一种林可酰胺类抗生素的检测方法技术

本发明专利技术属于分析技术领域，提供了一种林可酰胺类抗生素的检测方法。本发明专利技术的检测方法以内标法结合多反应监测(MRM)

【技术实现步骤摘要】
一种林可酰胺类抗生素的检测方法


[0001]本专利技术涉及分析
，尤其涉及一种林可酰胺类抗生素的检测方法。

技术介绍

[0002]随着我国经济水平的不断提升，水产养殖业也向着多元化和集约化的方向发展。水产养殖经济效益提高的同时，各种水产养殖病害的发生率也日趋严重。因此，为了防控水产养殖过程中疫病的发生，各种渔用投入品的使用已变成常规的养殖辅助手段。不法商家为了追求效益和逃避监管，在渔用投入品(非药品)中违法添加林可酰胺类抗生素时有发生，对我国水产养殖产业和人民生命健康带来了重大安全隐患。
[0003]林可酰胺类抗生素主要包括了克林霉素和林可霉素，对革兰氏阳性菌作用较强，对厌氧菌效果较好，能够与核糖体上的50S核糖体亚基结合，阻断原核翻译的进行，从而使细菌死亡。目前，检测方法主要有三重四级杆质谱法，但是三重四级杆质谱对于一些结构类似的物质不能准确分辨，易造成测定结果假阳性。为了进一步提高林可酰胺类抗生素的检测准确度，飞行时间质谱法被逐渐关注，但是飞行时间质谱仪价格昂贵，导致检测成本高。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种林可酰胺类抗生素的检测方法，本专利技术提供的检测方法的准确度高、检测成本低。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种林可酰胺类抗生素的检测方法，包括以下步骤：
[0007]将含有内标物的待测样品进行超高效液相色谱
‑
三重四极杆复合线性离子阱质谱检测，实现待测样品中林可酰胺抗生素的检测；
[0008]所述超高效液相色谱
‑
三重四极杆复合线性离子阱质谱检测包括超高效液相色谱检测和三重四极杆复合线性离子阱质谱检测；
[0009]所述超高效液相色谱检测的参数包括：
[0010]色谱柱为Infnitylabporoshell SB
‑
C
18
；
[0011]流动相体系包括流动相A和流动相B；
[0012]所述流动相A为体积浓度为0.1％的甲酸水溶液；
[0013]所述流动相B为甲醇；
[0014]所述流动相体系的流速为4.0mL/min：
[0015]流动相洗脱程序：
[0016]0～2min：流动相A的体积分数为95％；
[0017]2～5min：流动相A的体积分数由95％匀速变为75％；
[0018]5～6min：流动相A的体积分数由75％匀速变为20％；
[0019]6～7min：流动相A的体积分数由20％匀速变为95％；
[0020]7～10min：流动相A的体积分数为95％；
[0021]进样量为10μL；
[0022]柱温为25～40℃；
[0023]所述三重四极杆复合线性离子阱质谱检测包括：电喷雾正离子电离模式、多反应监测、信息关联采集和增强离子扫描；
[0024]所述电喷雾正离子电离模式的参数包括：离子化电压为5000～5500V；离子源温度为500～550℃；气帘气为30～35L/min；雾化气为55～60L/min；辅助加热气为55～60L/min；
[0025]所述多反应监测的参数见表1：
[0026]表1多反应监测的参数
[0027]；
[0028][0029]所述信息关联采集的参数包括：扫描范围为100～500Da，触发二级扫描的离子强度阈值为800～1200cps，动态背景扣除开启；
[0030]所述增强离子扫描的参数包括：扫描类型为Enhanced Product ion，正离子模式，EPI碰撞能量为40
±
20eV；
[0031]所述内标物为咖啡因
‑
13
C或林可霉素
‑
13
C
‑
D3盐酸盐。
[0032]优选地，所述含有内标物的待测样品中内标物的浓度为100ng/mL。
[0033]优选地，所述待测样品包括水产品待测样品或水待测样品。
[0034]优选地，所述水产品待测样品的获取方法包括以下步骤：
[0035]将待测水产品、内标物和提取剂混合，进行提取，得到提取液；
[0036]将所述提取液蒸干后复溶，得到所述水产品待测样品。
[0037]优选地，所述提取剂为乙腈、甲醇或丙酮；所述待测水产品和提取剂的用量比为2.0g：15～25mL。
[0038]优选地，所述水待测样品的获取方法包括以下步骤：
