大豆黄曲叶病毒侵染性克隆载体及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种大豆黄曲叶病毒侵染性克隆载体及其构建方法和应用，具体是在获得大豆黄曲叶病毒基因组全序列的基础上，通过基因重组的方法将两个正向重复的大豆黄曲叶病毒基因组构建到双元表达载体pBinPLUS上，重组载体通过电击转化到农杆菌菌株EHA105中，获得的病毒载体能够成功侵染大豆、本氏烟等植物。本发明专利技术为研究该病毒基因组结构和功能及病毒与寄主之间的相互作用研究提供了成熟的体系。寄主之间的相互作用研究提供了成熟的体系。寄主之间的相互作用研究提供了成熟的体系。

【技术实现步骤摘要】
大豆黄曲叶病毒侵染性克隆载体及其构建方法和应用


[0001]本专利技术涉及基因工程领域，特别是涉及一种植物DNA病毒
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双生病毒科的大豆黄曲叶病毒(Soybean yellow leaf curl virus，SbYLCV)侵染性克隆载体构建。

技术介绍

[0002]双生病毒是一类全球广泛存在的植物单链DNA病毒，大小约为18nm
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30nm，病毒粒子为双二十面体结构，无包膜。双生病毒的基因组分为单组分和双组分，基因组大小一般为2.5
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3.0Kb左右。
[0003]大豆黄曲叶病毒(SbYLCV)属于双生病毒科的单组分双生病毒，基因组全长2782bp。该病毒含有6个开放阅读框，其中病毒链编码V1和V2，互补链编码C1、C2、C3和C4。该病毒严重威胁豆科作物尤其是大豆作物的生产，植株被侵染后表现叶片卷曲、黄化和生长发育迟缓等症状。
[0004]使用抗病品种和治虫防病是防控双生病毒的重要措施，但是现有的抗性资源较少，且由于双生病毒的种类多、变异大，抗性也仅限于少数双生病毒的防控本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大豆黄曲叶病毒的侵染性克隆载体，其特征在于：所述侵染性克隆载体为pBinPLUS
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SbYLCV，由两个串联重复的大豆黄曲叶病毒SbYLCV核苷酸全序列融合到pBinPLUS载体上制备得到，所述的大豆黄曲叶病毒SbYLCV核苷酸全序列如SEQ ID NO:9所示。2.根据权利要求1所述的大豆黄曲叶病毒的侵染性克隆载体的构建方法，其特征在于，包括以下的步骤：(1)获得大豆黄曲叶病毒SbYLCV核苷酸全序列；(2)设计引物SbYLCV
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insert1/SalI
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F，SbYLCV
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insert1
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R，SbYLCV
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insert2
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F，SbYLCV
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insert2/EcoRI
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R，如SEQ ID NO:1
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4所示；使用引物对SbYLCV
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insert1/SalI
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F，SbYLCV
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insert1
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R获得约3kb的DNA片段，即插入片段1，大小为基因组的1个拷贝；使用引物对SbYLCV
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insert2
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F，SbYLCV
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insert2/EcoRI
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R获得约3kb的DNA片段，即插入片段2，大小为基因组的1个拷贝；扩增的PCR产物纯化后分别获得两个含有不同酶切位点的SbYLCV核苷酸全序列；(3)将纯化的扩增目的片段与经SalI和EcoRI双酶切的pBinPLUS载体进行重组反应，然后将...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨秀玲，周雪平，杜敏，陈诚，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：