抗体分子及其在SLCO2A1基因相关慢性肠病的免疫组化诊断中的应用制造技术

本申请涉及抗体分子及其在SLCO2A1基因相关慢性肠病的免疫组化诊断中的应用，提供了一种OATP2A1蛋白的抗体及其抗原结合片段。该抗体特异性高，可用于相关的免疫组化实验，用于鉴别诊断SLCO2A1基因相关慢性肠病（CEAS）。鉴别诊断SLCO2A1基因相关慢性肠病（CEAS）。鉴别诊断SLCO2A1基因相关慢性肠病（CEAS）。

【技术实现步骤摘要】
抗体分子及其在SLCO2A1基因相关慢性肠病的免疫组化诊断中的应用


[0001]本申请涉及生物诊断领域，具体涉及SLCO2A1基因相关慢性肠病（chronic enteropathy associated with SLCO2A1 gene，CEAS）的鉴别诊断。

技术介绍

[0002]有机阴离子转运多肽2A1（organic anion transporting polypeptide 2A1，OATP2A1）由溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员 2A1（solute carrier organic anion transporter family member 2A1，SLCO2A1）基因编码，在人体多种器官和组织均有表达，主要通过介导前列腺素的代谢参与多种生理和病理生理过程。SLCO2A1 基因相关性疾病主要包括原发性肥厚性骨关节病（primary hypertrophic osteoarthropathy，PHO）和 SLCO2A1 基因相关慢性肠病（chronic enteropathy associated with SLCO2A1 gene，CEAS）等。SLCO2A1 基因突变是 PHO 的致病因素之一，患者体内前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）水平的升高导致皮肤和骨质发生相应改变。PGE2在多种组织细胞内被合成并转运至细胞外，与G蛋白耦联的受体家族 EP1
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EP4 结合，进一步激发细胞内多条信号转导途径，从而起到保护胃肠道黏膜的作用。近年来，随着小肠镜和胶囊内镜的推广使用，有学者报道CEAS的特征，但对该病的病因、临床特点及治疗的认识仍然有限。
[0003]2015 年日本学者 Umeno 等首先报道了慢性非特异性多发性溃疡性小肠病患者存在SLCO2A1基因突变，从而将这类肠病命名为 SLCO2A1 基因相关慢性肠病（CEAS）。CEAS比较罕见，其临床特点与其他炎症性肠病有一定的相似之处，但其治疗与预后不同于其他类型的胃肠道疾病，目前关于CEAS的诊断主要依赖基因检测，费用高且耗时长，如何准确且快捷地鉴别诊断和治疗CEAS是消化科医师需要面临的问题。
[0004]人类SLCO2A1基因位于染色体的3q22.1
⁃
q22.2 区，由14个外显子组成，编码一种由643个氨基酸组 成、具有12跨膜结构域的OATP2A1蛋白，又名前列腺素转运体（prostaglandin transporter，PGT）。 OATP2A1主要位于细胞膜，在人体和多种动物的肺、胃肠道、肾、肝、子宫、中枢神经系统、血管内皮等多种组织和器官内广泛表达，主要作用是通过“内流模式”将细胞外间隙的前列腺素（主要是 PGE2）摄取转运至细胞内，进一步被15
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羟前列腺素脱氢酶（15
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hydroxyprostaglandin dehydrogenase，15
ꢀ‑ꢀ
HPGD）降解为15
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oxo
‑
PGE2，此为介导前列腺素失活的关键限速步骤。因此，OATP2A1功能缺失或者受到抑制会导致细胞外前列腺素水平的升高。 OATP2A1在特定条件下还可发挥“外流模式”或“双向模式”，即也可将细胞内的部分前列腺素转运至细胞外，进而发挥炎症调节作用；在动物实验中， OATP2A1可通过“矢量释放”的模式将肺泡上皮的 PGE2 由上皮细胞的顶侧转运至基底侧，进一步发挥作用。
[0005]CEAS是一种可广泛累及胃肠道的常染色体隐性遗传病，可伴发皮肤及骨骼受累，目前尚无特效治疗药物，临床上需注意与其他炎症性胃肠道疾病相鉴别。基因检测有助于明确诊断。但基因检测目前花费较高，临床需要一种更快速、且低成本的检测方法。

