一种检测CYP2C19基因多态性的引物组及试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及基因检测领域，特别是涉及一种检测CYP2C19基因多态性的引物组及试剂盒，所述引物组中包括能够分别检测CYP2C19*2 681G、CYP2C19*2 681A、CYP2C19*3 636G、CYP2C19*3 636A、CYP2C19*17

【技术实现步骤摘要】
一种检测CYP2C19基因多态性的引物组及试剂盒


[0001]本专利技术涉及基因检测领域，特别是涉及一种检测CYP2C19基因多态性的引物组及试剂盒。

技术介绍

[0002]细胞色素P450(CYP450)同工酶是人体内主要的药物代谢酶之一。CYP2C19是CYP450同工酶家族的重要成员，代谢的临床药物主要包括抗血小板药物(如氯吡格雷)和质子泵抑制剂(如奥美拉唑)等。编码CYP2C19酶的基因是CYP2C19基因，该基因位于10号染色体的10q24.2上。CYP2C19基因含有多个等位基因，最常见的是CYP2C19*2(c.681G>A)、CYP2C19*3(c.636G>A)和CYP2C19*17(c.
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806C>T)。CYP2C19*2和CYP2C19*3突变导致CYP2C19酶活性降低，而CYP2C19*17突变导致CYP2C19酶活性增强。CYP2C19*2、CYP2C19*3和CYP2C19*17在中国人群的发生频率分别约为23.1
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35％、2
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7％和0.5
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4％。
[0003]从药物代谢方面来说，CYP2C19基因不同等位基因突变组合，使人群出现超快代谢者(UM)、快代谢者(EM)、中间代谢者(IM)和慢代谢者(PM)4种表型。UM个体的基因型可为CYP2C19*17/*17纯合型或CYP2C19*1/*17杂合型；EM个体的基因型可为CYP2C19*1/*1纯合型；IM个体的基因型可为CYP2C19*1/*2、CYP2C19*1/*3、CYP2C19*2/*17或CYP2C19*3/*17杂合型；PM个体的基因型可为CYP2C19*2/*3、CYP2C19*2/*2和CYP2C19*3/*3杂合型或纯合型。研究表明，CYP2C19不同代谢类型与奥美拉唑的临床疗效相关，PM患者的疗效优于EM患者；而对氯吡格雷研究表明，IM患者需更改剂量达到抗血小板的疗效，而PM患者患者需要增加药量或改用其他抗凝血药物如替格瑞洛等。因此，对CYP2C19基因型检测，可以判断个体对药物代谢能力及疗效的情况，从而指导临床用药，具有重要的临床意义。
[0004]目前，检测CYP2C19基因多态性的方法有很多种，主要的方法有限制性片段长度多态性聚合酶链反应技术(PCR
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RFLP)、Sanger测序法、基因芯片法、荧光定量PCR法等。Sanger测序法是检测基因多态性的金标准，但该方法由于检测成本较高、操作复杂以及检测周期长，不太适合临床推广使用。PCR
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RFLP法无需购买昂贵检测设备，但是其操作复杂，步骤繁多且容易污染。基因芯片法通过PCR产物与探针杂交，通过比较信号强度判断基因型，但是由于PCR产物需要进行后续分析，操作繁琐且容易出现假阳性。荧光定量PCR法由于操作简单，检测时间短，全程闭管检测，减少产物交叉污染，已经成为临床常用的检测方法。以上方法均需提取和纯化核酸，核酸提取纯化流程不仅增加实验检测步骤、检测成本和检测周期，而且存在因操作失误导致检测失败的可能。因此，难以满足临床对检测简单、快速、准确的需求。为解决以上问题，亟需建立一种操作简便、检测快速、成本低、灵敏度高且结果准确的CYP2C19多态性检测试剂盒，从而满足临床诊断需求。