[0039]将待测废水过滤，在所得滤液中加入内标物后调节pH值为酸性，得到酸性滤液；
[0040]将所述酸性滤液过HLB固相萃取柱进行富集，得到富集液；
[0041]将所述富集液蒸干后复溶，得到所述水待测样品。
[0042]优选地，所述酸性的pH值为3.0～6.0。
[0043]优选地，所述富集的过程包括：将所述酸性滤液过HLB固相萃取柱后，依次用超纯
水和洗脱剂淋洗HLB固相萃取柱，收集洗脱剂洗脱液作为所述富集液。
[0044]优选地，所述洗脱剂为甲醇或氨水甲醇溶液；所述氨水甲醇溶液中氨水和甲醇的体积比为5:95或10:90；所述氨水的质量浓度为25％～28％。
[0045]优选地，所述超高效液相色谱
‑
三重四极杆复合线性离子阱质谱检测包括定量检测和定性检测；所述定量检测的标准曲线为浓度
‑
峰面积比值标准曲线；所述定量检测的标准曲线中，峰面积比值为化合物母离子峰面积和内标物峰面积的比值。
[0046]本专利技术提供了一种林可酰胺类抗生素的检测方法，包括以下步骤：将含有内标物的待测样品进行超高效液相色谱
‑
三重四极杆复合线性离子阱质谱检测，实现待测样品中林可酰胺抗生素的检测；所述超高效液相色谱
‑
三重四极杆复合线性离子阱质谱检测包括超高效液相色谱检测和三重四极杆复合线性离子阱质谱检测；所述三重四极杆复合线性离子阱质谱检测包括：电喷雾正离子电离模式、多反应监测(MRM)、信息关联采集(IDA)和增强离子扫描(EPI)。在本专利技术中，采用MRM
‑
IDA
‑
EPI检测模式，检测出的疑似阳性样品，通过色谱峰、保留时间、离子峰度比及筛查EPI数据库进行对比分析，然后采用标准添加法对阳性组分进行定量分析，提高了检测准确度。相比飞行时间质谱方法，本专利技术提供的检测方法的检测成本低。
附图说明
[0047]图1为浓度为20ng/mL的标准工作液(同位素内标物的浓度为100ng/mL)中林可霉素、吡利霉素和克林霉素的选择性离子流色谱图；
[0048]图2为林可霉素EPI质谱图；
[0049]图3为吡利霉素EPI质谱图；
[0050]图4为克林霉素EPI质谱图；
[0051]图5为阳性河蟹样品EPI图；...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种林可酰胺类抗生素的检测方法，包括以下步骤：将含有内标物的待测样品进行超高效液相色谱
‑
三重四极杆复合线性离子阱质谱检测，实现待测样品中林可酰胺抗生素的检测；所述超高效液相色谱
‑
三重四极杆复合线性离子阱质谱检测包括超高效液相色谱检测和三重四极杆复合线性离子阱质谱检测；所述超高效液相色谱检测的参数包括：色谱柱为Infnitylab poroshell SB
‑
C
18
；流动相体系包括流动相A和流动相B；所述流动相A为体积浓度为0.1％的甲酸水溶液；所述流动相B为甲醇；所述流动相体系的流速为4.0mL/min：流动相洗脱程序：0～2min：流动相A的体积分数为95％；2～5min：流动相A的体积分数由95％匀速变为75％；5～6min：流动相A的体积分数由75％匀速变为20％；6～7min：流动相A的体积分数由20％匀速变为95％；7～10min：流动相A的体积分数为95％；进样量为10μL；柱温为25～40℃；所述三重四极杆复合线性离子阱质谱检测包括：电喷雾正离子电离模式、多反应监测、信息关联采集和增强离子扫描；所述电喷雾正离子电离模式的参数包括：离子化电压为5000～5500V；离子源温度为500～550℃；气帘气为30～35L/min；雾化气为55～60L/min；辅助加热气为55～60L/min；所述多反应监测的参数见表1：表1多反应监测的参数表1多反应监测的参数
所述信息关联采集的参数包括：扫描范围为100～500Da，触发二级扫描的离子强度阈值为800～1200cps，动态背景扣除开启；所述增强离子扫描的参数包括：扫描类型为Enhanced Product ion，正离子模式，EPI碰撞能量为40
±
20eV；所述内标物为咖啡因
‑
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【专利技术属性】
技术研发人员：孟勇，朱晓华，葛家春，杨洪生，刘崇万，马行空，夏莉萍，徐志华，耿雪冰，张秋云，任娣，葛筱琴，胡月，
申请(专利权)人：江苏省淡水水产研究所，
类型：发明
国别省市：