超高效液相色谱-四级杆-飞行时间高分辨质谱法测定保健食品中非法添加成分的方法技术

本发明专利技术涉及超高效液相色谱

【技术实现步骤摘要】
超高效液相色谱
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四级杆
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飞行时间高分辨质谱法测定保健食品中非法添加成分的方法


[0001]本专利技术属于保健品非法添加检测
，对食品中非法添加化学成分的检测方法的开发。

技术介绍

[0002]保健食品是由天然营养成分和特殊活性物质所构成的，它区别于药品的最大一个特点是：它不含有任何药物成分, 不具备治疗的功用, 不能对人体造成任何伤害和副作用。我国GB16740
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2014《食品安全国家标准 保健食品》中第2.1 条将保健食品定义为: 声称并具有特定保健功能或者以补充维生素、矿物质为目的的食品。由于保健食品属性的特殊性, 某些商家受利益驱使, 选择在保健食品中添加违禁药物来达到提高其产品功能性的目的。随着我国人民生活水平的提高，保健意识愈发强烈，保健品成为当今社会流行的保持身体健康的产品,得到大众的喜爱。同时近些年跨境电商零售进口商品中保健食品比例逐年攀升。但保健食品虚假宣传，滥用西药成分等问题层出不穷，致使部分我国国内市场的保健食品在安全性、质量可控性上存在一定的风险，甚至在配方的科学性和保健功能上可能缺乏一定的临床验证，为人民健康生活带来安全隐患。
[0003]国家食品药品监督管理局在2009年颁布了药品补充检验标准, 规定了非法添加的11种补肾壮阳类化学药检测方法。2018年颁布了《食品中那非类物质的测定》（BJS 201805）包含了90种那非类非法添加物质。出口保健食品检验标准、国家批准的文件及国家补充检验标准采用的检测方法主要为高效液相色谱法和高效液相色谱串联质谱法，这些方法通常适合在有对照品或标准物质的情况下，对已知目标物的检测，分析成本高、研究扩展性不强。保健食品种类繁多，而且还处于增长的态势，标准中涉及到的非法添加物质的主要包括：减肥类、降糖类、降血压类、降血脂类、安神类以及壮阳类。涉及到的类别只是其中一类中的部分非法添加物，对于日益繁杂的保健品市场，添加的非法添加物类别出现多种的态势，尤其针对不法分子在保健食品中添加其他化合物的衍生物或相似物的情况，往往会因现有检测方法的局限性而导致监管困难。但高通量识别和非目标成份激素类的检测鉴定方法尚没有建立。因此迫切需要建立非法添加化学物质多剂型、多指标的定量检测方法。

