烟草DCP1/ATG8i基因在抑制番茄黄曲叶病毒侵染中的应用制造技术

本发明专利技术公开了烟草DCP1/ATG8i基因在抑制番茄黄曲叶病毒侵染中的应用，利用农杆菌介导的表达系统，在本氏烟中单独或者共同表达烟草DCP1和ATG8i能够显著减弱番茄黄曲叶病毒的侵染，说明烟草DCP1和ATG8i基因可调控番茄黄曲叶病毒的侵染。本发明专利技术方案具有以下优势：(1)操作简易，周期较短；(2)安全高效；(3)表达效率高，表达时间长；(4)在植株叶片上过表达烟DCP1/ATG8i基因抑制番茄黄曲叶病毒的侵染，不会对植物造成损伤，保证植株的完整性。保证植株的完整性。保证植株的完整性。

【技术实现步骤摘要】
烟草DCP1/ATG8i基因在抑制番茄黄曲叶病毒侵染中的应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
，特别是涉及一种烟草DCP1/ATG8i基因在抑制番茄黄曲叶病毒侵染中的应用。

技术介绍

[0002]番茄黄曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)属于双生病毒科(Geminiviridae)菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus)，其基因组为单链环状DNA，大小约为2.8kb，病毒颗粒为孪生形态。TYLCV是发现最早、危害最严重的侵染番茄的双生病毒，目前已经传播到许多国家。
[0003]受TYLCV侵染的植株主要表现为植株矮缩，叶片黄化并且伴有皱缩，叶脉增厚，流行时可造成农作物的产量和品质下降，造成严重的农业经济损失。中国自2006年在上海发现TYLCV后，伴随贸易流通，TYLCV在我国多个省份大面积发生，且已呈扩展蔓延的趋势，严重制约着番茄的产量。
[0004]目前，由于市场上缺乏有效的化学农药可以防治TYLCV，主要通过常规育种的方法选育抗病品种防治该病毒。然而，常规育种具有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.烟草DCP1/ATG8i基因在抑制番茄黄曲叶病毒侵染中的应用。2.根据权利要求1所述的烟草DCP1/ATG8i基因在抑制番茄黄曲叶病毒侵染中的应用，其特征在于：DCP1转录本序列如SEQ ID NO:1所示，ATG8i基因转录本序列如SEQ ID NO:2所示。3.根据权利要求2所述的烟草DCP1/ATG8i基因在抑制番茄黄曲叶病毒侵染中的应用，其特征在于：抑制番茄黄曲叶病毒对烟草的侵染。4.根据权利要求3所述的烟草DCP1/ATG8i基因在抑制番茄黄曲叶病毒侵染中的应用，其特征在于：通过农杆菌介导的瞬时表达系统，在本氏烟中瞬时过表达烟草DCP1或ATG8i基因，可减轻番茄黄曲叶病毒的侵染。5.根据权利要求3所述的烟草DCP1/ATG8i基因在抑制番茄黄曲叶病毒侵染中的应用，其特征在于：通过农杆菌介导的瞬时表达系统，在本氏烟中同时瞬时过表达烟草DCP1和ATG8i基因，可显著减轻番茄黄曲叶病毒的侵染。6.根据权利要求1
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5任一所述的烟草DCP1/ATG8i基因在抑制番茄黄曲叶病毒侵染中的应用，其特征在于，包括以下步骤：(1)利用TRIzol法提取本氏烟叶片中的总RNA，利用RNA反转录试剂盒进行基因组DNA的去除与反转录，获得cDNA；(2)利用引物对NbDCP1
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F与NbDCP1
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R，NbATG8i
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F与NbATG8i
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R，以上述cDNA为模板进行PCR扩增，克隆获得NbDCP1和NbATG8i基因片段；其中，NbDCP1
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F、NbDCP1
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R、NbATG8i
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F与NbATG8i
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R引物序列如SEQ ID NO:3
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6所示；(3)利用Gateway载体将NbDCP1构建到带有Myc荧光标签的载体上，获得Myc
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NbDCP1重组质粒，将NbATG8i构建到带有YFP荧光标签的载体上，获得YFP
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NbATG8i重组质粒；(4)将1μl重组质粒加入100μl农杆菌E...

【专利技术属性】
技术研发人员：李方方，周雪平，赵斯文，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：