一种发酵法制备苦瓜多肽的方法技术

本发明专利技术涉及发酵法制备苦瓜多肽的方法，可有效解决现有制备方法苦瓜多肽得率低，多肽分子量大，多肽不易舌下吸收，制备的多肽复溶率低的问题，方法是，苦瓜籽预处理，米曲霉菌种活化，米曲霉液体培养基扩培；将扩培的菌种接种到苦瓜籽预处理料中，进行发酵，发酵完成后将发酵料干燥，粉碎；采用乙醇溶液提取苦瓜籽多肽，离心收集过滤，蒸馏，获得苦瓜多肽水溶液，加水调整溶液体积，用氨水调pH，离心，取上清液；用酸调pH值，加入无水乙醇，进行沉淀，收集沉淀，烘干得苦瓜多肽。本发明专利技术制备方法科学合理，易操作，使用效果好，产品得率高，分子量易于舌下吸收，不使用有机溶剂丙酮，明显提升产品复溶率，即保证了产品质量，又提高了药用价值。值。

【技术实现步骤摘要】
一种发酵法制备苦瓜多肽的方法


[0001]本专利技术涉及医药，特别是属于天然产物提取
的一种发酵法制备苦瓜多肽的方法。

技术介绍

[0002]糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病。高血糖则是由于胰岛素分泌缺陷或其生物作用受损，或两者兼有引起。糖尿病时长期存在的高血糖，导致各种组织，特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害、功能障碍。近几十年中，全球糖尿病患者的人数以惊人的速度迅速增长。据统计，2007年全球约2.46亿人患有糖尿病，预计到2030年，糖尿病患者将增长到3.8亿，且大部分集中于发展中国家。预计中国受糖尿病影响的人群达到9300万，目前已成为影响中国人身心健康的主要公共卫生问题。2002年中国无并发症Ⅱ型糖尿病的年人均直接医疗成本为13833.3元，全国城市Ⅱ型糖尿病及其并发症的年总成本为233.8亿元，其中，直接医疗成本为187.5亿元，占全国医疗卫生总费用的3.94%，直接非医疗成本为22.8亿元，间接成本为23.5亿元。
[0003]糖尿病给社会和家庭都带来了沉重的经济负担。针对糖尿病的发病机理情况，国外开发的许多西药存在一定的副作用。目前，口服药物主要包括磺脲类、双胍类、α
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葡萄糖苷酶抑制剂、胰岛素分泌促进剂、胰岛素增敏剂等，使用胰岛素，不易控制给药量，且长期使用会产生胰岛素抵抗。α
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葡萄糖苷酶抑制剂最常见的不良反应是肠胃道副作用，如腹部不适、胀气、排气、腹泻等。磺脲类药物常见的不良反应有：食欲减退、恶心、呕吐、腹泻及腹痛等肠胃反应；皮肤瘙痒、红斑、寻麻疹、麻疹样皮疹或斑丘疹等皮肤反应；白细胞减少、粒细胞缺乏、血小板减少、溶血性贫血、再生不良性贫血及全血细胞减少等血液系统疾病；及中毒性肝炎等。使用胰岛素增敏剂药物，如曲格列酮，使心率危险性增加，并且对肝脏具有不同程度的毒性。
[0004]因此，如何进行糖尿病的防治保健，寻找安全、有效的治疗糖尿病的新功能物质，特别是从天然资源中去筛选和研究降糖成分，进行绿色降糖，已成为国内外医药工作者们所关注的重要课题和迫在眉睫的任务。在各种药食同源植物资源中，苦瓜作为一种极具开发潜力和开发价值的植物，引起了食品界和医学界专家们极大的兴趣。
[0005]苦瓜作为世界范围内的广泛种植的药食同源的植物，对其降血糖作用的进一步研究有助于资源的开发，减少患者的经济费用和副作用的发生。苦瓜降糖多肽降糖效果安全、可靠，无毒副作用，但其在肠道极易被降解。目前苦瓜多肽有口含片，其存在舌下吸收较慢，需长时间含服，服药顺应性差的缺点。其主要原因在于在制备方法上存在产品质量差，特别是产品分子量分布大，不易于舌下吸收，生产中使用有机溶剂丙酮，产品复溶率低，因此，苦瓜多肽制备方法的改进和创新势在必行。

