一种基于双链DNA重组工程的细菌基因组多重编辑方法及其应用技术

本发明专利技术属于因工程技术领域，具体涉及一种细菌基因组多重编辑方法及其应用。基于双链DNA重组工程的细菌基因组多重编辑方法，包括：（1）将靶向不同靶标序列的dsDNA底物混合后导入到带有重组酶质粒的宿主感受态细胞内；（2）将感受态细胞在低于最适生长温度的温度下复苏；复苏过程中添加终浓度为10 nM的dNTPs；（3）对复苏后的感受态细胞筛选出带有标记的单菌落，进行鉴定。本发明专利技术的方法具有底物制备成本低、插入基因长度无限制、非双链DNA断裂依赖、无需构建多个引导RNA表达载体、无需对宿主菌细菌的限制性修复系统进行失活等优点。细菌的限制性修复系统进行失活等优点。细菌的限制性修复系统进行失活等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种基于双链DNA重组工程的细菌基因组多重编辑方法及其应用


[0001]本专利技术属于因工程
，具体涉及一种细菌基因组多重编辑方法及其应用。

技术介绍

[0002]细菌基因组的解析和编辑是基础生物学和应用生物学研究的关键。需要精确和高效的基因组编辑技术来更好地理解性状的遗传基础，并开发高度工程化的微生物细胞工厂来获取有价值的物质。多重基因组编辑能够同时修改多个基因组位点，极大地促进了基因组多样性的创造，加速了定向进化。多重基因组编辑需要借助精确和高效的基因组编辑技术来更好地理解性状的遗传基础，并开发高度工程化的微生物细胞工厂来获取有价值的物质。CRISPR
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Cas 系统和单链DNA(single
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stranded DNA,ssDNA)重组工程这两项关键技术已被广泛应用于细菌基因组的高效多重编辑。这些方法极大地加快了细菌基因组多重精确靶向修饰的应用，促进了菌株工程用于生物制造和工业重要产品的生产优化。然而，这两种方法都有其局限性。
[0003]CRISPR
‑/>Cas系统的Ca本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于双链DNA 重组工程的细菌基因组多重编辑方法，其特征在于，包括：（1）将靶向不同靶标序列的dsDNA 底物混合后导入到带有重组酶质粒的宿主感受态细胞内；（2）将感受态细胞在低于最适生长温度的温度下复苏；复苏过程中添加终浓度为10 nM的 dNTPs；（3）对复苏后的感受态细胞筛选出带有标记的单菌落，进行鉴定。2.根据权利要求1所述的基于双链DNA 重组工程的细菌基因组多重编辑方法，其特征在于，所述步骤（2）中，复苏时间为1
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4小时。3.根据权利要求1所述的基于双链DNA 重组工程的细菌基因组多重编辑方法，其特征在于，添加的dNTPs 中GC含量与宿主基因组GC含量相近或者相同。4.根据权利要求2所述的基于双链DNA 重组工程的细菌基因组多重编辑方法，其特征在于，所述宿主为E.coli GB2005，在30 ℃下复苏时间为1小时；或者，所述宿主为Schlegelella brevitalea DSM7029或Paraburkholderia. megapolitana DSM 23488，在22 ℃下复苏4小时；或者，所述宿主为Pseudomonas. putida KT2440，在22 ℃下复苏1小时；或者，所述宿主为P. syringae DC3000，在...

【专利技术属性】
技术研发人员：卞小莹，王雪，郑文韬，涂强，张友明，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：