一种噬菌体裂解酶结合BLI快速检测S.aureus的方法技术

本发明专利技术提供一种噬菌体裂解酶结合BLI快速检测S.aureus的方法，涉及金黄色葡萄球菌检测技术领域，解决了S.aureus传统检测方法步骤多、操作繁琐、耗时长的问题。包括以下步骤：一是传感器活化，二是裂解酶的固定化，三是将AR2G传感器封闭，四是样品检测及结果判断。本发明专利技术操作简单、实时监测、无标记、结果易得；实现样品随到随检，可以在较短的时间完成样品中目标菌的识别检测，根据样品中所含金黄色葡萄球菌浓度的不同，单纯的样品检测时间可以控制在数十秒到十几分钟之内；裂解酶对目标菌可以特异的识别，保证该方法的特异性，排除非目标菌的潜在干扰；通过信号曲线有无峰的出现可以进行死活菌的区分；裂解酶易于获得，方便制备。方便制备。方便制备。

【技术实现步骤摘要】
一种噬菌体裂解酶结合BLI快速检测S.aureus的方法


[0001]本专利技术属于金黄色葡萄球菌检测
，更具体地说，特别涉及一种噬菌体裂解酶结合BLI快速检测S.aureus的方法。

技术介绍

[0002]金黄色葡萄球菌(S.aureus)是自然界普遍存在的一种革兰氏阳性菌，是一种常见的食源性病原体，对食品加工业和人类健康有潜在危害。此外，它营养需求低，对不利环境有很强的抵抗力，可引起人类和动物传染病。因此，采用快速准确的检测方法检测S.aureus，可以大大减少食物中毒事件的发生。
[0003]传统的S.aureus检测方法存在周期长、操作复杂等缺点，难以满足实际需要。随着分子生物学技术的不断发展，多种基于核酸检测的方法被应用于食源性病原体的检测，其中经典的聚合酶链反应(PCR)在快速、高灵敏度和强特异性方面显示出显著优势。然而，除了需要严格的温度控制措施、熟练的技术人员和昂贵的实验室设备外，经典PCR还经常受到外源污染物的干扰从而引起假阳性结果；此外，经典PCR不能区分死活菌。
[0004]因此，快速便捷、灵敏准确、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种噬菌体裂解酶结合BLI快速检测S.aureus的方法，其特征在于：包括以下步骤：1)、传感器活化：将AR2G传感器的末端浸入蒸馏水中预湿至少十分钟后，浸入40mM的1
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乙基
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(3
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二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和20mM的N
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羟基琥珀酰亚胺混合活化试剂中活化150
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450秒；2)、裂解酶的固定化：将活化后的AR2G传感器浸入用pH4
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6的醋酸
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醋酸钠缓冲溶液稀释的浓度为12.5
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100μg/mL的突变的LysGH15中进行固定化600
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900秒；3)、封闭：裂解酶固定化后，将AR2G传感器依次浸入1M乙醇胺盐酸盐溶液和1％牛血清白蛋白溶液中封闭150
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450秒；4)、样品检测及结果判断：将已封闭的AR2G传感器浸入含有0.02％吐温
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20的磷酸盐缓冲溶液中平衡150
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450秒，然后将其浸入样品中进行S.aureus的检测，实时读取结合信号；对于定性分析，当结合信号值大于等于仪器的有效信号值0.0075nm即可判定样品中存在S.aureus；对于定量分析，将结合时间为3分钟、6分钟、9分钟和12分钟的结合信号值y分别代入菌浓度和结合信号间的数学公式(1)、(2)、(3)、(4)，求解所得的浓度即为样品中S.aureus的具体浓度，通过多组数据进行对比，保证最终数据的可信度。2.如权利要求1所述一种噬菌体裂解酶结合BLI快速检测S.aureus的方法，其特征在于：步骤1)中具体活化时间设置为200
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300秒。3.如权利要求1所述一种噬菌体裂解酶结合BLI快速检测S.aureus的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾敬敏，刘潇，张晓光，韩文瑜，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：