技术实现思路

[0006]针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本专利技术之目的就是提供一种发酵法制备
苦瓜多肽的方法，可有效解决现有制备方法苦瓜多肽得率低，多肽分子量大，多肽不易舌下吸收，制备的多肽复溶率低的问题。
[0007]本专利技术解决的技术方案是，一种发酵法制备苦瓜多肽的方法，包括以下步骤：a）苦瓜籽预处理，米曲霉菌种活化，米曲霉液体培养基扩培；所述米曲霉（Aspergillus oryzae）为产纤维素酶和/或脂肪酶和/或蛋白酶的米曲霉菌株（市售产品）；b）将扩培的菌种接种到苦瓜籽预处理料中，进行发酵，发酵完成后将发酵料干燥，粉碎；c）采用乙醇溶液提取苦瓜籽多肽，离心收集过滤，蒸馏，获得苦瓜多肽水溶液，加水调整溶液体积，用氨水调pH，离心，取上清液；d）用酸调pH值，加入无水乙醇，进行沉淀，收集沉淀，烘干得苦瓜多肽。
[0008]本专利技术制备方法科学合理，易操作，使用效果好，产品得率高，分子量易于舌下吸收，不使用有机溶剂丙酮，明显提升产品复溶率，即保证了产品质量，又提高了药用价值。
具体实施方式
[0009]以下结合实施例对本专利技术的具体实施方式作详细说明。
[0010]本专利技术在具体实施中可由以下实施例给出。
[0011]实施例1本专利技术一种发酵法制备苦瓜多肽的方法，包括以下步骤：a）苦瓜籽预处理：将新鲜苦瓜籽料或浸泡后的干苦瓜籽料碾碎成大小为0.5
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1.5mm颗粒，使苦瓜籽的质量含水量为55
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75%，进行米曲霉菌种活化和米曲霉液体培养基扩培；所述的米曲霉菌种活化是，将米曲霉菌种接种于经过无菌验证的土豆培养基的试管斜面或平板中，土豆培养基是，马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂 15~20g，加蒸馏水1000mL制成（公知技术），然后将接种后的斜面或平板在26～30℃下培养72h，得活化米曲霉菌种；所述的米曲霉液体培养基扩培，方法是，取500mL的锥形瓶，添加液体培养基200mL，每升液体培养基中含有苦瓜籽粉10
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30g、蛋白胨50g、苦瓜籽油2
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8mL、硝酸钠2g、磷酸氢二钾1g、氯化钠0.5g和硫酸亚铁0.01g，将液体培养基进行湿热灭菌，灭菌温度121℃，时间为15min；培养基温度降到23
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27℃，移至超净工作台，接入活化米曲霉菌种，在26
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30℃恒温摇床中培养，摇床振荡频率为200r/min，培养时间为36h，得扩培菌种；b）将扩培菌种接种到预处理料的苦瓜籽中，苦瓜籽料与扩培菌种的质量体积比为18
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22︰1 g/mL，质量体积是指固体质量以g计，液体以mL计，进行发酵，温度28
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32℃，湿度85
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95%，发酵48
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72h，发酵期间每8h翻拌一次，再将发酵料干燥，粉碎，得干燥的发酵苦瓜籽粉；c）乙醇溶液提取苦瓜籽多肽，发酵苦瓜籽粉加入质量浓度85%乙醇浸没，22℃下浸泡提取30h，离心、过滤，滤液蒸馏回收乙醇，得固体物，固体物用水悬浮，用氨水调pH 9.7，离心，得上清液；d）调pH值：上清液用1N的盐酸调pH值至3.5，加入等体积的无水乙醇，4℃下放置16小时，得沉淀，沉淀于44℃以下进行真空干燥，干燥后粉碎，过 100 目筛，即得苦瓜多肽，多
肽分子量分布在5
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6kDa。
[0012]实施例2本专利技术一种发酵法制备苦瓜多肽的方法，包括以下步骤：a）苦瓜籽预处理：将新鲜苦瓜籽料或浸泡后的干苦瓜籽料碾碎成大小为0.8
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1.2mm颗粒，使苦瓜籽的质量含水量为60
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70%，进行米曲霉菌种活化和米曲霉液体培养基扩培；所述的米曲霉菌种活化是，将米曲霉菌种接种于经过无菌验证的土豆培养基的试管斜面或平板中，土豆培养基是，马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂 15~20g，加蒸馏水1000mL制成（公知技术），然后将接种后的斜面或平板在27
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29℃下培养72h，得活化米曲霉菌种；所述的米曲霉液体培养基扩培，方法是，取500mL的锥形瓶，添加液体培养基200mL，每升液体培养基中含有苦瓜籽粉15
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种发酵法制备苦瓜多肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：a）苦瓜籽预处理，米曲霉菌种活化，米曲霉液体培养基扩培；所述米曲霉（Aspergillus oryzae）为产纤维素酶和/或脂肪酶和/或蛋白酶的米曲霉菌株；b）将扩培的菌种接种到苦瓜籽预处理料中，进行发酵，发酵完成后将发酵料干燥，粉碎；c）采用乙醇溶液提取苦瓜籽多肽，离心收集过滤，蒸馏，获得苦瓜多肽水溶液，加水调整溶液体积，用氨水调pH，离心，取上清液；d）用酸调pH值，加入无水乙醇，进行沉淀，收集沉淀，烘干得苦瓜多肽。2.根据权利要求1所述的发酵法制备苦瓜多肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：a）苦瓜籽预处理：将新鲜苦瓜籽料或浸泡后的干苦瓜籽料碾碎成大小为0.5
