一种基于高效毛细管电泳鉴别卵孢长根菇出菇表型的方法技术

本发明专利技术提供了一种基于高效毛细管电泳鉴别卵孢长根菇出菇表型的方法，包括如下步骤：将样品溶液进行毛细管电泳，电泳条件为：未涂层石英毛细管有效检测长度48

【技术实现步骤摘要】
一种基于高效毛细管电泳鉴别卵孢长根菇出菇表型的方法


[0001]本专利技术属于化学领域，尤其是涉及一种基于高效毛细管电泳鉴别卵孢长根菇出菇表型的方法。

技术介绍

[0002]现有技术中关于食用菌指纹图谱测定方法比较常用的是液相色谱方法，但是该方法需要用到色谱柱需要经常的维护，成本高，并且全程使用有机溶剂，在测定过程中溶剂挥发会影响操作者的健康，测定结束后的有机废液也需要特殊处理，但排放的过程也会有污染。本专利技术提供的卵孢长根菇毛细管电泳出菇表型鉴别测定方法，毛细管运行过程中不需要有机溶剂，缓冲液为无机盐溶液，没有挥发性可以减少有机溶剂的污染，对人和环境都比较友好。
[0003]液相色谱需要的上样量比较大，且样品处理比较复杂，若样品的粘稠度过高经常堵塞色谱柱。而有的食用菌野生的资源采集的样本量比较少，经常达不到液相色谱的上样条件，这样对食用菌品种的有效成分的测定就不全面。
[0004]毛细管电泳技术(HPCE)源自传统电泳技术，是传统电泳技术和现代微柱分离技术相结合的产物，在医药，食品等一些活性物质的测定上发挥出一定的作用；毛细管电泳一次进样量是微克级别，一般食用菌都可以达到，对于一些比较珍贵的样本可行性更高。
[0005]卵孢长根菇是可人工栽培的珍稀菌类，目前，已成为我国可商业化栽培的食用菌之一，有的冠之以“黑鸡枞”的商品名称上市销售，以提高售价。在研究中发现卵孢长根菇子实体形态一种近球形，无绒毛，颜色浅；另一种子实体形态细长，有绒毛，颜色深。有关利用毛细管电泳技术鉴别卵孢长根菇出菇表型的研究与应用报道较少。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术旨在克服现有技术中的缺陷，提出一种基于高效毛细管电泳鉴别卵孢长根菇出菇表型的方法。
[0007]为达到上述目的，本专利技术的技术方案是这样实现的：
[0008]一种基于高效毛细管电泳鉴别卵孢长根菇出菇表型的方法，包括如下步骤：将样品溶液进行毛细管电泳，电泳条件为：未涂层石英毛细管有效检测长度48
‑
60cm；检测波长为190
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225nm；分离电压为25
‑
30kV；温度为20
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25℃；压力0.5
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0.8psi进样3
‑
5s，运行缓冲液为20
‑
25mmol/L硼砂缓冲液与20
‑
25mmol/L柠檬酸钠缓冲液；运行时间为30
‑
35min，得到指纹图谱。
[0009]进一步，所述的样品溶液的处理方法如下：将不同出菇表型的卵孢长根菇活化后进行培养，将得到的菌丝体进行过滤、冲洗、烘干、粉碎后得到菌粉，在菌粉中加入15
‑
30倍量的超纯水，超声、过滤后得到一次上清液，在得到的菌渣中加入15
‑
30倍量的超纯水进行超声提取得到二次上清液，将上清液合并膜过滤后得到样品溶液。
[0010]进一步，所述的培养步骤的培养基为PDA培养基，温度为22
‑
25℃，140
‑
160r/min摇
床培养7
‑
9d。
[0011]进一步，所述的超声步骤的时间为20
‑
30min；所述的超声提取的时间为15
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30min；所述的膜过滤步骤采用0.22μm孔径的水系滤膜。
[0012]进一步，所述的卵孢长根菇HPCE指纹图谱包括9个特征峰，1
‑
9号特征峰的保留时间分别为8.829
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9.088min，11.804
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12.233min，13.346
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14.163min，13.887
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14.779min，15.950
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17.175min，16.758
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17.467min，17.375
