检测FBN1基因突变位点c.G3901T的试剂在制备诊断马凡综合征试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术涉及检测FBN1基因突变位点c.G3901T的试剂在制备诊断马凡综合征的试剂盒中的应用，属于诊断试剂技术领域。本发明专利技术通过进行基因检测可及时对患者作出明确诊断，改变马凡综合征患者治疗策略，并有助于确定可能受累的家庭成员，改变患者的随访频率。本发明专利技术受基金项目：国家自然科学基金项目(81974042)；临床与转化医学研究基金项目(2019

【技术实现步骤摘要】
检测FBN1基因突变位点c.G3901T的试剂在制备诊断马凡综合征试剂盒中的应用


[0001]本专利技术涉及诊断试剂
，具体涉及检测FBN1基因突变位点 c.G3901T的试剂在制备诊断马凡综合征的试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]马凡综合征(Marfan syndrome，MFS)是一种遗传性结缔组织病，最常见的遗传方式为常染色体显性遗传。MFS的临床表现轻重不一，部分患者仅表现出MFS的单一特征，而部分病情较重的患者在新生儿期即出现累及多个器官系统的严重且快速进展的病变。
[0003]马凡综合征的累及范围包括眼部、心血管、肌肉骨骼、肺部、皮肤和中枢神经系统。主动脉根部疾病是MFS患者出现并发症和死亡的主要原因。它会引起动脉瘤样扩张、主动脉瓣关闭不全和主动脉夹层，严重者可出现主动脉瘤破裂，造成患者死亡。在心脏结构病变方面，MFS患者常伴有二尖瓣脱垂，如未及时处理则可导致心力衰竭的发生。MFS个体还存在过度的长骨线性生长和关节松弛，且50％～80％的MFS患者存在晶状体异位。
[0004]目前已知的与MFS发病相关的基因主要为FBN1及TGFBR。FBN1位于第15号染色体，含65个外显子，负责编码原纤维蛋白
‑
1蛋白。原纤维蛋白
‑
1是弹性组织和非弹性组织的一种重要基质成分，是细胞外微原纤维的主要构成蛋白。而细胞外微原纤维则促进了弹力纤维的形成和维持。
[0005]自20余年前首次报告FBN1基因的突变可导致MFS以来，FBN1通用突变数据库已登记了1800余种与该蛋白质相关的不同突变。作为一种常染色体遗传病，诊疗机构可通过已知的突变位点设计试剂盒对可疑患者进行测序及比对，从而明确患者诊断，修正治疗方案。但目前MFS的突变数据库仍不完善。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供检测FBN1基因突变位点c.G3901T的试剂在制备诊断马凡综合征的试剂盒中的应用。本专利技术本专利技术通过进行基因检测可及时对患者作出明确诊断，改变马凡综合征患者治疗策略，并有助于确定可能受累的家庭成员，改变患者的随访频率。
[0007]本专利技术提供了检测FBN1基因突变位点c.G3901T的试剂在制备诊断马凡综合征的试剂盒中的应用。
[0008]优选的是，所述突变位点在FBN1基因第32外显子上。
[0009]本专利技术还提供了一种诊断马凡综合征的引物，所述引物的核苷酸序列如 SEQ ID NO.1～2所示。
[0010]本专利技术还提供了一种诊断马凡综合征的试剂盒，所述试剂盒包括上述技术方案所述的引物和反应试剂。
[0011]优选的是，所述反应试剂包括：TaKaRa LA10
×
LA Taq Buffer II 和dNTP。
[0012]本专利技术还提供了一种马凡综合征相关突变基因，所述基因在FBN1基因的基础上进
行以下突变得到：c.G3901T：编码区第3901位碱基G突变成T。