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1.5mm颗粒，使苦瓜籽的质量含水量为55
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75%，进行米曲霉菌种活化和米曲霉液体培养基扩培；所述的米曲霉菌种活化是，将米曲霉菌种接种于经过无菌验证的土豆培养基的试管斜面或平板中，土豆培养基是，马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂 15~20g，加蒸馏水1000mL制成，然后将接种后的斜面或平板在26～30℃下培养72h，得活化米曲霉菌种；所述的米曲霉液体培养基扩培，方法是，取500mL的锥形瓶，添加液体培养基200mL，每升液体培养基中含有苦瓜籽粉10
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30g、蛋白胨50g、苦瓜籽油2
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8mL、硝酸钠2g、磷酸氢二钾1g、氯化钠0.5g和硫酸亚铁0.01g，将液体培养基进行湿热灭菌，灭菌温度121℃，时间为15min；培养基温度降到23
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27℃，移至超净工作台，接入活化米曲霉菌种，在26
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30℃恒温摇床中培养，摇床振荡频率为200r/min，培养时间为36h，得扩培菌种；b）将扩培菌种接种到预处理料的苦瓜籽中，苦瓜籽料与扩培菌种的质量体积比为18
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22︰1 g/mL，质量体积是指固体质量以g计，液体以mL计，进行发酵，温度28
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32℃，湿度85
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95%，发酵48
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72h，发酵期间每8h翻拌一次，再将发酵料干燥，粉碎，得干燥的发酵苦瓜籽粉；c）乙醇溶液提取苦瓜籽多肽，发酵苦瓜籽粉加入质量浓度85%乙醇浸没，22℃下浸泡提取30h，离心、过滤，滤液蒸馏回收乙醇，得固体物，固体物用水悬浮，用氨水调pH 9.7，离心，得上清液；d）调pH值：上清液用1N的盐酸调pH值至3.5，加入等体积的无水乙醇，4℃下放置16小时，得沉淀，沉淀于44℃以下进行真空干燥，干燥后粉碎，过 100 目筛，即得苦瓜多肽，多肽分子量分布在5
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6kDa。3.根据权利要求1所述的发酵法制备苦瓜多肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：a）苦瓜籽预处理：将新鲜苦瓜籽料或浸泡后的干苦瓜籽料碾碎成大小为0.8
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1.2mm颗粒，使苦瓜籽的质量含水量为60
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70%，进行米曲霉菌种活化和米曲霉液体培养基扩培；所述的米曲霉菌种活化是，将米曲霉菌种接种于经过无菌验证的土豆培养基的试管斜面或平板中，土豆培养基是，马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂 15~20g，加蒸馏水1000mL制成，然后将接种后的斜面或平板在27
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29℃下培养72h，得活化米曲霉菌种；所述的米曲霉液体培养基扩培，方法是，取500mL的锥形瓶，添加液体培养基200mL，每升液体培养基中含有苦瓜籽粉15
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25g、蛋白胨50g、苦瓜籽油4
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6mL、硝酸钠2g、磷酸氢二钾1g、氯化钠0.5g和硫酸亚铁0.01g，将液体培养基进行湿热灭菌，灭菌温度121℃，时间为15min；培养基温度降到24
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26℃，移至超净工作台，接入活化米曲霉菌种，在27
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29℃恒温摇
床中培养，摇床振荡频率为200r/min，培养时间为36h，得扩培菌种；b）将扩培菌种接种到预处理料的苦瓜籽中，苦瓜籽料与扩培菌种的质量体积比为20︰1 g/mL，质量体积是指固体质量以g计，液体以mL计，进行发酵，温度30℃，湿度90%，发酵60h，发酵期间每8h翻拌一次，再将发酵料干燥，粉碎，得干燥的发酵苦瓜籽粉；c）乙醇溶液提取苦瓜籽多肽，发酵苦瓜籽粉加入质量浓度85%乙醇浸没，22℃下浸泡提取30h，离心、过滤，滤液蒸馏回收乙醇，得固体物，固体物用水悬浮，用氨水调pH 9.7，离心，得上清液；d）调pH值：上清液用1N的盐酸调pH值至3.5，加入等体积的无水乙醇，4℃下放置16小时，得沉淀，沉淀于44℃以下进行真空干燥，干燥后粉碎，过 100 目筛，制得苦瓜多肽。4.根据权利要求1所述的发酵法制备苦瓜多肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）苦瓜籽预处理：将新鲜苦瓜...

【专利技术属性】
技术研发人员：时凯，
申请(专利权)人：北海开元生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：