本发明专利技术公开了一种槲皮素在制备治疗椎间盘髓核退变药物中的应用。经试验证明，槲皮素有明显的保护髓核细胞损伤的作用。在100μM TBHP的大鼠髓核细胞凋亡模型中，槲皮素可以明显减弱TBHP造成的髓核细胞损伤，维持髓核细胞的正常形态和功能；槲皮素对髓核细胞毒性较小，在200μM以内几乎没有细胞毒性；槲皮素可以显著缓解TBHP诱导的大鼠髓核细胞氧化应激、退变和凋亡；本发明专利技术开发了槲皮素的新用途，提高了槲皮素的使用价值，为槲皮素在制备防止椎间盘退变的药物中的应用提供了理论支持。间盘退变的药物中的应用提供了理论支持。间盘退变的药物中的应用提供了理论支持。
【技术实现步骤摘要】
槲皮素在制备治疗椎间盘髓核退变药物中的应用
[0001]本专利技术属于药物新用途
，具体地说，涉及一种槲皮素在制备治疗椎间盘髓核退变药物中的应用。
技术介绍
[0002]椎间盘退变(intervertebral disc degeneration，IVDD)是现代社会引起人们腰背痛(Low back pain，LBP)的主要原因之一，并且给人的生理、心理和经济带来严重的负担。早期的研究主要集中于生物力学方向和炎症病理等方向，近年来学者们开始关注髓核能量代谢和生物钟节律与退变发生的联系。尽管目前对于IVDD发生的机制研究很多，也取得了很多的进展，但具体机制仍不十分明确。目前临床上非手术治疗的疗效并不明确，大多数患者后期仍需行髓核摘除手术，手术不可避免的具有一定创伤性，因此如何有效地防治IVDD已成为脊柱外科领域的一个重要课题。
[0003]槲皮素(quercetin，QUE)广泛应用于抗炎、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤等领域，在运动系统中被应用于骨关节炎的治疗探索。作为天然植物提取物，槲皮素的获取和利用比较容易，被广泛应用于疾病的预防和治疗。然而对于椎间盘，尤其是髓核细胞的退变，应用槲皮素防止椎间盘髓核的退变，目前尚未见有相关报道。
技术实现思路
[0004]本专利技术的目的在于提供槲皮素在制备治疗椎间盘髓核退变药物中的应用，从而为预防和治疗椎间盘髓核退变提供了一种新途径。
[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术公开了的技术方案为：
[0006]槲皮素在制备治疗椎间盘髓核退变药物中的应用。
[0007]优选地，槲皮素具有缓解大鼠椎间盘髓核细胞退变和凋亡的作用。
[0008]一种治疗椎间盘髓核退变药物的药物制剂，包括槲皮素。
[0009]优先地，药物制剂为冻干剂、片剂、颗粒剂或胶囊剂。
[0010]与现有技术相比，本专利技术可以获得包括以下技术效果：
[0011]1)经试验证明，槲皮素具有明显的保护髓核细胞损伤的作用。在100μM叔丁基过氧化氢(TBHP)的大鼠髓核细胞凋亡模型中，槲皮素(QUE)可以明显减弱TBHP造成的髓核细胞损伤，维持髓核细胞的正常形态和功能；
[0012]2)槲皮素对髓核细胞毒性较小，在200μM以内几乎没有细胞毒性；
[0013]3)槲皮素可以显著缓解TBHP诱导的大鼠髓核细胞氧化应激、退变和凋亡，最佳使用剂量为60μM；
[0014]4)本专利技术开发了槲皮素的新用途，提高了槲皮素的使用价值，为槲皮素在制备防止椎间盘退变的药物中的应用提供了理论支持。
附图说明
[0015]此处所说明的附图用来提供对本专利技术的进一步理解，构成本专利技术的一部分，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中：
[0016]图1是不同浓度的槲皮素的细胞毒性试验结果；
[0017]图2是不同浓度的TBHP对细胞数量和活性的损伤模型；
[0018]图3是不同浓度的槲皮素对大鼠髓核细胞的治疗作用；
[0019]图4是槲皮素浓度为0、15、30、60μM时，大鼠髓核细胞培养24小时后的细胞形态图；
[0020]图5是槲皮素浓度为0、15、30、60μM时，大鼠髓核细胞培养24小时后的细胞生长迁移能力图；
[0021]图6是大鼠髓核细胞内活性氧的产生情况，其中A为Control组，B为TBHP组，C为TBHP+QUE组；
[0022]图7是大鼠髓核细胞的凋亡情况，其中A为Control组，B为TBHP组，C为TBHP+QUE组；
