一种采用HPLC-PDA方法检测公英青蓝合剂中15种有效成分的方法技术

本发明专利技术涉及一种采用HPLC

【技术实现步骤摘要】
一种采用HPLC
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PDA方法检测公英青蓝合剂中15种有效成分的方法


[0001]本专利技术涉及一种采用HPLC
‑
PDA方法检测公英青蓝合剂中15种有效成分的方法，属于兽药有效成分检测领域。

技术介绍

[0002]公英青蓝合剂现收载于《兽药质量标准》2017年版中药卷p96
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97，处方为：蒲公英200g，大青叶200g，板蓝根200g，金银花100g，黄芩100g，黄柏100g，甘草100g，藿香50g，石膏50g；以上9味，加水煎煮2次，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.09，加水至1000mL，加适量防腐剂，灌装，灭菌，即得，为棕褐色的液体；味苦。具有清热解毒的功效，辅助治疗鸡传染性法氏囊等病毒性疾病，广泛应用于集约化家禽养殖企业。
[0003]现行标准对黄芩(黄芩苷)、黄柏(盐酸小檗碱)分别进行了薄层鉴别，对绿原酸进行了含量测定。该方法存在很大的缺点：薄层鉴别展开剂共采用乙酸丁酯、丁酮、甲酸、苯、乙酸乙酯、甲醇、异丙醇、浓氨试液等多种溶剂，污染大、前处理繁琐，展开耗时长，结果不易判定。
[0004]另外标准中只对绿原酸进行了含量测定，对其他主要成分未测，流动相比例中乙腈占比小，大部分有效成分储积在柱子中，未及时冲出，柱子寿命大大缩短。

