一种表皮干细胞体外培养试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种表皮干细胞体外培养试剂盒及其应用，所述表皮干细胞体外培养试剂盒包括促贴壁培养基和促转化培养基；所述促贴壁培养基包括干细胞培养基、细胞培养补充剂、胎牛血清、促贴壁细胞因子和IL

【技术实现步骤摘要】
一种表皮干细胞体外培养试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于细胞生物学
，尤其涉及一种表皮干细胞体外培养试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]表皮干细胞(ESCs)是一类具有增殖能力、可增殖分化为表皮中各种功能细胞的细胞群。其主要位于表皮基底层，属于成体干细胞，具有很强的分裂增殖能力，可以补充衰老脱落的角质细胞。
[0003]表皮干细胞作为皮肤组织特异性干细胞，不仅维持着表皮的日常新陈代谢，且积极参与皮肤损伤后的修复。探讨表皮干细胞增殖、分化以及迁移等具有重要意义，因此，体外获取并培养表皮干细胞是相关研究工作的基础。目前常规方法为对表皮组织进行原代培养获取表皮干细胞，但该方法操作复杂，且需要进行细胞分选，对技术人员的操作水平要求较高；获取的表皮干细胞在培养时需要使用饲养层细胞，成本较高，不利于大规模制备。
[0004]如何获得高纯度的表皮干细胞并维持其干细胞表型以及体外增殖的能力，是目前表皮干细胞体外培养中急需解决的问题。因此，如何提供一种操作简单、生产成本较低的表皮干细胞的获取及培养方法，已成为亟待解决的问题。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供一种表皮干细胞体外培养试剂盒及其应用，通过对培养基的组分进行优化，可以促进细胞贴壁，并提高细胞的转化效率，制备得到的表皮干细胞纯度高，体外增殖能力强，且操作简单，无需流式分选。
[0006]为达此目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]第一方面，本专利技术提供了一种表皮干细胞体外培养试剂盒，所述表皮干细胞体外培养试剂盒包括促贴壁培养基和促转化培养基；
[0008]所述促贴壁培养基包括干细胞培养基、细胞培养补充剂、胎牛血清、促贴壁细胞因子和IL
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3，其中，IL
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3的浓度为80～120ng/mL，例如可以是80ng/mL、85ng/mL、90ng/mL、95ng/mL、100ng/mL、105ng/mL、110ng/mL、115ng/mL或120ng/mL等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述；
[0009]所述促转化培养基包括干细胞培养基、细胞培养补充剂、促转化细胞因子、纤维粘连蛋白和IL
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3，其中，IL
‑
3的浓度为40～80ng/mL，例如可以是40ng/mL、45ng/mL、50ng/mL、55ng/mL、60ng/mL、65ng/mL、70ng/mL、75ng/mL或80ng/mL等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
[0010]本专利技术中，通过对培养基的组分进行优化，促贴壁培养基对细胞的促进贴壁的效果更高，促转化培养基对细胞的促进转化的效率更高，培养后制备得到的表皮干细胞数量更多，纯度更好，增殖能力更强，培养过程中无需饲养层细胞，降低了生产成本，应用前景广阔。
[0011]优选地，所述细胞培养补充剂在所述促贴壁培养基中的体积分数为1％～10％，例如可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
[0012]优选地，所述胎牛血清在所述促贴壁培养基中的体积分数为1％～10％，例如可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
[0013]优选地，所述促贴壁细胞因子包括rhGM
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CSF、bFGF和SCF。
[0014]优选地，所述rhGM
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CSF在所述促贴壁培养基中的浓度为800～1200IU/mL，例如可以是800IU/mL、850IU/mL、900IU/mL、950IU/mL、1000IU/mL、1050IU/mL、1100IU/mL、1150IU/mL或1200IU/mL等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
[0015]优选地，所述bFGF在所述促贴壁培养基中的浓度为80～120ng/mL，例如可以是80ng/mL、85ng/mL、90ng/mL、95ng/mL、100ng/mL、105ng/mL、110ng/mL、115ng/mL或120ng/mL等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
[0016]优选地，所述SCF在所述促贴壁培养基中的浓度为80～120ng/mL，例如可以是80ng/mL、85ng/mL、90ng/mL、95ng/mL、100ng/mL、105ng/mL、110ng/mL、115ng/mL或120ng/mL等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
[0017]优选地，所述细胞培养补充剂在所述促转化培养基中的体积分数为1％～10％，例如可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