[0013]本专利技术提供了检测FBN1基因突变位点c.G3901T的试剂在制备诊断马凡综合征的试剂盒中的应用。本专利技术通过对一个马凡综合征家系进行二代全外显子测序及一代测序验证，首次确定了该家系成员第15号染色体FBN1 基因的第32外显子上存在突变位点c.G3901T。经验证，该错义突变可导致 FBN1基因第1301个氨基酸由甘氨酸转变为半胱氨酸，从而使FBN1蛋白的结构和功能受到破坏，导致马凡综合征。通过采集受检者外周血，提取基因组DNA，针对包含位点的FBN1基因片段设计上下游引物，并进行Sanger 测序，以检测受检者的FBN1基因是否存在c.G3901T突变，即可辅助马凡综合征的快速诊断；本专利技术在既往研究的基础上首次报道了FBN1基因上一个新的突变位点，补充了MFS的突变数据库，完善了MFS诊断的突变基因谱，提高MFS的检出率，进一步提高了基因检测的水平；本专利技术通过进行基因检测可及时对患者作出明确诊断，改变马凡综合征患者治疗策略，并有助于确定可能受累的家庭成员，改变患者的随访频率；本专利技术还提供了一种诊断马凡综合征的试剂盒，可用于产前胎儿马凡综合征早期诊断，患病家系可通过此试剂盒在早期对胎儿进行马凡综合征的筛查，减少从源头减少马凡综合征的发生。
附图说明
[0014]图1为本专利技术提供的Sanger测序提示马凡综合征FBN1基因c.G3901T 位点突变结果图。
具体实施方式
[0015]本专利技术提供了检测FBN1基因突变位点c.G3901T的试剂在制备诊断马凡综合征的试剂盒中的应用。本专利技术发现了一个FBN1基因突变的马凡综合征家系，经过二代全外显子测序及一代测序验证，本专利技术首次确定了该家系成员第15号染色体FBN1基因(转录本版本号：NM_000138.5)的第32外显子上存在突变位点c.G3901T。经过生物信息学分析确定了FBN1基因上错义突变c.G3901T为马凡综合征新的致病突变；此后通过对家系中其它成员进行Sanger测序，确定该位点为遗传突变位点。经验证，该错义突变导致可导致FBN1基因第1301个氨基酸由甘氨酸转变为半胱氨酸，从而使FBN1 蛋白的结构和功能受到破坏，导致马凡综合征。
[0016]本专利技术还提供了一种诊断马凡综合征的引物，所述引物的核苷酸序列如 SEQ ID NO.1～2所示：
[0017]上游引物：5
’‑
CATTGTTTTTCTGAGGGAAAGC
‑3’
(SEQ ID NO.1)；
[0018]下游引物：5
’‑
CACACCTGTACAGCCAGTTTTT
‑3’
(SEQ ID NO.2)。
[0019]本专利技术通过采集受检者外周血，提取基因组DNA，针对包含突变位点的FBN1基因片段设计上下游引物，并进行Sanger测序，以检测受检者的 FBN1基因是否存在c.G3901T突变，辅助马凡综合征的快速诊断。
[0020]本专利技术还提供了一种诊断马凡综合征的试剂盒，所述试剂盒包括上述技术方案所述的引物和反应试剂。
[0021]在本专利技术中，所述反应试剂优选包括：TaKaRa LA10
×
LATaq Buffer II和dNTP。
[0022]本专利技术还提供了一种马凡综合征相关突变基因，所述基因在FBN1基因的基础上进行以下突变得到：c.G3901T：编码区第3901位碱基G突变成T。本专利技术所述基因能够作为一种新的马凡综合征诊断标志物，可应用于马凡综合征诊断试剂盒的制备，本专利技术所述基因作为诊断标志物为带有突变位点 c.G3901T的FBN1基因片段。
[0023]下面结合具体实施例对本专利技术所述的检测FBN1基因突变位点 c.G3901T的试剂在制备诊断马凡综合征的试剂盒中的应用做进一步详细的介绍，本专利技术的技术方案包括但不限于以下实施例。
[0024]实施例1
[0025]本研究得到了中国医学科学院阜外医院伦理委员会的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测FBN1基因突变位点c.G3901T的试剂在制备诊断马凡综合征的试剂盒中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述突变位点在FBN1基因第32外显子上。3.一种诊断马凡综合征的引物，其特征在于，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1～2所示。4.一种诊断马凡综合征的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘亚欣，曲艺，张迪，胡余潇，杨春雪，王嘉怡，董雪琪，周宪梁，谭慧琼，
申请(专利权)人：中国医学科学院阜外医院，
类型：发明
国别省市：