技术实现思路

[0004]为了能够快速检测多种保健食品中的非法添加物，本专利技术提供了一种超高效液相色谱
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四级杆
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飞行时间高分辨质谱法测定保健食品中非法添加成分的方法，本专利技术优化样品前处理、色谱、质谱等条件，完成方法学验证，并建立相应非法添加化学物质的高分辨质谱数据库。对比高分辨质谱数据库中相应的特征碎片离子，能够对保健食品监督抽检和风险监测221种非法添加化学物质进行定性和定量风险筛查和测定。这221种非法添加物均是实际检测工作中被检测或剖析出来的成分，如西布曲明和西地那非的被检出频率最高；氟米松等激素类检测方法尚无标准。保健食品中最常见的添加物，其中包括降血糖类27种、降
血脂类6种、降血压类12种，安神类22种，减肥类30种，激素类40种，壮阳类84种。不同功能种类的221种非法添加物质能一种方法一次检测,既方便又利于操作。
[0005]本专利技术的具体技术方案是：一种超高效液相色谱
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四级杆
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飞行时间高分辨质谱法测定保健食品中非法添加成分的方法，包括如下步骤：(1)标物配置分别称取221种对照品10.0mg，用甲醇定容至10mL，配制成单标贮备液；以甲醇为溶剂，将221种单标贮备液稀释为100倍，即得10μg/mL的混合标准工作溶液；(2)建立色谱分离条件、质谱条件:仪器名称：Agilent1290InfinityIILC
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6545Q
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TOF/MS液相色谱
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质谱联用仪，配有双喷射电喷雾电离源；色谱分离条件:流动相:A相为体积分数0.1%甲酸水溶液+2mmol甲酸铵，B甲醇；流速0.4mL/min；色谱柱:ZorbaxEclipsePlusRRHDC
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（3.0x150mm1.8μm)；柱温40℃；洗脱方式为梯度洗脱；进样体积1μL；质谱条件：
本专利技术采用Zorbax Eclipse Plus RRHD C
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（3.0 x 150 mm 1.8μm) 柱，兼顾不同极性化合物性质，比较理想的实现了色谱保留和分离。221种化合物的理化性质差别大，在色谱柱上保留特征也不同，为得到理想的色谱峰及合适的分离度，对比选择了性质不同的色谱柱，考察其保留行为及分离情况。下表为不同色谱柱检测结果：结果表明: 二甲双胍、阿卡波糖、伏格列波糖、烟酸等极性较强的化合物保留性极小，容易受色谱前期极性共流出物干扰；另有氯地那非部分化合物由于结构原因，有峰形拖尾严重等情况。伪伐地那非与那莫西地那非互为同分异构体，经优化后为17.66min ,18.65min，可实现色谱基线分离。这样他们用一般的色谱柱会出现检测不准确的问题。
[0006]本专利技术采用Zorbax Eclipse Plus RRHD C
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（3.0 x 150 mm 1.8μm) 柱时兼顾不同极性化合物性质，适合检测221种物质。
[0007]本专利技术添加甲酸铵和甲酸的流动相，从而提升离子化效率和检测灵敏度。221种化合物的性质不同，检测时对流动相的要求也不同，考虑到221种化合物的色谱行为和离子化程度。最后流动相加入甲酸会提高正离子物质的灵敏度，加入甲酸铵可提高负离子物质的
灵敏度。流动相中添加低浓度甲酸铵，除了有利于提供缓冲体系外，还可以促进达格列净、曲格列酮、环格列酮等在离子化过程中产生[M
+
NH4]+
峰，从而提升离子化效率和检测灵敏度。比较0.02%、0.05%、 0.1%、0.5%甲酸水溶液发现随着甲酸浓度的增加，保留时间降低至30min以内，分辨度加大。但是当浓度增加到 0.5%以后, 检测灵敏度差。优化甲酸铵含量，比较1mmol、2mmol、3mmol，最终2mmol可以将221种物质的分离较好, 出峰时间缩短且分析时间适中，特征离子的峰型保持较好，满足221种化合物的准确检测灵敏度。最后通过优化后确定流动相及梯度洗脱程序。
[0008]本专利技术采用 All Ions MS/MS模式中设置碰撞能量获得化合物二级质谱的信息。该模式可以选择多个碰撞能通道进行采集，根据目标物的保留时间、加合离子和碎片离子的精确分子量等信息与数据库进行检索比对，最终对化合物进行确证。不同碰撞能量，增加化合物判定准确性，确认性。比如在实际工作中，我们会遇到在某个能量下，某个物质会有相同的子离子，这就需要在其他能量下扫描该物质，做再次确认。我们的方法经过三种不同碰撞能量扫描，对保健品221种非法添加化学物质进行确认。保证检测物质的准确性，避免出现假阳性的可能。
[0009]本专利技术优化确定10V、20V、40V三种能量使谱图信息量更加充分和准本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.超高效液相色谱
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四级杆
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飞行时间高分辨质谱法测定保健食品中非法添加成分的方法，其特征在于，包括如下步骤：标物配置 分别称取 221种对照品 10.0 mg，用甲醇定容至 10 mL，配制成单标贮备液；以甲醇为溶剂，将221种单标贮备液稀释为100倍，即得10 μg /mL 的混合标准工作溶液；建立色谱分离条件、质谱条件: 仪器名称：Agilent 1290 Infinity IILC
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TOF/MS 液相色谱
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质谱联用仪，配有双喷射电喷雾电离源；确认了 221种非法添加化合物的一级质谱、一级精确质荷比、同位素丰度比、保留时间和质量数误差；建立高分辨质谱数据库；在优化好的色谱分离条件下对221种非法添加化合物标准溶液进行分析，获得 221种化合物的保留时间、精确分子质量以及离子化模式，采集不同碰撞能量10，20，40 V 下的目标化合物的二级质谱图，利用Masshunter定性软件提取每个化合物3个碰撞能量下的二级谱图，同时利用分子式生成功能计算出子离子碎片的理论分子式，再将转化好的理论值导入到PCDL数据库中，从而建立高分辨质谱数据库，用于待检样品的数据库匹配确证。2.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：李莹，李伟，柳溪，杨栩，刘莹，翟雨佳，
申请(专利权)人：天津市食品安全检测技术研究院，
类型：发明
国别省市：