养方法，将培养获得的小球藻广泛用于制备保健品、食品。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术提供了一种小球藻的培养方法，该方法能够明显促进小球藻的生长，提高小球藻中多不饱和脂肪酸的含量。
[0005]一种小球藻的培养方法，包括：
[0006]收集金鲳鱼的蒸煮液，经预处理，获得培养液；
[0007]将培养液稀释后调节pH至7～9，收集对数中期的小球藻离心，取沉淀的藻种接种于稀释后的培养液中，初始培养的OD
750
为0.5，培养5～8天。
[0008]所述预处理包括：
[0009]将金鲳鱼的蒸煮液用纱布过滤，离心取上清液；
[0010]收集上清液分级过滤后，经121℃高压蒸汽处理20min，冷却至室温。
[0011]一些实施方案中，所述稀释的倍数为4～8倍，优选为8倍。
[0012]本专利技术提供的培养方法还包括在稀释的培养液中添加醋酸的步骤。
[0013]一些实施方案中，所述醋酸的添加量为至培养液中醋酸的浓度0.25～2g/L。在一些具体实施例中具体可为2g/l、1g/l、0.5g/l、0.25g/l。
[0014]一些实施方案中，所述培养的温度为15～35℃，优选为23℃。
[0015]一些实施方案中，所述培养的光照条件为：24小时光照，光照强度为50～250μmol
·
photons
·
m
‑2·
s
‑1，培养期间每天定时手动摇晃3次。其中，光照强度优选为250μmol
·
photons
·
m
‑2·
s
‑1。
[0016]一些实施方案中，本专利技术提供的培养方法在添加所述醋酸同时，还包括添加海盐和硝酸钠的步骤。
[0017]其中，所述海盐的添加量为至培养液中盐度为17.5～70
‰
，优选为52.5
‰
；所述硝酸钠的添加量为至培养液中N：P＝10～25:1，优选为15:1。
[0018]实验表明，本专利技术以金鲳鱼蒸煮液作为培养小球藻的主要营养物质，适当添加醋酸和海盐，明显促进了小球藻的生长，同时大大提高了小球藻中多不饱和脂肪酸的含量，使得培养获得的小球藻营养价值更高，可广泛用于保健品、食品的制备。
附图说明
[0019]图1为小球藻在不同废水稀释浓度下的干重变化图；
[0020]图2为小球藻在不同废水稀释浓度下的磷酸盐变化图；
[0021]图3为小球藻在不同温度下干重变化图，其中，3
‑
a为15℃下的干重变化图，3
‑
b为25℃下的干重变化图，3
‑
c为35℃下的干重变化图；
[0022]图4为小球藻在不同光强下干重变化图,其中，4
‑
a为50μmol
·
photons
·
m
‑2·
s
‑1的培养结果，4
‑
b为150μmol
·
photons
·
m
‑2·
s
‑1的培养结果，4
‑
c为250μmol
·
photons
·
m
‑2·
s
‑1的培养结果；
[0023]图5为小球藻在不同pH下干重变化图；
[0024]图6为小球藻在不同氮磷比下的细胞数变化图；
[0025]图7为小球藻在不同盐度下的细胞数变化图；
[0026]图8为小球藻在不同醋酸浓度下的细胞数变化图；
[0027]图9为实施例5中小球藻在不同培养条件下的细胞数、磷酸盐(9
‑
c)、叶绿素变化(9
‑
b)结果。
具体实施方式
[0028]本专利技术公开了一种小球藻的培养方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。
[0029]下面结合实施例，进一步阐述本专利技术：
[0030]实施例1稀释倍数、培养温度、pH对小球藻生长的影响
[0031](1)收集金鲳鱼蒸煮液，经纱布过滤，去除粗杂质，离心后收集上清液，以去除悬浮杂质；
[0032](2)用不同孔径的滤纸分级过滤后经121℃，20min高压蒸汽处理后冷却至室温，获得培养液；
[0033](3)用无菌水将培养液稀释成5个梯度：2倍，4倍，6倍，8倍，10倍(分别记为2*，4*，6*，8*，10*)，接种起始OD＝0.5左右的小球藻，于25℃，50μmol
·
photons
·
m
‑2·
s
‑1，24小时光照的恒温培养箱培养8天，每天测其干重和pH，Fv/Fm，水质情况(磷酸盐含量)，F2培养基培养作为对照组，结果见图1～2。根据小球藻干重和营养盐去除率选择最适培养液稀释浓
度，小球藻在培养液稀释8倍时，小球藻在培养液里适应性生长，生物量(干重1.35g/l)最高，磷酸盐去除率(31.70％)最好，选取稀释浓度为4倍，6倍，8倍做响应面的培养液稀释浓度因素的三个水平进行响应面实验。
[0034](4)将小球藻接种在最适培养液稀释浓度里，培养在15℃，25℃，35℃的环境中，每天测其干重和pH，Fv/Fm，检测结果见图3。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小球藻的培养方法，其特征在于，包括：收集金鲳鱼的蒸煮液，经预处理，获得培养液；将培养液稀释后调节pH至7～9，收集对数中期的小球藻离心，取沉淀的藻种接种于稀释后的培养液中，初始培养的OD
750
为0.5，培养5～8天。2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述预处理包括：将金鲳鱼的蒸煮液用纱布过滤，离心取上清液；收集上清液分级过滤后，经121℃高压蒸汽处理20min，冷却至室温。3.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述稀释的倍数为4～8倍。4.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，还包括在稀释的培养液中添加醋酸的步骤。5.根据权利要求4所述的培养方法，其特征在于，所述醋酸的添加量为至培养液中醋酸的浓度0.25～2g/L。6.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：路延笃，陈玉婷，顾佳华，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：