[0023]图8是大鼠髓核细胞的退变情况，其中A为Control组，B为TBHP组，C为QUE组；
[0024]图9为采用槲皮素治疗后大鼠椎间盘组织的形态结构图，其中A为Control组，B为模型组，C为治疗组。
具体实施方式
[0025]下面结合具体实施例来进一步描述本专利技术，但实施例仅是范例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围内。
[0026]1、槲皮素(quercetin，QUE)用于治疗椎间盘髓核的退变。
[0027]2、运用叔丁基过氧化氢(TBHP)100μM处理大鼠髓核细胞，制作TBHP诱导的氧化应激损伤模型。通过CCK8实验，验证槲皮素在60μM的最佳治疗效果。最终通过大鼠椎间盘器官培养模型，将离体椎间盘分别培养在单纯含血清培养基、含100μM TBHP培养基和添加60μM槲皮素和100μM TBHP培养基中，验证槲皮素的体内治疗效果。
[0028]第一部分：槲皮素治疗大鼠椎间盘髓核细胞退变的浓度的筛选
[0029](1)槲皮素的细胞毒性试验
[0030]槲皮素对大鼠髓核细胞的毒性试验采取CCK8的方法，具体如下：将大鼠髓核细胞按5
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103/孔接种于96孔板，在37℃，5％CO2的恒温细胞培养箱中培养至密度约70％，在EP管中用含10％胎牛血清(FBS)的DF12培养基将槲皮素稀释至不同的浓度梯度，分别添加在96孔板内，每孔加入溶液200μL，培养24小时。吸出孔内的槲皮素溶液，每孔加入含CCK8工作液的培养基110μL(其中CCK8原液10μL)，培养箱中继续孵育4小时，采用多功能酶标仪检测450nm处的吸光值，计算细胞活力值，细胞活力％＝(测试孔OD-空白OD/对照孔OD-空白OD)
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100，通过与0μM组的比值计算，分析细胞活力受影响程度，进而判断药物的毒性作用。
[0031]由图1可知，槲皮素对髓核细胞毒性较小，在200μM以内几乎没有细胞毒性。
[0032](2)TBHP损伤模型的建立
[0033]叔丁基过氧化氢(TBHP)可以提供大量的活性氧，并且在溶液中相对稳定，可以作为大鼠髓核细胞有效的氧化应激损伤模型试剂。
[0034]通过CCK8的活性分析，将大鼠髓核细胞按5
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103/孔接种于96孔板，在37℃，5％CO2的恒温细胞培养箱中培养至密度约70％，在EP管中用含10％FBS的DF12培养基将TBHP稀释至不同的浓度梯度，分别添加在96孔板内，每孔加入溶液200μL，培养24小时。其余操作与前述相同，最后通过与未添加TBHP的0μM组做对比，确定100μM浓度TBHP是合适的模型浓度。具体模型如图2所示。
[0035](3)槲皮素最佳治疗浓度的确定
[0036]运用上述筛选的100μM的TBHP损伤模型试验槲皮素的治疗作用。
[0037]实验分为Control组(仅加培养基)以及含100μM的TBHP和不同浓度的槲皮素的治疗，其中0μM组即单纯的TBHP模型组。
[0038]运用CCK8的方法进行治疗筛选。将大鼠髓核细胞按5
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103/孔接种于96孔板，在37℃，5本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.槲皮素在制备治疗椎间盘髓核退变药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述槲皮素具有缓解大鼠椎间盘髓核细胞退变和凋亡的作用。3.一种治疗椎间盘髓核退...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨柳，王栋，罗卓荆，贺欣，彭盼睇，徐小龙，高博，
申请(专利权)人：中国人民解放军空军军医大学，
类型：发明
国别省市：
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