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21.567min，22.208
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23.058min，23.767
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24.958min。
[0013]进一步，所述的卵孢长根菇的球形子实体与细长形子实体的HPCE指纹图谱的差异在于：所述的卵孢长根菇的球形子实体的HPCE指纹图谱中16
‑
19min的特征峰为“W”形的三联差异峰。
[0014]对其进行了DNA分子鉴定均为卵孢长根菇。对收集的有代表性的5种长根菇进行毛细管电泳分析，得到的结果与DNA和形态鉴定一致，发现一种基于高效毛细管电泳鉴别卵孢长根菇子实体表型的方法。
[0015]相对于现有技术，本专利技术具有以下优势：
[0016]本专利技术所述的基于高效毛细管电泳鉴别卵孢长根菇出菇表型的方法通过“W”形的三联差异峰作为鉴别卵孢长根菇不同子实体出菇表型的关键指示峰，为后期卵孢长根菇野生驯化和杂交育种后的出菇菌种的筛选和鉴定提供新的方法。
[0017]本专利技术所述的基于高效毛细管电泳鉴别卵孢长根菇出菇表型的方法在毛细管运行过程中不需要有机溶剂，缓冲液为无机盐溶液，没有挥发性可以减少有机溶剂的污染，对人和环境都比较友好。
[0018]食用菌野生的资源采集的样本量比较少，经常达不到液相色谱的上样条件，这样对食用菌品种的有效成分的测定就不全面。本专利技术所述的基于高效毛细管电泳鉴别卵孢长根菇出菇表型的方法可以减少这一现象。毛细管电泳一次进样量是微克级别，一般食用菌都可以达到，对于一些比较珍贵的样本可行性更高。
附图说明
[0019]图1为本专利技术实施例1
‑
5所述的卵孢长根菇的指纹图谱；
[0020]图2为本专利技术实施例6
‑
10所述的卵孢长根菇的指纹图谱；
[0021]图3为本专利技术实施例1
‑
5所述的卵孢长根菇的成分3D图谱：3
‑
A为H1，3
‑
B为H2，3
‑
C为H3，3
‑
D为H4，3
‑
E为H5；
[0022]图4为本专利技术实施例6
‑
10所述的卵孢长根菇的成分3D图谱：4
‑
A为H6，4
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B为H7，4
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C为H8，4
‑
D为H9，4
‑
E为H10；
[0023]图5为本专利技术实施例1
‑
5所述的卵孢长根菇的聚类分析结果；
[0024]图6为本专利技术实施例所述的卵孢长根菇的近柱状子实体的结构图；
[0025]图7为本专利技术实施例所述的卵孢长根菇的近球形子实体的结构图。
具体实施方式
[0026]除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本专利技术所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述
实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于高效毛细管电泳鉴别卵孢长根菇出菇表型的方法，其特征在于：包括如下步骤：将样品溶液进行毛细管电泳，电泳条件为：未涂层石英毛细管有效检测长度48
‑
60cm；检测波长为190
‑
225nm；分离电压为25
‑
30kV；温度为20
‑
25℃；压力0.5
‑
0.8psi进样3
‑
5s，运行缓冲液为20
‑
25mmol/L硼砂缓冲液与20
‑
25mmol/L柠檬酸钠缓冲液；运行时间为30
‑
35min，得到指纹图谱。2.根据权利要求1所述的基于高效毛细管电泳鉴别卵孢长根菇出菇表型的方法，其特征在于：所述的样品溶液的处理方法如下：将不同出菇表型的卵孢长根菇活化后进行培养，将得到的菌丝体进行过滤、冲洗、烘干、粉碎后得到菌粉，在菌粉中加入15
‑
30倍量的超纯水，超声、过滤后得到一次上清液，在得到的菌渣中加入15
‑
30倍量的超纯水进行超声提取得到二次上清液，将上清液合并膜过滤后得到样品溶液。3.根据权利要求2所述的基于高效毛细管电泳鉴别卵孢长根菇出菇表型的方法，其特征在于：所述的培养步骤的培养基为PDA培养基，温度为22
‑
25℃，140
‑
160r/min摇床培养7
‑
9d。4.根据权利要求2所述的基于高效毛细管电泳鉴别卵孢长...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚娜，刘国丽，马晓颖，陈珣，杨光，马跃，肖军，肇莹，王岩，赵宸，
申请(专利权)人：辽宁省农业科学院，
类型：发明
国别省市：