一种人血浆中奥贝胆酸及其代谢物的含量测定方法技术

本发明专利技术公开了一种人血浆中奥贝胆酸及其代谢物的含量测定方法，包括：

【技术实现步骤摘要】
一种人血浆中奥贝胆酸及其代谢物的含量测定方法


[0001]本专利技术涉及医药领域，具体涉及人血浆中奥贝胆酸及其代谢物的含量测定方法、一种人血浆中奥贝胆酸及其代谢物的含量测定的标准曲线的制备方法及一种人血浆中奥贝胆酸及其代谢物的含量测定的验证方法。

技术介绍

[0002]对于血浆、全血等生物样品中药物浓度的定量分析，液相色谱
‑
质谱联用技术已经得到了大量应用，同时由于生物样品中的高度复杂的各类组分会对待测物检测信号造成干扰，单纯借助质谱仪对于待测物分子母离子受碰撞能量作用后裂解为特征子离子的筛选作用不足以将待测物的检测信号从复杂的生物基质中准确、专一的选择出来进行精确定量，还需要借助蛋白沉淀、液液萃取等样品前处理技术对生物样品进行提取、净化，再借助液相色谱技术对样品进行分离，进而才能通过质谱进行检测分析。
[0003]而对于奥贝胆酸这种治疗胆汁淤积性肝病药物的生物分析，由于除了其本身以外一般还要求对其两种代谢产物甘氨酰奥贝胆酸和牛磺酰奥贝胆酸进行血药浓度的准确分析，因此力争在一套分析方法内同时对三种待测物进行定量是简化检本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人血浆中奥贝胆酸及其代谢物的含量测定方法，包括：
①
将待测血浆样品加入测试管；
②
向测试管中加内标工作溶液，混匀；
③
向管中加乙酸水溶液，混匀后得混合血浆样品；
④
混合血浆样品离心分离；
⑤
活化固相萃取孔板；
⑥
取
④
离心后的上清液，上样至
⑤
活化后的固相萃取孔板；
⑦
淋洗上样后的固相萃取孔板；
⑧
洗脱淋洗后的固相萃取孔板；
⑨
收集洗脱液；
⑩
洗脱液在氮气中吹干，加入复溶剂复溶，振摇混匀，然后离心分离，得上清液；采用液质联用仪分析测定上清液，得到响应结果；将得到的响应结果，代入标准曲线中计算。2.根据权1所述的人血浆中奥贝胆酸及其代谢物的含量测定方法，其特征在于，所述内标工作溶液，其奥贝胆酸
‑
d5浓度为50ng/mL，甘氨酰奥贝胆酸
‑
d5浓度为25ng/mL，牛磺酰奥贝胆酸
‑
d5浓度为12.5ng/mL；或所述乙酸水溶液为0.05％乙酸水溶液；或所述
④
和
⑩
中，离心分离为4℃，2120g离心分离10分钟；或所述
⑤
中，活化为：甲醇1mL
×
1次，0.05％乙酸水溶液1mL
×
1次；或所述
⑦
中，淋洗条件为：20％甲醇水溶液1mL
×
1次；或所述
⑧
中，洗脱条件为：0.05％乙酸90％甲醇水溶液0.9mL+0.05％乙酸甲醇溶液0.3mL。3.根据权1或2任一所述的人血浆中奥贝胆酸及其代谢物的含量测定方法，其特征在于，液质联用中，液相色谱条件为：色谱柱SHIMADZU Shim
‑
pack Velox PFPP，流动相A：0.06％甲酸水溶液，流动相B：0.06％甲酸乙腈，保留时间为奥贝胆酸约6.6min、奥贝胆酸
‑
d5约6.6min、甘氨酰奥贝胆酸约5.5min、甘氨酰奥贝胆酸
‑
d5约5.5min、牛磺酰奥贝胆酸约4.8min、牛磺酰奥贝胆酸
‑
d5约4.8min；质谱条件为：离子源电压(IS)：
‑
