一种添加维生素B6提高大肠杆菌工程菌合成5-氨基乙酰丙酸的方法技术

本发明专利技术属于代谢工程和微生物发酵技术领域，具体涉及一种添加维生素B6提高大肠杆菌工程菌合成5

【技术实现步骤摘要】
一种添加维生素B6提高大肠杆菌工程菌合成5
‑
氨基乙酰丙酸的方法


[0001]本专利技术属于代谢工程和微生物发酵
，具体涉及一种添加维生素B6提高大肠杆菌工程菌合成5
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氨基乙酰丙酸的方法。

技术介绍

[0002]5‑
氨基乙酰丙酸（5
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aminolevulinic acid）简称5
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ALA，是一种非蛋白质氨基酸，在生命体中广泛存在，是血红素、叶绿素、维生素B12等四吡咯化合物生物合成的必需前体。由于在生物体内所处的关键代谢节点及其下游代谢物的重要生理功能，5
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ALA在医药、保健、动物健康和植物营养等方面具有重要的应用价值和广阔的应用前景。作为第二代光敏剂，5
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ALA从上世纪90年代就开始用于皮肤类疾病的光动力学治疗以及癌症的光动力学诊断和辅助切除。基于血红素和维生素B12在动物能量和物质代谢中的重要作用，外源补充5
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ALA可以促进人体和畜禽的新陈代谢，增强机体活力和免疫力。另外，由于具有生物可降本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种添加维生素B6提高大肠杆菌工程菌合成5
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氨基乙酰丙酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将保藏状态的发酵工程菌活化后，转接至备好的摇瓶发酵培养基中，并于温度为37℃的条件下培养12h，得到发酵种子；其中，所述发酵工程菌以大肠杆菌为宿主，以pTrc
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99a为载体过量表达外向转运蛋白基因rhtA和来自类球红细菌的5
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氨基乙酰丙酸合成酶基因hemA；（2）备好发酵培养基，往其中添加维生素B6和氨苄青霉素并搅匀，直至所述发酵培养基中维生素B6的终浓度为5
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80mg/L、所述氨苄青霉素的终浓度为100mg/L；接着，将步骤（1）得到的发酵种子以1
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5%的接种量接种于所述发酵培养基中，得到发酵物料；（3）将上述得到的发酵物料置于温度为37℃、转速为220rpm的条件下进行发酵培养；发酵培养至3h时，往其中加入IPTG至所述发酵物料中IPTG的终浓度为0.05mM，并调节温度为30℃的条件进行诱导基因表达，继续发酵培养至24h时，停止发酵。2.根据权利要求1所述的一种添加维生素B6提高大肠杆菌工程菌合成5
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氨基乙酰丙酸的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述发酵培养基中维生素B6的终浓度为10
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40mg/L。3.根据权利要求1所述的一种添加维生素B6提高大肠杆菌工程菌合成5
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氨基乙酰丙酸的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述发酵培养基中维生素B6的终浓度为20mg/L。4.根据权利要求1
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3任一项所述的一种添加维生素B6提高大肠杆菌工程菌合成5
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氨基乙酰丙酸的方法，其特征在于：步骤（1）中所述大肠杆菌为E.coli MG1655。5.根据权利要求1
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3任一项所述的一种添加维生素B6提高大肠杆菌工程菌合成5
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氨基乙酰丙酸的方法，其特征在于，步骤（1）中所述发酵工程菌的构建方法如下：.合成hemA基因片段后，在其5'端和3'端分别引入EcoR I和Kpn I酶切位点，得到第一目的片段；将第一目的片段和pTrc
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99a载体分别用EcoR I和Kpn I进行酶切处理，回收酶切产物并纯化，将两者纯化后的酶切产物在DNA连接酶的作用下连接，连接条件为16℃、30min，得到第一连接产物；.将第一连接产物转化E.coli DH5α感受态细胞，涂布于含100ug/mL的氨苄青霉素LB固体平板，并于37℃的条件下倒置培养16
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20h；挑取平板的单菌落接种于5mL含100ug/mL的氨苄青霉素的LB培养基，于37℃、220rpm的条件下过夜培养，再收集菌体并提取DNA质粒，经测序验证，插入hemA片段的质粒命名为pTrc
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hemA质粒；.以E.coli MG1655的基因组序列为参照，设计引物F
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rhtA：GCTCTAGACCGCCAG...

【专利技术属性】
技术研发人员：滕昆，梁承，邹林君，陈成，余义发，苏善高，闭革林，罗培繁，
申请(专利权)人：南宁汉和生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：