技术实现思路

[0005]鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种检测CYP2C19基因多态性的引物组及试剂盒，用于解决现有技术中的问题。
[0006]为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供一种检测CYP2C19基因多态性的引物组，所述引物组包括以下中的一对或多对引物：
[0007]1)第一引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的CYP2C19*2 681G上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的CYP2C19*2 681G下游引物；
[0008]2)第二引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的CYP2C19*2 681A上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的CYP2C19*2 681A下游引物；
[0009]3)第三引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的CYP2C19*3 636G上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示的CYP2C19*3 636G下游引物；
[0010]4)第四引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示的CYP2C19*3 636A上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示的CYP2C19*3 636A下游引物；
[0011]5)第五引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示的CYP2C19*17
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806C上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示的CYP2C19*17
‑
806C下游引物；
[0012]6)第六引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示的CYP2C19*17
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806T上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示的CYP2C19*17
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806T下游引物。
[0013]本专利技术提供一种检测CYP2C19基因多态性的试剂盒，所述试剂盒中包括PCR反应物和质控品，所述PCR反应物包括：
[0014]第一反应物，包括所述第一引物对；
[0015]第二反应物，包括所述第二引物对；
[0016]第三反应物，包括所述第三引物对；
[0017]第四反应物，包括所述第四引物对；
[0018]第五反应物，包括所述第五引物对；
[0019]第六反应物，包括所述第六引物对。
[0020]如上所述，本专利技术的检测CYP2C19基因多态性的引物组及试剂盒，具有以下有益效果：
[0021]1)本试剂盒不需要复杂的核酸提取纯化流程，减少提取纯化环节，缩短检测时间；可对血卡和全血样本进行荧光PCR扩增检测。
[0022]2)本试剂盒设计的ARMS引物和Taqman探针针对CYP2C19基因型，可以特异性扩增识别基因型，确保结果准确性。
[0023]3)检测过程均为闭管检测，避免核酸扩增导致的气溶胶污染，确保结果真实可信；
[0024]4)检测反应体系加入UNG酶防污染系统，显著降低污染可能；
[0025]5)增加阴性质控和阳性质控，监控假阳性和试剂及操作有效性。
[0026]6)具有灵敏性高、特异性强、操作简易、价格低廉等优点，可以快速、准确检测CYP2C19基因多态性，适合临床CYP2C19基因多态性分析检测和推广，满足临床诊断需求。
附图说明
[0027]图1显示为CYP2C19 c.681位点GG野生型检测结果。
[0028]图2显示为CYP2C19 c.681位点GA杂合突变型检测结果。
[0029]图3显示为CYP2C19本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测CYP2C19基因多态性的引物组，其特征在于，所述引物组包括以下中的一对或多对引物：1)第一引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的CYP2C19*2 681G上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的CYP2C19*2 681G下游引物；2)第二引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的CYP2C19*2 681A上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的CYP2C19*2 681A下游引物；3)第三引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的CYP2C19*3 636G上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示的CYP2C19*3 636G下游引物；4)第四引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示的CYP2C19*3 636A上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示的CYP2C19*3 636A下游引物；5)第五引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示的CYP2C19*17
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806C上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示的CYP2C19*17
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806C下游引物；6)第六引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示的CYP2C19*17
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806T上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示的CYP2C19*17
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806T下游引物。2.一种检测CYP2C19基因多态性的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括PCR反应物和质控品，所述PCR反应物包括：第一反应物，包括权利要求1所述引物组中的第一引物对；第二反应物，包括权利要求1所述引物组中的第二引物对；第三反应物，包括权利要求1所述引物组中的第三引物对；第四反应物，包括权利要求1所述引物组中的第四引物对；第五反应物，包括权利要求1所述引物组中的第五引物对；第六反应物，包括权利要求1所述引物组中的第六引物对。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括以下特征中的任一项或多项：1)所述第一反应物还包括CYP2C19*2 681G探针、内参基因引物对和内参基因探针中的一种或多种；2)所述第二反应物还包括CYP2C19*2 681A探针、内参基因引物对和内参基因探针中的一种或多种；3)所述第三反应物还包括CYP2C19*3 636G探针、内参基因引物对和内参基因探针中的一种或多种；4)所述第四反应物还包括CYP2C19*3 636A探针、内参基因引物对和内参基因探针中的一种或多种；5)所述第五反应物还包括CYP2C19*17
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806C探针、内参基因引物对和内参基因探针中的一种或多种；6)所述第六反应物还包括CYP2C19*17
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806T探针、内参基因引物对和内参基因探针中的一种或多种。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括以下特征中的任一项或多项：1)所述CYP2C19*2 681G探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；2)所述CYP2C19*2 681A探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；3)所述CYP2C19*3 636G探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；
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【专利技术属性】
技术研发人员：张祥林，张劲松，胡秋萍，魏鹏，
申请(专利权)人：上海美吉逾华生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：