4500V，气帘气：35psi，第一离子源气体：50psi，第二离子源气体：50psi，碰撞气：9psi，离子源温度：500℃，碰撞气体：高纯氮气，电离模式：电喷雾，负离子模式，多反应监测模式，分离度：Q1和Q3：Unit，离子对为：奥贝胆酸Q1为419.5，Q3为419.5，DP为
‑
180V，CE为
‑
44V，EP为
‑
10V，CXP为
‑
11.5V；奥贝胆酸
‑
d5 Q1为424.4，Q3为424.4，DP为
‑
180V，CE为
‑
38V，EP为
‑
10V，CXP为
‑
11.5V；甘氨酰奥贝胆酸Q1为476.5，Q3为74.2，DP为
‑
160V，CE为
‑
80V，EP为
‑
10V，CXP为
‑
11.5V；甘氨酰奥贝胆酸
‑
d5 Q1为481.5，Q3为74.0，DP为
‑
160V，CE为
‑
85V，EP为
‑
10V，CXP为
‑
10V；牛磺酰奥贝胆酸Q1为526.4，Q3为80.1，DP为
‑
180V，CE为
‑
110V，EP为
‑
10V，CXP为
‑
11.5V；牛磺酰奥贝胆酸
‑
d5 Q1为531.4，Q3为80.0，DP为
‑
180V，CE为
‑
115V，EP为
‑
10V，CXP为
‑
12V。4.根据权1
‑
3任一所述的人血浆中奥贝胆酸及其代谢物的含量测定方法，其特征在于，所述
⑩
中，氮气温度为50℃；或所述复溶剂为25％乙腈溶液。
5.一种人血浆中奥贝胆酸及其代谢物的含量测定的标准曲线的制备方法，包括：
①
将标准曲线样品加入测试管；
②
向测试管中加内标工作溶液，混匀；
③
向管中加乙酸水溶液，混匀后得混合血浆样品；
④
混合血浆样品离心分离；
⑤
活化固相萃取孔板；
⑥
取
④
离心后的上清液，上样至
⑤
活化后的固相萃取孔板；
⑦
淋洗上样后的固相萃取孔板；
⑧
洗脱淋洗后的固相萃取孔板；
⑨
收集洗脱液；
⑩
洗脱液在氮气中吹干，加入复溶剂复溶，振摇混匀，然后离心分离，得上清液；采用液质联用仪分析测定上清液，得到响应结果；采用Analyst1.6.3，Watson LIMS 7.5SP1处理响应结果，获得人血浆中奥贝胆酸及其代谢物的含量测定的标准曲线。6.根据权5所述的人血浆中奥贝胆酸及其代谢物的含量测定的标准曲线的制备方法，其特征在于，所述标准曲线样品为标准曲线样品A、B、C、D、E、F或G，标准曲线样品A中，奥贝胆酸100.0ng/mL，甘氨酰奥贝胆酸100.0ng/mL，牛磺酰奥贝胆酸50.00ng/mL；标准曲线样品B中，奥贝胆酸80.00ng/mL，甘氨酰奥贝胆酸80.00ng/mL，牛磺酰奥贝胆酸40.00ng/mL；标准曲线样品C中，奥贝胆酸36.00ng/mL，甘氨酰奥贝胆酸36.00ng/mL，牛磺酰奥贝胆酸18.00ng/mL；标准曲线样品D中，奥贝胆酸10.00ng/mL，甘氨酰奥贝胆酸10.00ng/mL，牛磺酰奥贝胆酸5.000ng/mL；标准曲线样品E中，奥贝胆酸2.000ng/mL，甘氨酰奥贝胆酸2.000ng/mL，牛磺酰奥贝胆酸1.000ng/mL；标准曲线样品F中，奥贝胆酸0.5000ng/mL，甘氨酰奥贝胆酸0.5000ng/mL，牛磺酰奥贝胆酸0.2500ng/mL；标准曲线样品G中，奥贝胆酸0.2500ng/mL，甘氨酰奥贝...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾实，
申请(专利权)人：四川省药品检验研究院四川省医疗器械检测中心，
类型：发明
国别省市：