技术实现思路

[0005]本专利技术针对上述问题，提供了一种采用HPLC
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PDA方法检测公英青蓝合剂中15种有效成分的方法，本次专利技术采用反相高效液相色谱(UPLC
‑
PDA)分离技术，对公英青蓝合剂中的有效成分金银花、蒲公英、板蓝根、大青叶、黄芩、黄柏、甘草等开展一法多测研究，优化提取方法、色谱条件，尤其是需要优化检测波长和梯度洗脱程序，使尽可能多的目标峰分离出来，对含量较高的组分进行含量测定，实现定性或定量，方法更高效、快速、环保。本专利技术成功建立了一种采用HPLC
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PDA检测公英青蓝合剂液中15种有效成分的方法：新绿原酸、(R，S)
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告依春、单咖啡酰酒石酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、甘草苷、绿原酸B、菊苣酸、4,5
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二
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O
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咖啡酰奎宁酸、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、黄芩苷、黄芩、甘草酸，共计15种。
[0006]其中，(R，S)
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告依春来检测板蓝根和大青叶；新绿原酸、单咖啡酰酒石酸、隐绿原酸、绿原酸、咖啡酸、异绿原酸B、菊苣酸和4,5
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二
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O
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咖啡酰奎宁酸来检测金银花和蒲公英；绿原酸和盐酸小檗碱、盐酸巴马汀来检测黄柏；黄芩苷和黄芩素来检测黄芩；甘草酸和甘草苷来检测甘草。
[0007]进一步的，本专利技术采用液相色谱仪，梯度洗脱的方式，PDA检测器，3D扫描范围190
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450nm，2D检测波长选择217nm(甘草苷最大吸收波长)，240nm(表告依春最大吸收波长)，278nm(黄芩苷和黄芩素最大吸收波长)324nm(咖啡酸最大吸收波长)，327nm(绿原酸等系列化合物最大吸收波长)，251nm(甘草酸最大吸收波长)，330nm(单咖啡酰酒石酸、菊苣酸最大吸收波长)，346nm(盐酸小檗碱、盐酸巴马汀最大吸收波长)等。由于(R，S)
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告依春最大吸收
波长240nm，在251nm、324nm、327nm、330nm等处几乎紫外吸收太小，最终采用240nm来采集，兼顾其他化合物的响应值。
[0008]进一步的，本专利技术同时鉴别公英青蓝合剂液中15种成分的方法，包括下述步骤：
[0009]第一步：供试品溶液的制备：取供试品至棕色容量瓶，加入溶剂，定容至25mL，振摇后超声提取，提取时间20
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40min，过滤，作为供试品溶液；
[0010]优选的，所述供试品的取样量为1mL，所述溶剂选自10％甲醇、50％甲醇、20％乙醇、50％乙醇或者75％乙醇，优选为20％乙醇，提取时间30min；
[0011]第二步，对照品溶液的制备：各取(R，S)
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告依春、新绿原酸、单咖啡酰酒石酸、隐绿原酸、绿原酸、咖啡酸、甘草苷、异绿原酸B、菊苣酸、3,5
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二
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O
‑
咖啡酰奎宁酸、4,5
‑
二
‑
O
‑
咖啡酰奎宁酸、黄芩苷、黄芩素、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和甘草酸对照品适量至容量瓶，分别加无水乙醇或甲醇或75％乙醇，制备对照品储备溶液；再取15种储备液适量体积混合，作为混合对照品储备溶液；
[0012]第三步：液相色谱法：
[0013]扫描波长：190
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400nm；
[0014]检测波长：217nm，240nm，278nm，324nm，327nm，230nm，251nm，330nm，346nm等；优选的，检测波长为240nm；
[0015]色谱柱：安捷伦色谱柱zorbax SB C18 4.6*150mm，粒径3.5micro；
[0016]进样量为：1
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10μL；优选的，所述进样量为5μL
[0017]柱温：30
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40℃；
[0018]流动相A项：乙腈；
[0019]流动相B项：0.4％磷酸溶液；
[0020]流速：0.60mL/min；
[0021]运行时间：66min；
[0022]梯度洗脱程序：
[0023]0‑
18min，A相为8％，B为92％；
[0024]18
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20min，A为20％，B为80％；
[0025]20
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48min，A为20％，B为80％；
[0026]48
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50min，A为40％，B为60％；
[0027]50
‑
58min，A为20％，B为80％；
[0028]58
‑
59min，A为8％，B为92％；
[0029]59
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66min，A为8％，B为92％。
[0030]优选的，使用仪器：waters e2695配二极管阵列检测器PDA；agilent infinity II配二极管阵列检测器DAD。
[0031]本专利技术与现有技术相比具有以下优点：
[0032]本专利技术通过一套液相色谱系统同时把15种目标化合物一次鉴别出来，方法简便快速、分离效果好，鉴别精度高，结果重现性好，易于观察，专属性强，色谱峰峰形良好，既达到中国兽药典的要求，还节省时间、试剂。
附图说明
[0033]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定
[0034]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种采用HPLC
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PDA方法检测公英青蓝合剂中15种有效成分的方法，其特征在于，所述方法采用反相高效液相色谱(UPLC
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PDA)分离技术，对公英青蓝合剂中15种有效成分新绿原酸、(R，S)
‑
告依春、单咖啡酰酒石酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、甘草苷、绿原酸B、菊苣酸、4,5
‑
二
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O
‑
咖啡酰奎宁酸、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、黄芩苷、黄芩、甘草酸的检测；其中，(R，S)
‑
告依春来检测板蓝根和大青叶；新绿原酸、单咖啡酰酒石酸、隐绿原酸、绿原酸、咖啡酸、异绿原酸B、菊苣酸和4,5
‑
二
‑
O
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咖啡酰奎宁酸来检测金银花和蒲公英；绿原酸和盐酸小檗碱、盐酸巴马汀来检测黄柏；黄芩苷和黄芩素来检测黄芩；甘草酸和甘草苷来检测甘草。2.根据权利要求1所述的采用HPLC
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PDA方法检测公英青蓝合剂中15种有效成分的方法，其特征在于，所述方法包括下述步骤：第一步：供试品溶液的制备：取供试品至棕色容量瓶，加入溶剂，定容至25mL，振摇后超声提取，提取时间20
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40min，过滤，作为供试品溶液；第二步，对照品溶液的制备：各取(R，S)
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告依春、新绿原酸、单咖啡酰酒石酸、隐绿原酸、绿原酸、咖啡酸、甘草苷、异绿原酸B、菊苣酸、3,5
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二
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O
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咖啡酰奎宁酸、4,5
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二
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O
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咖啡酰奎宁酸、黄芩苷、黄芩素、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和甘草酸对照品适量至容量瓶，分别加无水乙醇、甲醇或75％乙醇，制备对照品储备溶液；再取15种储备液适量体积混合，作为混合对照品储备溶液；第三步：液相色谱法：扫描波长：190
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400nm；检测波长：217nm，240nm，278nm，324nm，327nm，230nm，251nm，330nm，346nm等；色谱柱：安捷伦色谱柱zorbax SB C18 4.6*150mm，粒...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏秀丽，张传津，韩愈杰，王尚明，张志民，汪安国，杜伟伟，
申请(专利权)人：山东迅达康兽药有限公司保定冀中生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：