一种结核分枝杆菌MTB39A蛋白抗体间接ELISA检测方法及其试剂盒技术

本发明专利技术涉及一种结核分枝杆菌MTB39A(PPE18)蛋白抗体间接ELISA检测方法及其试剂盒，该方法及试剂盒针对MTB39A(PPE18)蛋白抗体具有特异性强、灵敏度高、稳定性良好等优势。稳定性良好等优势。稳定性良好等优势。

【技术实现步骤摘要】
一种结核分枝杆菌MTB39A蛋白抗体间接ELISA检测方法及其试剂盒


[0001]本专利技术涉及抗体检测领域，特别是涉及一种结核分枝杆菌MTB39A蛋白抗体间接ELISA检测方法，以及根据该检测方法制备的检测试剂盒。

技术介绍

[0002]结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)是引起结核病(tuberculosis，TB)的病原体，也是单一感染微生物导致死亡的最重要原因，是一类世界性的人兽共患传染病，一直受到国内外研究者的普遍关注。
[0003]该菌的致病物质主要是荚膜，脂质以及蛋白质；1999年，Corixa Corporation公司克隆了一个新基因—MTB 39A(PPE18)，该蛋白分子量为39kD，等电点为4.8088。免疫印迹分析证明MTB 39A(PPE18)在结核分枝杆菌的裂解物中，表明它不是分泌性抗原。纯化的重组MTB 39A(PPE18)在12名PPD(结核菌素)阳性个体中的9名外周血单核细胞中引发了强烈的T细胞增殖和γ干扰素反应。
[0004]目前多项研究均认为，MTB本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种结核分枝杆菌MTB39A蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括MTB 39A蛋白，酶标山羊抗兔IgG，洗涤液，包被液，封闭液，显色液和终止液；所述MTB 39A蛋白序列如SEQ ID NO:1所示。2.根据权利要求1所述的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述MTB 39A蛋白包被浓度为0.25
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2.5μg/mL。3.根据权利要求1
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2任意一项所述的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述酶标山羊抗兔IgG为HRP
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山羊抗兔IgG。4.根据权利要求3所述的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述HRP
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山羊抗兔IgG稀释比例为1:1000
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8000。5.根据权利要求1
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4所述任意一项的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述洗涤液为PBST；所述包被液为Na2CO3/NaHCO3缓冲液；所述封闭液为BSA或脱脂奶粉。6.一种结核分枝杆菌MTB39A蛋白抗体间接ELISA检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)抗原包被，所述包被抗原为重组结核分枝杆菌MTB 39A蛋白，其蛋白序列如SEQ ID NO:1所示；(2)洗涤液洗板，加入封闭液封闭；(3)洗涤液洗板，加入待测抗体或待测血清，以及阴性对照；(4)洗涤液洗板，加入酶标山羊抗兔IgG作为二抗；(5)洗涤液洗板，加入显色液；(6)加入终止液，测定OD450nm数值；(7)结果判断：当样品OD450nm值>X+3SD时，判定为阳性；OD450nm值<X+2SD时，判定为阴性；介于二者之间时，判为可疑。7.根据权利要求6所述的间接ELISA检测方法，其特征在于：步骤(1)抗原包被是以包被液稀释包被抗原至0.25
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2.5μg/mL，96孔酶标板中以100μL/孔进行包被，所述包被液为0.85M Na2CO3/NaHCO3缓冲液，pH值为9.6；步骤(2)所述封闭液为5％BSA；封闭孵育时间为30

【专利技术属性】
技术研发人员：李勇，王玉炯，蔡玉荣，王璞，曾瑾，张思浓，王盛，
申请(专利权)人：宁夏大学，
类型：发明
国别省市：