[0018]优选地，所述纤维粘连蛋白在所述促转化培养基中的浓度为40～80μg/mL，例如可以是40μg/mL、45μg/mL、50μg/mL、55μg/mL、60μg/mL、65μg/mL、70μg/mL、75μg/mL或80μg/mL等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
[0019]优选地，所述促转化细胞因子包括EGF和BPE。
[0020]优选地，所述EGF在所述促转化培养基中的浓度为40～80IU/mL，例如可以是40IU/mL、45IU/mL、50IU/mL、55IU/mL、60IU/mL、65IU/mL、70IU/mL、75IU/mL或80IU/mL等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
[0021]优选地，所述BPE在所述促转化培养基中的浓度为40～80μg/mL，例如可以是40μg/mL、45μg/mL、50μg/mL、55μg/mL、60μg/mL、65μg/mL、70μg/mL、75μg/mL或80μg/mL等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
[0022]作为优选技术方案，本专利技术所述表皮干细胞体外培养试剂盒，包括促贴壁培养基和促转化培养基；
[0023]以体积分数计，所述促贴壁培养基包括细胞培养补充剂1％～10％、胎牛血清1％～10％、rhGM
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CSF 800～1200IU/mL、bFGF 80～120ng/mL、SCF 80～120ng/mL和IL
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3 80～120ng/mL，余量为干细胞培养基；
[0024]以体积分数计，所述促转化培养基包括细胞培养补充剂1％～10％、EGF 40～80IU/mL、BPE 40～80μg/mL、纤维粘连蛋白40～80μg/mL和IL
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3 40～80ng/mL，余量为干细胞培养基。
[0025]第二方面，本专利技术提供了一种表皮干细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种表皮干细胞体外培养试剂盒，其特征在于，所述表皮干细胞体外培养试剂盒包括促贴壁培养基和促转化培养基；所述促贴壁培养基包括干细胞培养基、细胞培养补充剂、胎牛血清、促贴壁细胞因子和IL
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3，其中，IL
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3的浓度为80～120ng/mL；所述促转化培养基包括干细胞培养基、细胞培养补充剂、促转化细胞因子、纤维粘连蛋白和IL
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3，其中，IL
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3的浓度为40～80ng/mL。2.根据权利要求1所述的表皮干细胞体外培养试剂盒，其特征在于，所述细胞培养补充剂在所述促贴壁培养基中的体积分数为1％～10％；优选地，所述胎牛血清在所述促贴壁培养基中的体积分数为1％～10％；优选地，所述促贴壁细胞因子包括rhGM
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CSF、bFGF和SCF；优选地，所述rhGM
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CSF在所述促贴壁培养基中的浓度为800～1200IU/mL；优选地，所述bFGF在所述促贴壁培养基中的浓度为80～120ng/mL；优选地，所述SCF在所述促贴壁培养基中的浓度为80～120ng/mL；优选地，所述细胞培养补充剂在所述促转化培养基中的体积分数为1％～10％；优选地，所述纤维粘连蛋白在所述促转化培养基中的浓度为40～80μg/mL；优选地，所述促转化细胞因子包括EGF和BPE；优选地，所述EGF在所述促转化培养基中的浓度为40～80IU/mL；优选地，所述BPE在所述促转化培养基中的浓度为40～80μg/mL。3.根据权利要求1或2所述的表皮干细胞体外培养试剂盒，其特征在于，所述表皮干细胞体外培养试剂盒包括促贴壁培养基和促转化培养基；以体积分数计，所述促贴壁培养基包括细胞培养补充剂1％～10％、胎牛血清1％～10％、rhGM
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CSF 800～1200IU/mL、bFGF 80～120ng/mL、SCF 80～120ng/mL和IL
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3 80～120ng/mL，余量为干细胞培养基；以体积分数计，所述促转化培养基包括细胞培养补充剂1％～10％、EGF 40～80IU/mL、BPE 40～80μg/mL、纤维粘连蛋白40～80μg/mL和IL
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3 40～80ng/mL，余量为干细胞培养基。4.一种表皮干细胞体外培养的方法，其特征在于，所述方法包括：清洗脐带组织并进行消毒，取出华通胶体，剪碎，离心收集组织块；使用权利要求1～3任一项中所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：易亮，梁秋彬，罗国辉，钱春明，颜春江，汪金球，黄景云，邵小兵，褚志伟，吴佑星，
申请(专利权)人：深圳市申友健康管理有限公司，
类型：发明
国别省市：