技术实现思路

[0006]有文献报道，SLCO2A1蛋白在健康人和CD患者的小肠黏膜可以正常表达，但在CEAS患者的表达则是缺失的。因此本专利技术提供一种SLCO2A1基因相关慢性肠病的免疫组化诊断方法。
[0007]免疫组化诊断方法采用OATP2A1单克隆抗体，其包含可变轻链及可变重链多肽，其中：(a)所述抗体或抗体片段的可变重链(VH)多肽包含由SEQIDNO:1的氨基酸序列组成的VHCDR1、由SEQIDNO:2的氨基酸序列组成的VHCDR2及由SEQIDNO:3的氨基酸序列组成的VHCDR3，且(b)所述抗体或抗体片段的轻链包含可变轻链(VL)多肽，所述可变轻链(VL)多肽包含由SEQIDNO:4的氨基酸序列组成的VLCDR1、由SEQIDNO:5的氨基酸序列组成的VLCDR2及由SEQIDNO:6的氨基酸序列组成的VLCDR3。
[0008]OATP2A1单克隆抗体的重链可变区的序列为SEQIDNO.7所示的氨基酸序列；轻链可变区的为SEQIDNO.8所示的氨基酸序列。
[0009]上述OATP2A1单克隆抗体用于制备诊断CEAS与其他炎症性胃肠道疾病的鉴别诊断的试剂和/或试剂盒中的应用。
[0010]本申请制备了可用于免疫组化的OATP2A1单克隆抗体，该抗体与现有技术中的抗体相比，具有比较高的特异性。
附图说明
[0011]图1.小肠粘膜PGT免疫组化：正常人小肠粘膜血管内皮免疫组化染色阳性（左图），而CEAS患者为阴性（右图）。
具体实施方式
[0012]实施例1：单克隆抗体的制备1.用重组OATP2A1蛋白联合佐剂免疫BALB/c小鼠；免疫完成后，取B细胞构建噬菌体展示库，经过筛选获得候选抗体，利用结构模拟与理性设计，获得一系列抗体，通过大肠杆菌表达，镍柱纯化获得抗OATP2A1单克隆抗体，经过亲和力检测，最终获得抗OATP2A1单克隆抗体anti
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2A1
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08。其重链可变区（VH）、轻链可变区（VL）序列以及CDR如下：VH
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CDR1：VVRHSD(SEQIDNO.1)；VH
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CDR2：EVLVIWNTNLGGGLL(SEQIDNO.2)；VH
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CDR3：GVELQFDD(SEQIDNO.2)；VL
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CDR1：SCPTGGEGYLY(SEQIDNO.4)；VL
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CDR2：TLDKLSS(SEQIDNO.5)；VL
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CDR3：NTRSKETIQ(SEQIDNO.6)；单克隆抗体的VH具有SEQIDNO.7所示的氨基酸序列：“QVFLGTSTKNPYGSNYHPLISKTVWWPIGVVVRHSDNIKQRNDSTFPSYLEVLVIWNTNLGGGLLTTTQACYAKMYSKQISGWTSRQLFRGCRKGVELQFDDDEGSSSNPDST”（SEQIDNO.7）所述单克隆抗体的VL具有SEQIDNO.8所示的氨基酸序列：LGKSLGQDMLIELRLAGKDPSRSSCPTGGEGYLYPQTVTVPGFFVIQTYTLDKLSSDYLGSL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.能够与OATP2A1结合的抗体分子，包含：(a)重链可变区(VH)，其包含SEQ ID NO:1的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；以及（b）轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO:4的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:5的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:6的VLCDR3氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的抗体分子，其包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列。3.根据权利要求1
‑
2中任一项所述的抗体分子，其包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。4.分离的核酸，其编码根据权利要求1
‑
3中任一项所述的抗体分子的抗体重...

【专利技术属性】
技术研发人员：王强，吴晰，李玥，戴依敏，吴东，杨莹韵，杨爱明，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：