信使RNA的包封制造技术

本发明专利技术提供了一种用于脂质纳米颗粒配制和mRNA包封的改良方法。在一些实施方案中，本发明专利技术提供了一种将信使RNA(mRNA)包封在脂质纳米颗粒中的方法，其包括混合mRNA溶液和脂质溶液的步骤，其中所述mRNA溶液和/或所述脂质溶液处于大于环境温度的预定温度下。液处于大于环境温度的预定温度下。

【技术实现步骤摘要】
信使RNA的包封
[0001]本申请是申请号为201580033224.5、申请日为2015年7月2日、专利技术名称为“信使RNA的包封”的中国专利技术专利申请的分案申请，原申请为国际申请号为PCT/US2015/039004的PCT国际申请的中国国家阶段申请，该国际申请要求申请日为2014年7月2日，申请号为62/020,163的美国临时申请的优先权。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请要求2014年7月2日提交的美国临时专利申请第62/020,163号的优先权，所述申请的公开内容通过引用整体并入本文中。
[0004]专利技术背景
[0005]信使RNA治疗(MRT)正在成为治疗各种疾病的越来越重要的方法。MRT涉及将信使RNA(mRNA)施用到需要用于产生由患者体内的mRNA编码的蛋白质的治疗的患者中。脂质纳米粒常用于包封mRNA以用于mRNA的有效体内递送。然而，用于产生负载mRNA的脂质纳米颗粒的当前方法遭受不良的包封效率，低mRNA回收率和/或不均匀的粒度。
专利技术概要
[0006]本专利技术尤其提供了一种用于脂质纳米颗粒配制和mRNA包封的改良方法。具体地说，本专利技术基于以下出乎意料的发现：在混合之前预加热mRNA溶液和/或脂质溶液产生显着改善的包封效率、mRNA回收率以及更均匀和更小的粒度(例如，小于100nm)。
[0007]因此，在一些实施方案中，本专利技术提供了一种将信使RNA(mRNA)包封在脂质纳米颗粒中的方法，其包括混合mRNA溶液和脂质溶液的步骤，其中mRNA溶液和/或脂质溶液处于大于环境温度的预定温度下。在一些实施方案中，适用于本专利技术的预定温度为等于或大于约30℃、37℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃或70℃。在一些实施方案中，适用于本专利技术的预定温度介于约25
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70℃、约30
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70℃、约35
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70℃、约40
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70℃、约45
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70℃、约50
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70℃或约60
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70℃的范围内。在特定实施方案中，适用于本专利技术的预定温度为约65℃。
[0008]在一些实施方案中，mRNA溶液和脂质溶液在混合前分别被加热至预定温度。在一些实施方案中，在混合之前，mRNA溶液被加热至预定温度且脂质溶液处于环境温度下。在一些实施方案中，通过将环境温度下的mRNA储备溶液添加到加热的缓冲溶液中达到预定温度而将mRNA溶液加热至预定温度。在一些实施方案中，缓冲溶液具有不大于约4.5(例如，不大于约4.4、4.2、4.0或3.8)的pH。
[0009]在一些实施方案中，通过无脉流泵混合mRNA溶液和脂质溶液。在一些实施方案中，合适的泵是齿轮泵。在一些实施方案中，合适的泵是蠕动泵。在一些实施方案中，合适的泵是离心泵。
[0010]在一些实施方案中，在介于约150
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250ml/分钟、250
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500ml/分钟、500
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1000ml/分钟、1000
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2000ml/分钟、2000
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3000ml/分钟、3000
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4000ml/分钟或4000
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5000ml/分钟的范围内的流速下混合mRNA溶液。在一些实施方案中，在约200ml/分钟、约500ml/分钟、约1000ml/分钟、约2000ml/分钟、约3000ml/分钟、约4000ml/分钟或约5000ml/分钟的流速下混合mRNA溶液。
[0011]在一些实施方案中，在介于约25
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75ml/分钟、约75
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200ml/分钟、约200
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350ml/分钟、约350
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500ml/分钟、约500
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650ml/分钟、约650
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850ml/分钟或约850
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1000ml/分钟的范围内的流速下混合脂质溶液。在一些实施方案中，在约50ml/分钟、约100ml/分钟、约150ml/分钟、约200ml/分钟、约250ml/分钟、约300ml/分钟、约350ml/分钟、约400ml/分钟、约450ml/分钟、约500ml/分钟、约550ml/分钟、约600ml/分钟、约650ml/分钟、约700ml/分钟、约750ml/分钟、约800ml/分钟、约850ml/分钟、约900ml/分钟、约950ml/分钟或约1000ml/分钟的流速下混合脂质溶液。
[0012]在一些实施方案中，根据本专利技术的方法包括首先通过混合柠檬酸盐缓冲液与mRNA储备溶液产生mRNA溶液的步骤。在某些实施方案中，合适的柠檬酸盐缓冲液包含约10mM柠檬酸盐、约150mM NaCl、约4.5的pH。在一些实施方案中，合适的mRNA储备溶液含有浓度等于或大于约0.10mg/mL、1mg/ml、约10mg/ml、约50mg/ml或约100mg/ml的mRNA。
[0013]在一些实施方案中，在介于约100
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300ml/分钟、300
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600ml/分钟、600
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1200ml/分钟、1200
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2400ml/分钟、2400
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3600ml/分钟、3600
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4800ml/分钟或4800
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6000ml/分钟的范围内的流速下混合柠檬酸盐缓冲液。在一些实施方案中，在约220ml/分钟、约600ml/分钟、约1200ml/分钟、约2400ml/分钟、约3600ml/分钟、约4800ml/分钟或约6000ml/分钟的流速下混合柠檬酸盐缓冲液。
[0014]在一些实施方案中，在介于约10
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30ml/分钟、约30
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60ml/分钟、约60
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120ml/分钟、约120
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240ml/分钟、约240
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360ml/分钟、约360
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480ml/分钟或约480
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600ml/分钟的范围内的流速下混合mRNA储备溶液。在一些实施方案中，在约20ml/分钟、约40ml/分钟、约60ml/分钟、约80ml/分钟、约100ml/分钟、约200ml/分钟、约300ml/分钟、约400ml/分钟、约500ml/分钟或约600ml/分钟的流速下混合mRNA储备溶液。
[0015]在一些实施方案中，所述脂质溶液在乙醇中含有一种或多种阳离子脂质、一种或多种辅助脂质、一种或多种基于胆固醇的脂质和PEG脂质。在一些实施方案中，将mRNA溶液和脂质溶液混合于20％乙醇中，得到脂质纳米颗粒的悬浮液。在一些实施方案中，脂质纳米颗粒通过切向流过滤进一步纯化。
[0016]在一些实施方案中，大于约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种将信使RNA(mRNA)包封在脂质纳米颗粒中的方法，其包括混合mRNA溶液和脂质溶液的步骤，其中所述mRNA溶液和/或所述脂质溶液处于大于环境温度的预定温度下。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述预定温度为等于或大于约30℃、37℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃或70℃。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述预定温度介于约25
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70℃、约30
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70℃、约35
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70℃、约40
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70℃、约45
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70℃、约50
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70℃或约60
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70℃的范围内。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述预定温度为约65℃。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述mRNA溶液和所述脂质溶液在混合前分别被加热至所述预定温度。6.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中在混合之前，所述mRNA溶液被加热至所述预定温度且所述脂质溶液处于环境温度下。7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中通过将环境温度下的mRNA储备溶液添加到加热的缓冲溶液中达到所述预定温度而将所述mRNA溶液加热至所述预定温度。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述缓冲溶液具有不大于约4.5的pH。9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中通过无脉流泵混合所述mRNA溶液和所述脂质溶液。10.根据权利要求9所述的方法，其中所述泵是齿轮泵。11.根据权利要求9所述的方法，其中所述泵是离心泵。12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在介于约150
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250ml/分钟、250
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500ml/分钟、500
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1000ml/分钟、1000
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2000ml/分钟、2000
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3000ml/分钟、3000
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4000ml/分钟或4000
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5000ml/分钟的范围内的流速下混合所述mRNA溶液。13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在约200ml/分钟、约500ml/分钟、约1000ml/分钟、约2000ml/分钟、约3000ml/分钟、约4000ml/分钟或约5000ml/分钟的流速下混合所述mRNA溶液。14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在介于约25
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75ml/分钟、约75
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200ml/分钟、约200
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350ml/分钟、约350
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500ml/分钟、约500
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650ml/分钟、约650
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850ml/分钟或约850
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1000ml/分钟的范围内的流速下混合所述脂质溶液。15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在约50ml/分钟、约100ml/分钟、约150ml/分钟、约200ml/分钟、约250ml/分钟、约300ml/分钟、约350ml/分钟、约400ml/分钟、约450ml/分钟、约500ml/分钟、约550ml/分钟、约600ml/分钟、约650ml/分钟、约700ml/分钟、约750ml/分钟、约800ml/分钟、约850ml/分钟、约900ml/分钟、约950ml/分钟或约1000ml/分钟的流速下混合所述脂质溶液。16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法包括首先通过混合柠檬酸盐缓冲液与mRNA储备溶液产生所述mRNA溶液的步骤。17.根据权利要求16所述的方法，其中所述柠檬酸盐缓冲液包含约10mM柠檬酸盐、约150mM NaCl、约4.5的pH。18.根据权利要求16或17所述的方法，其中所述mRNA储备溶液包含浓度等于或大于约1mg/ml、约10mg/ml、约50mg/ml、约100mg/ml的mRNA。19.根据权利要求16至18中任一项所述的方法，其中在介于约100
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300ml/分钟、300
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600ml/分钟、600
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1200ml/分钟、1200
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2400ml/分钟、2400
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3600ml/分钟、3600
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4800ml/分钟或4800
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6000ml/分钟的范围内的流速下混合所述柠檬酸盐缓冲液。20.根据权利要求16至19中任一项所述的方法，其中在约220ml/分钟、约600ml/分钟、约1200ml/分钟、约2400ml/分钟、约3600ml/分钟、约4800ml/分钟或约6000ml/分钟的流速下混合所述柠檬酸盐缓冲液。21.根据权利要求16至20中任一项所述的方法，其中在介于约10
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30ml/分钟、约30
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60ml/分钟、约60
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120ml/分钟、约120
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240ml/分钟、约240
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360ml/分钟、约360
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480ml/分钟或约480
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600ml/分钟的范围内的流速下混合所述mRNA储备溶液。22.根据权利要求16至21中任一项所述的方法，其中在约20ml/分钟、约40ml/分钟、约60ml/分钟、约80ml/分钟、约100ml/分钟、约200ml/分钟、约300ml/分钟、约400ml/分钟、约500ml/分钟或约600ml/分钟的流速下混合所述mRNA储备溶液。23.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述脂质溶液在乙醇中包含一种或多种阳离子脂质、一种或多种辅助脂质、一种或多种基于胆固醇的脂质和PEG脂质。24.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述mRNA溶液和所...

【专利技术属性】
技术研发人员：F，
申请(专利权)人：川斯勒佰尔公司，
类型：发明
国别省市：